杨立宏
- 作品数：34 被引量：73H指数：6
- 供职机构：中国药品生物制品检定所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 肾综合征出血热疫苗大面积人群免疫的中和抗体应答被引量：6
- 1996年
- 肾综合征出血热疫苗大面积人群免疫的中和抗体应答刘文雪，杨立宏，俞永新为了解肾综合征出血热（ＮＦＲＳ）３种灭活疫苗（沙鼠肾细胞、地鼠肾细胞和鼠脑纯化疫苗）大面积人群接种后中和抗体应答情况，由各接种点选择部分接种者于免疫前、３针免疫后１４天、约１年后加强...
- 刘文雪杨立宏俞永新
- 关键词：肾综合征出血热灭活疫苗接种
- SARS灭活疫苗效力试验的研究和建立
- 自从我国爆发SARS后在我国政府的协调下对SARS的临床和流行病学等的研究取得了巨大的进展.同时由于国际间合作,我们现在已知道SARS传染病是由于一种人类的coronavirus(HCoV)传染所致,现定名为SARS-C...
- 董关木安祺刘文雪孔艳杨立宏俞永新
- 关键词：SARS疫苗流行病核酸序列
- 文献传递
- 中国黄热疫苗减毒株和世界卫生组织黄热疫苗标准株基因全序列分析被引量：5
- 2009年
- 目的研究中国黄热疫苗生产用减毒株与世界卫生组织(WHO)黄热疫苗标准株的基因序列,了解其核苷酸序列变异程度,和与其相关的氨基酸是否发生突变。方法根据基因库(GenBank)中收录的黄热病毒(Yellow Fever Virus,YFV)17D序列设计引物,提取该两株YFV的核酸,逆转录后进行聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)扩增病毒各部分基因片段,PCR产物纯化后直接测序,5'和3'端TA克隆后进行测序,然后进行遗传进化分析。经核苷酸序列测定进行序列比对分析。结果经序列测定后,进行两株YFV的序列比对,并与GenBank中收录的其它相关YFV17D疫苗株和野毒株进行序列比对,发现中国黄热疫苗生产株与WHO黄热疫苗标准株间的核苷酸序列并未发生较大变异,核苷酸和氨基酸的同源性分别约为99%和99%。其重要病毒抗原E蛋白也未发生较大突变,但发现E区与毒力密切相关的173位氨基酸发生回复突变,进一步通过系统发生分析说明两者亲缘关系十分接近。结论传代过程中,中国黄热疫苗株和WHO黄热疫苗标准株在基因水平上除个别外未发生较大改变,其基因组具有一定的稳定性。
- 李静俞永新董关木孔艳安祺杨立宏
- 关键词：黄热病毒突变
- 三种方法检测流行性出血热病毒自然感染和疫苗免疫后的抗体水平比较被引量：1
- 1994年
- 应用高密度颗粒凝集试验（ＨＤＰＡ）、反向血凝抑制试验（ＲＰＨＩ）和空斑减少中和试验（ＰＲＮＴ）三种方法对我国出血热疫苗人体免疫后和出血热病毒自然感染人体后的抗体水平进行检测比较，结果三种方法检出阳性率基本一致，但ＨＤＰＡ、ＲＰＨＩ的抗体水平较ＰＲＮＴ为高。不显性感染者的抗体水平较显性感染者低。自然感染者的中和抗体水平较疫苗免疫者高。
- 姚智慧俞永新杨立宏
- 关键词：流行性出血热抗体
- SARS灭活疫苗毒种特性和效力试验方法的研究和建立
- 2006年
- 目的验证SARS灭活疫苗生产用毒种和建立疫苗效力试验方法和评价疫苗有效性的方法和初步标准。方法将SARS灭活疫苗进行系列稀释后免疫小鼠、原液疫苗免疫家兔,用异株病毒作为攻击毒以蚀斑减少法测定血清中和抗体,并与一组SARS病人恢复期血清的中和抗体水平进行比较,初步建立疫苗的效力试验方法和评价标准。结果疫苗以不同稀释度免疫小鼠,能产生随不同稀释度疫苗相应梯度的中和抗体滴度,用原倍疫苗免疫的小鼠血清中和抗体可达495.2;原倍疫苗免疫家兔所产生的中和抗体GMT为55.0～79.9。无论是小鼠或家兔所产生的中和抗体对广东分离的病毒均较北京分离的病毒为高。南北不同区域的SARS病人恢复期血清中和抗体GMT为50.12～54.95,且发现北方人群样本的抗体高于南方人群样本。结论用小鼠和家兔作疫苗的效力试验模型具有较好的敏感性和重复性,且产生的抗体水平较高;选用的攻击病毒对多批用不同毒株生产的疫苗免疫后的动物抗体具有较高的一致性,可用于评价疫苗的效力。
- 董关木安祺刘文雪孔艳杨立宏舒跃龙王征尹卫东祝庆余
- 关键词：灭活疫苗中和抗体效力试验
- 乙型脑炎减毒株SA14-14-2全长cDNA克隆感染性的研究被引量：3
- 2010年
- 目的在获得乙型脑炎病毒(JEV)全长cDNA分子的基础上,建立感染性转录体,获得恢复病毒,为JEV致病机理、疫苗研制及分子病毒学研究提供方法。方法将全长JEV cDNA分子克隆入改造后的pBluescript KS I(I+)载体上,经T7启动子体外转录,在Lipofectamine2000介导下,将转录产物转染入BHK-21细胞,经RT-PCR、测序、间接免疫荧光试验及噬斑试验鉴定恢复病毒。结果转录产物转染BHK-21细胞后,观察到明显的细胞病变;收获恢复病毒,经RT-PCR、测序、间接免疫荧光试验及噬斑试验证实为JEV。结论已建立了JEV全长cDNA克隆经体外转录获得JEV感染性RNA的方法,为JEV分子生物学及疫苗研究等奠定了基础。
