孙强
- 作品数：32 被引量：34H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>
- CD19蛋白截短体慢病毒表达载体的构建及其在K562细胞中的表达
- 2017年
- 目的:构建胞内段缺失的CD19蛋白截短体(CD19t)慢病毒表达载体pLVX-EF1α-CD19t-IRES-Puro,并建立稳定表达CD19t的人红白血病细胞系K562/CD19t。方法:合成CD19t基因全长,酶切产物插入慢病毒载体pLVXEF1α-IRES-Puro,将重组质粒转染293FT细胞包装病毒后感染人红白血病细胞系K562,采用Western印迹和免疫荧光技术检测CD19t在K562细胞中的表达,并通过ELISA检测K562/CD19t与CD19 CAR-Jurkat共培养上清中的IL-2浓度。结果:酶切鉴定与测序结果表明成功构建慢病毒表达载体p LVX-EF1α-CD19t-IRES-Puro;Western印迹和免疫荧光检测到K562/CD19t细胞中CD19t的表达;ELISA结果显示表达的CD19t能够刺激识别CD19的CAR-Jurkat细胞分泌IL-2。结论:构建了CD19蛋白截短体慢病毒表达载体,并在K562细胞中表达,有助于进一步构建B细胞白血病动物模型和验证CAR-T效能。
- 张峥嵘张峥嵘梁剑青梁剑青李世崇闫敏陈昭烈陈昭烈孙强
- 关键词：CD19B细胞
- RRAGD-EGFP融合蛋白在MDA-MB-436细胞中的表达定位
- 2017年
- 目的:构建RRAGD-EGFP融合基因表达载体pQCXIP-RRAGD-EGFP,并检测RRAGD-EGFP融合蛋白在MDA-MB-436细胞中的表达定位。方法:提取HEK293细胞总RNA,逆转录得到cDNA并扩增RRAGD基因,克隆入逆转录载体pQCXIP-EGFP-N1,病毒包装后感染人乳腺癌细胞系MDA-MB-436,活细胞观察其在细胞内的表达定位。结果:构建获得逆转录病毒载体pQCXIP-RRAGD-EGFP,融合蛋白RRAGD-EGFP定位于胞浆囊泡和细胞核。结论:RRAGD-EGFP融合蛋白在MDA-MB-436细胞中表达定位于胞浆囊泡,与其参与溶酶体调节功能一致,为后续分析RRAGD在cell-in-cell中的作用奠定了基础。
- 张峥嵘张峥嵘阮班展王嫚娜梁剑青梁剑青李世崇闫敏陈昭烈陈昭烈孙强
- 关键词：基因克隆
- 利用比较基因组学快速鉴定大肠埃希菌噬菌体耐受基因
- 2017年
- 噬菌体是解决致病菌多重耐药性问题的最佳选择之一,然而噬菌体的宿主特异性使得噬菌体的裂解谱有限,因此研究噬菌体宿主特异性对于噬菌体治疗应用具有重要意义。本研究通过筛选大肠埃希菌宿主菌BL21噬菌体IME253的耐受菌,结合对敏感菌和耐受菌的高通量测序,分析基因组差异,预测噬菌体耐受相关基因,发现耐受与外膜受体蛋白FepA有关。然后利用向导CRISPR/Cas9切开敏感菌fepA基因,同时利用Red同源重组系统无痕敲除fepA基因,证明fepA基因敲除可以导致细菌BL21对噬菌体IME253耐受。本实验利用比较基因组学分析平台,建立了一种宿主耐受噬菌体的分析方法,并且利用CRIPSR无痕敲除技术来验证耐受相关基因,为噬菌体治疗提供理论基础。
- 邢少贞赵飞扬孙强米志强安小平童贻刚赵宝华
- 关键词：噬菌体高通量测序CRISPR同源重组
- 我国人群感染指环病毒的高通量测序分析被引量：2
- 2016年
- 目的分析我国人群感染指环病毒的多样性,为研究指环病毒科的感染与不同疾病发生以及宿主免疫状态之间的关系提供基础资料。方法从33份血液标本中提取病毒核酸,使用多重置换扩增技术富集指环病毒核酸,然后使用Ion Torrent PGM平台进行高通量测序,并进行生物信息学分析。结果共得到226个新的指环病毒序列,包括130条全序和96个ORF1。受检血液标本均检出包括TTV,TTMDV和TTMV等指环病毒;测序显示指环病毒中81.9%为TTV,48.5%的标本感染两个属以上的指环病毒。指环病毒ORF1至少81.13%发生变异,其中TTV属内也存在75.66%的变异,13.27%的序列在NCBI的核酸数据库中同源比对未成功。进化分析显示TTV基因3型又可分为3.1、3.2、3.3等3个亚型,以往命名的基因2型是基因3.3型的一个子分枝。新型TTV中51.9%属于基因3型。结论我国人群普遍感染指环病毒,以基因3型感染居多且基因组多样性高。
- 程实范航孙强裴广倩安小平米志强张湘莉兰黄勇童贻刚
- Identification of candidate biomarkers for hepatocellular carcinoma through pre-cancerous expression analysis in an HBx transgenic mouse
- The aim of this study is to identify candidate biomarkers for the detection of hepatocellular carcinoma(HCC)th...
