徐洪
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 供职机构：武汉大学药学院更多>>
- 发文基金：World Health Organization更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 庚型肝炎病毒E2区cDNA在毕赤酵母中的表达及抗原性鉴定被引量：4
- 2002年
- 利用PCR技术 ,从含有庚型肝炎病毒 (GBV C HGV)包膜蛋白E2cDNA(5 5 9bp)的质粒pGEX E2中 ,扩增得到能够编码日本血吸虫谷胱甘肽硫转移酶 (GST)和GBV C HGV包膜蛋白E2的融合基因片段。将此长度为 132 4bp的DNA片段插入到酵母表达载体pPIC9K中 ,使之位于α 因子信号肽下游 ,且与之同框。通过电激转化将构建的重组表达质粒pPIC9K GST E2插入到PichiapastorisGS115菌株染色体中。筛选His+Muts 表型的转化子 ,震荡培养 ,用0 5 %甲醇诱导表达 5d后 ,在培养液中得到表达的GST E2融合蛋白。经过表达条件的优化 ,GST E2蛋白可占培养液中总蛋白的 5 0 %。通过谷胱甘肽亲和层析柱纯化 ,GST E2融合蛋白的纯度可达 95 %左右。以庚型肝炎病人血清为探针 ,进行免疫印迹及ELISA实验 。
- 王卓华叶凯徐洪马辉文童立恒彭习亮
- 关键词：庚型肝炎病毒抗原性
- 含恶性疟原虫Pf70基因片段表达载体DNA的免疫学特性
- 2003年
- 目的 研究恶性疟原虫Pf70DNA片段作为DNA疫苗候选抗原基因的可能性。方法 应用PCR方法从含有恶性疟原虫Pf70基因DNA片段的质粒pGEX Pf70中扩增出包含Pf70DNA片段的长度为 95 7bp的PCR产物。将其插入带有乙肝表面抗原基因的真核表达载体pCMV S中 ,构建出重组质粒pCMV S Pf70。用提纯的重组质粒pCMV S Pf70作为DNA免疫制剂 ,以质粒pCMV SDNA和经过谷胱甘肽亲和层析法纯化的融合蛋白GST Pf70作为对照 ,免疫昆明种小白鼠。每隔 14d加强免疫1次 ,加强免疫 2次后第 7天采小鼠全血 ,用流式细胞仪检测CD8+ T淋巴细胞和CD4 + T淋巴细胞的水平 ,以检测体液免疫和细胞免疫状况。结果 接种了重组质粒pCMV S Pf70小鼠CD8+ T淋巴细胞的绝对量增加 ,其百分比含量增加了 39% ;CD4 + T淋巴细胞的相对含量保持恒定 ,绝对量稍有增加。用ELISA法分别检测经重组质粒pCMV S Pf70免疫的小鼠和经融合蛋白GST Pf70免疫的小鼠血清中抗Pf70蛋白质的抗体滴度 ,发现前者抗体滴度约为 1∶80 0 ,远远低于后者的滴度 (1∶5 0 0 0 )。研究结果证明 ,重组质粒pCMV S Pf70DNA可以诱导小鼠产生很强的细胞免疫和相对于蛋白质免疫而言较弱的体液免疫 ;Pf70蛋白质可以诱导小鼠产生很强的体液免疫。
- 叶凯李其岚徐洪Kironde FredAlexander S马辉文
- 关键词：疟疾恶性疟原虫DNA疫苗