- 李静俞永新董关木安祺杨立宏孔艳景川
- 关键词：日本乙型脑炎病毒全长CDNA体外转录
- 肾综合征出血热灭活疫苗毒株84Fli株的M和S基因核苷酸序列分析
- 2009年
- 目的对肾综合征出血热灭活疫苗毒株84Fli株的M和S基因进行核苷酸序列分析,了解该毒种的基因稳定性。方法根据汉坦病毒标准株设计特异的PCR引物,用RT-PCR技术分段扩增疫苗株84FLi株的M和S基因片段,PCR产物纯化后直接测序,并进行遗传进化分析。结果疫苗株84FLi株M基因片段的核苷酸序列与GenBank中收录的HTN型毒株的M基因核苷酸序列的同源性为83.5%～99.9%,而与SEO型毒株的同源性为70.2%～72.0%。其S基因与HTN型毒株的同源性为85.9%～99.6%,与SEO型毒株的同源性为69.4%～70.8%。疫苗株84FLi株的M和S基因的氨基酸序列与GenBank中收录的HTN型汉坦病毒84FLi株M和S基因的氨基酸序列的同源性分别为99.9%和99.5%。从遗传进化树上可以看出,疫苗株84FLi株与GenBank中收录的84FLi株位于一个独立的分支上,与其他HTN型病毒亚型分布于不同分支上,与其他HTN型病毒亚型亲缘关系较远。结论肾综合征出血热灭活疫苗毒株84FLi株M和S基因片段的核苷酸和氨基酸序列未发生较大变异,说明在传代过程中该疫苗株在基因水平上并未发生较大改变。
- 李静孔艳董关木安祺杨立宏周荔葆俞永新
- 关键词：汉坦病毒M基因S基因核苷酸序列
- 非典型肺炎灭活疫苗免疫动物效果评价被引量：1
- 2004年
- 目的应用空斑减少中和试验对非典型肺炎灭活疫苗动物免疫血清进行中和抗体测定,以评价其免疫效果。方法用Vero-E6细胞接种6孔塑料细胞培养板,加两层含琼脂糖培养基,以中性红为染色剂建立空斑试验,以能减少50%的空斑为标准测定抗SARS中和抗体。结果三批非典型肺炎灭活疫苗免疫小鼠和家兔均产生较高的中和抗体。结论非典型肺炎灭活疫苗对两种动物具有良好的免疫效果。
- 安祺董关木刘文雪孔艳杨立宏
- 关键词：小鼠
- 一株强神经毒力乙脑病毒株的生物学及其分子特征被引量：4
- 2010年
- 研究一株神经毒力很强的乙型脑炎病毒株SA4株的生物学特性并进行基因组全序列分析,并找到其毒力强的分子基础。将SA4脑内接种昆明小鼠后每日观察发病和死亡鼠数并每日收取鼠脑,用空斑法检测接种后不同时间点的脑内病毒增殖滴度,同时以另一株乙脑病毒SA14按照相同方法进行平行实验作为对照。SA4株的全基因组测序序列结果与乙脑SA14株及世界各地共21株乙脑病毒的全基因组序列进行比较。结果显示,脑内接种SA4株的小鼠发病和死亡时间均比SA14株早1d,在相同时间点上SA4株的病毒滴度高0.5～1.0lgPFU/mL。SA4株与世界各地毒株基因同源性比对,核苷酸同源性为84.6%～99.0%,氨基酸同源性为95.2%～99.7%。与SA14相比,氨基酸序列存在17个位点的差异,分布于不同的区段,其中E区最多,为5个。证明SA4是一株在脑内具有较快繁殖力的神经毒力很强的毒株,其序列上17个氨基酸位点的替换很可能是其强神经毒力的分子基础。
- 刘欣玉俞永新岳广智杨立宏贾丽丽董关木
- 关键词：神经毒力全基因序列
- 反转录酶活性检测实时荧光定量PCR方法的建立
- 2010年
- 目的在传统产物增强性反转录酶(PERT)活性检测方法基础上建立检测反转录酶活性的实时荧光定量PCR方法。方法以噬菌体MS2RNA为模板,设计、合成引物和探针,并分别以连续10倍倍比稀释的AMV反转录酶(1×10-1～1×10-9U/μl)标准品催化体外反转录反应合成相应cDNA。采用实时荧光定量PCR法检测底物cDNA模板量,并获得相应的PCR荧光值曲线,分析AMV反转录酶的相对活性。同时应用传统PERT方法对cDNA进行扩增,测定该方法的灵敏度。结果将AMV反转录酶标准品连续10倍倍比稀释后催化反转录反应,实时荧光定量PCR分析所得的反转录产物cDNA,结果得到与理论值完全相符合的PCR标准荧光值曲线;定量分析结果显示,浓度为1×10-2～1×10-8U/μl的AMV反转录酶均可得到相应的荧光值。不同稀释度的AMV反转录酶,经传统PERT方法扩增后,结果显示浓度为1×10-3～1×10-7U/μl的AMV反转录酶均可见大小为112bp的阳性条带,检测灵敏度达到1×10-7U/μl。结论成功建立了基于实时荧光定量PCR技术的检测反转录酶活性的新方法,实验操作简单,具有高精确性和无污染性,为生物制品外来污染尤其是反转录病毒污染的检测提供了参考指标。
- 孔艳吴小红杨立宏安祺董关木俞永新
- 关键词：聚合酶链反应