- 孙强
- 文献传递
- 雌激素受体β基因敲除小鼠子宫内膜异位症模型的建立被引量：3
- 2008年
- 目的建立雌激素受体β基因敲除小鼠子宫内膜异位症模型,为进一步研究雌激素受体β基因在子宫内膜异位症发生发展过程中的作用提供平台。方法用外科手术方法对16只β基因敲除小鼠进行自体子宫移植,术后14d、21d取病灶组织进行光镜观察分析。结果建模成功率达95.8%,可形成明显囊肿,内含囊液,囊肿内壁有子宫内膜上皮细胞生长。结论应用本方法可建立稳定的子宫内膜异位症转基因小鼠模型,便于研究雌激素受体β亚型及其相关基因、蛋白在子宫内膜异位症发生发展过程中的作用机制。
- 宫庭钰关铮张卓梅刘爱军孙强杨晓李亚里
- 关键词：子宫内膜异位症小鼠
- 利用蛋白质组技术快速鉴定噬菌体结构蛋白
- 2017年
- 为快速鉴定噬菌体的结构蛋白,并且发现具有新功能的蛋白,为噬菌体功能的研究提供基础。本研究用临床分离到的屎肠球菌为指示菌,从医院污水中分离到1株裂解性噬菌体,命名为v B_Efa P_IME199。对噬菌体大量培养、浓缩和纯化,然后进行蛋白质组学分析、全基因组测序,进化分析,确定该噬菌体为短尾噬菌体科,全基因组序列长为18839bp,GC含量为34.6%。在线注释预测该噬菌体基因组功能基因,注释出22个ORFs,其中11个ORFs为假想蛋白序列,其余11个ORFs的功能已知。采用质谱技术对浓缩纯化的噬菌体进行蛋白质组分析,共鉴定出11个蛋白质,其中有6个蛋白为功能已知的结构蛋白,其余为假想蛋白。本实验利用蛋白质组技术快速有效的鉴定出噬菌体的结构蛋白,建立了一种噬菌体蛋白的分析方法,为该噬菌体的基因功能研究提供了基础。
- 赵飞扬邢少贞孙强裴广倩米志强安小平童贻刚任慧英
- 关键词：噬菌体基因组学蛋白质组学
- 一种miRNA转基因小鼠模型的构建方法
- 本发明提供了一种miRNA转基因小鼠模型的构建方法，其是利用转基因技术建立了在心肌细胞内过表达miR-27b的转基因小鼠，对转基因小鼠进行系统的表型分析发现该小鼠可出现心肌肥厚和心脏功能受损，基本的病理变化与人类心脏疾病...
- 杨晓王剑侯宁孙强张彦
- 文献传递
- 高通量测序数据中病毒基因组的生物信息学分析方法探索
- 病毒是一类只能够在活着的宿主细胞内复制的感染源。病毒个体微小、构造简单，除朊病毒（仅由蛋白构成）外，病毒均由一种作为遗传物质的核酸（DNA或RNA）与蛋白质构成。病毒种类多样，宿主范围广，具有细胞结构的生物均可以是病毒的...
- 孙强
- 关键词：病毒基因组生物信息学高通量测序
- 文献传递
- 一种miRNA转基因小鼠模型的构建方法
- 本发明提供了一种miRNA转基因小鼠模型的构建方法，其是利用转基因技术建立了在心肌细胞内过表达miR-27b的转基因小鼠，对转基因小鼠进行系统的表型分析发现该小鼠可出现心肌肥厚和心脏功能受损，基本的病理变化与人类心脏疾病...
- 杨晓王剑侯宁孙强张彦
