张丽媛
- 作品数：6 被引量：16H指数：3
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- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 大豆锰超氧化物歧化酶基因在乳酸乳球菌中的分泌表达被引量：4
- 2015年
- 为使大豆锰超氧化物歧化酶(Mn superoxide dismutase,Mn SOD)在乳酸乳球菌中高效表达,将克隆的Mn SOD基因开放阅读框序列分别重组到质粒p NZ8149和经改造的质粒p NZS上,表达载体p NZ-SOD和分泌表达载体p NZS-SOD,将两者分别以电穿孔法转化乳酸乳球菌L.lactis NZ3900,经Elliker琼脂板筛选、聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)、酶切鉴定正确后,获得的两重组菌株加入Nisin进行诱导表达,对L.lactis NZ3900/p NZ-SOD和L.lactis NZ3900/p NZS-SOD的表达产物进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和酶活性对比分析。结果显示:L.lactis NZ3900/p NZS-SOD菌株表达SOD总活性约是L.lactis NZ3900/p NZ-SOD菌株的1.6倍,是L.lactis NZ3900/p NZ8149的13.5倍,且可将表达的约2/3的SOD分泌到胞外,表明经改造的乳酸菌分泌表达系统L.lactis NZ3900/p NZS能够分泌表达SOD,并增强SOD的表达。
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- 关键词：乳酸乳球菌
- 利用低温聚合酶链式反应技术提高大豆超氧化物歧化酶活性
- 2015年
- 目的:利用低温聚合酶链式反应对大豆超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的活性进行改良。方法:将6种在较低退火温度下扩增出的超氧化物歧化酶基因插入到表达载体p REP5N上,构建p PM1、p PM2、p PM3、p PM4、p PM5、p PM6表达载体,转入大肠杆菌后得到工程菌,诱导其在大肠杆菌中进行蛋白表达,并进行酶活力测定,筛选高酶活力菌株。结果:将已克隆的目的基因序列与已知的大豆Mn SOD基因序列比对分析,一致性平均为86.57%,氨基酸序列同源性平均为82.58%。对已获得的6种工程菌进行蛋白质提取,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示表达产物的分子质量约为26 k D。经1%差异水平分析,改良后的SOD酶活力均有极显著提高,平均比对照菌株的酶活力提高1.95倍。结论:本实验证明低温聚合酶链式反应是改变酶活性的一种有效方法,为超氧化物歧化酶在生产中的应用提供了技术支持。
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- 关键词：酶活力
- 玉米自交系H99与齐319幼胚愈伤组织诱导条件的优化被引量：4
- 2013年
- 以优良玉米自交系H99与齐319为研究材料,采用正交试验设计L9(34),探讨了2,4-D、CaCl2、AgNO3三个因素不同浓度组合对玉米幼胚愈伤组织形成的影响。结果表明:2,4-D、CaCl2、Ag-NO3对两个自交系胚愈伤组织诱导率均有影响,其中H99所需2,4-D、CaCl2、AgNO3最佳浓度组合为2mg/L、5mmol/L、8mg/L或2mg/L、5mmol/L、12mg/L;自交系齐319所需2,4-D、CaCl2、AgNO3的最佳浓度组合为2mg/L、4mmol/L、10mg/L或2mg/L、5mmol/L、10mg/L。本研究为基于这两个自交系的玉米遗传转化提供了优化的愈伤组织培养条件。
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- 关键词：玉米自交系愈伤组织正交试验
- 高酶活大豆MnSOD基因的改造及功能鉴定
- 超氧化物歧化酶是清除自由基及抗氧化最重要的酶，是研究自由基生命科学的奠基石。本研究利用低温PCR技术使已得到的超氧化物歧化酶基因发生随机突变，突变酶在大肠杆菌中进行表达，鉴定酶活性，筛选高酶活菌株。主要研究内容和成果如下...
- 张丽媛
- 关键词：超氧化物歧化酶
- 文献传递
- 转phyA基因玉米新种质的创制被引量：3
- 2014年
- 【目的】构建植酸酶基因(phyA)根部特异表达的重组植物表达载体,并利用其创制磷高效利用的玉米新种质.【方法】通过PCR方法从携带phyA的表达载体pCAMBIA3301中扩增出phyA表达元件ZmGLU1P-phyA-Nos,并将其插入到带有耐盐基因的中间载体pCAMBIA1301-BADH上,获得phyA根特异表达的植物表达载体:pCAMBIA1301-ZmGLU1P-phyA-Nos,通过农杆菌介导法转化玉米胚性愈伤组织,并对再生植株进行分子生物学检测分析.【结果和结论】经PCR检测获得了9株T0代阳性植株;T1代植株的抗盐筛选、PCR检测、Southern杂交检测及RTPCR检测证明了phyA已经整合到玉米基因组中,获得6株T1代阳性植株;T2代植株的RT-PCR及根组织的酶活性测定结果表明,phyA在转基因植株根部大量表达,植酸酶活性平均比对照植株提高了10.9倍,活性最高的达到5.432 U/g.植酸酶基因在转基因植株根部大量特异表达,获得了转phyA的玉米新种质,为创制磷高效利用的玉米新种质、提高玉米的产量奠定了基础.
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- 关键词：玉米植酸酶基因表达载体构建新种质
