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玉米1,3,4-三磷酸肌醇5/6激酶ITPK家族基因的鉴定和分析被引量：2: 2015年; 1,3,4-三磷酸肌醇5/6-激酶(ITPK)是一种在动物、植物、线虫中都比较保守的多功能酶,在生物信号传导及生长发育中起重要作用。为了充分研究玉米中ITPK家族基因系统分析、全生育期基因表达模式及逆境胁迫表达模式,利用玉米基因组数据库,通过生物信息学手段,鉴定玉米ITPK家族基因的全序列、定位和编码蛋白,通过序列比对进行进化和分类分析。利用玉米高通量芯片表达数据进行组织表达差异性、干旱胁迫和病害胁迫表达谱分析。结果表明,玉米基因组中含有6个ITPK家族基因,分布于玉米的4条染色体上。MEME保守结构域分析显示,Zm ITPK1-5均含有3个保守的ATP-grasp-4结构域,Zm ITPK6含有两个ATP-grasp-4保守结构域。进化树分析表明Zm ITPK可分为3个亚家族。各个发育阶段中,多数成员在生殖器官或营养器官中均有较高的表达量,只有Zm ITPK1在所有器官中表达量都不高。Zm ITPK2和Zm ITPK3基因受干旱胁迫处理诱导不同程度上调表达。而在生物胁迫条件下均无显著上调或下调表达。; 张中保李向龙吴忠义魏建华; 关键词：玉米保守结构域

聚乙二醇和细胞穿膜肽介导提高玉米花粉管通道法转化效率: 2022年; 为探讨花粉管通道法加聚乙二醇(PEG)介导、加细胞穿膜肽(CPPs)介导与直接导入外源基因3种方式间的转化率差异,对2种玉米自交系材料京2416和京92进行花粉管通道法转化并统计分析。结果表明,3种方式均能获得草甘膦抗性植株,在京2416受体中PEG介导较直接导入高0.45百分点,CPPs介导的较直接导入的高0.66百分点,三者间转化率差异达显著或极显著水平;对T_(0)代草甘膦抗性植株PCR进行检测,发现因外源基因丢失或沉默,草甘膦抗性植株未必都含有目的基因,因此田间筛选应与PCR检测相结合;北京市农林科学院房山转基因基地转化验证结果发现3种导入方式其草甘膦抗性率和转化率高低顺序一致,均为CPPs介导>PEG介导>对照,与海南省三亚市崖城基地转化相同,且CPPs介导和PEG介导二者间差异极显著,京2416中二者相差0.26百分点,京92中相差0.36百分点。因此,在花粉管通道法转化玉米过程中加入介导物质有助于提高转化率,且加CPPs比加PEG更具有优势。; 李向龙张中保张春郑登俞王作平吴忠义; 关键词：玉米花粉管通道法转化率

利用玉米作为生物反应器表达PEDV中和表位抗原蛋白被引量：3: 2014年; 以玉米为生物反应器,将猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)主要中和抗原表位(core neutralizing epitope,COE)基因导入玉米自交系,获得了高效表达PEDV-COE的转基因玉米稳定株系。首先,根据玉米密码子的偏好性,设计合成优化的COE编码基因,构建了植物表达载体p BAC9036。然后,利用PDS1000/He基因枪转化玉米幼胚,经过愈伤组织诱导、分化再生培养,获得71株转化再生植株,进而通过田间草甘膦抗性筛选,获得2个T1代转基因玉米稳定株系。通过PCR、RT-PCR、间接ELISA和Western blot等鉴定结果显示,COE基因已成功整合到玉米基因组并进行了转录和蛋白表达。并且种子中COE蛋白占可溶性总蛋白的0.122%和0.078%。最后,提取转基因玉米稳定株系的种子可溶性蛋白,与佐剂混合皮下注射免疫小鼠并取可溶性蛋白灌胃免疫小鼠,均可产生针对PEDV抗原的特异性抗体。获得的转基因玉米可有效表达COE蛋白,表达产物具有显著的免疫原性,为进一步研制PEDV-COE转基因玉米疫苗奠定了基础。; 满坤杨兵薛静覃湘婕周宏专徐福洲许承扬杨凤萍张立全李向龙张晓东王金洛; 关键词：猪流行性腹泻病毒转基因玉米

利用微滴式数字PCR技术分析转基因玉米抗除草剂标记基因EPSP拷贝数被引量：7: 2017年; 基于微滴式数字PCR(Droplet digital PCR,ddPCR)平台,以转基因玉米为例,建立了转基因作物(Genetically modified crops,GM crops)外源基因拷贝数分析方法,对待测样品进行了快速鉴定,并从T_0转基因玉米株系中鉴定出多个单拷贝单株。对该方法与实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qRT-PCR)方法在分析结果的准确性方面进行了比较,从试验数据可以看出,2种检测方法的结果比较一致,单拷贝检测结果高度一致;但是ddPCR试验操作更加简便,试验结果可重复性强,试验数据更加准确可靠。研究表明,ddPCR方法是一种更加便捷、快速和准确的外源基因拷贝数分析新方法,基于其在准确性和灵敏度方面的显著优势,将会在转基因作物的外源基因拷贝数分析中得到广泛的应用。; 王犇张春李向龙张中保邹华文吴忠义; 关键词：转基因玉米外源基因拷贝数

花粉管通道法转EPSPS基因创制耐草甘膦玉米种质: 2023年; 【目的】对T_(0)-T_(3)代转基因植株进行抗草甘膦EPSPS基因的筛选检测,以期得到遗传稳定的转基因株系。【方法】利用花粉管通道法将EPSPS基因转入优良自交系京92中,通过田间草甘膦筛选和分子检测鉴定外源基因在世代间的遗传表达。【结果】在田间用200 mg·L^(-1)的草甘膦除草剂筛选,T_(0)代15个抗性植株经PCR鉴定,共获得10个阳性植株,转化率为1.03%;对各株系从T_(1)代到T_(3)代逐代筛选淘汰,株系内阳性株数逐渐增多,在T_(3)代5个株系中分离出K3和K8两个整合了EPSPS外源基因的稳定遗传株系;进一步对K3和K8两个株系的T_(3)代采用试纸条进行功能表达分析,发现目的基因均能正常表达。【结论】K3和K8两个转基因玉米株系后期可作为培育耐草甘膦的基础材料。; 李向龙郑登俞张春张中保吴忠义; 关键词：玉米花粉管通道法

通过去除花丝确定玉米花粉管通道形成时间被引量：4: 2018年; 为研究不同玉米材料花粉管通道形成时间,对S173、S192等2个玉米材料在授粉后去除花丝统计结实粒数,确定其花粉管通道形成的时间段。结果表明,雌穗结实顺序为中部、下部、顶部,结实过程需要一段时间; 2个材料结实均在授粉后15 h开始,之后在一定时间段内结实粒数呈明显上升趋势,但该趋势因温度不同而有差异;相同温度条件下,S192结实要早于S173,不同温度条件下同一材料温度越高结实越早,说明温度对不同材料结实起始时间有很大影响;通道形成时间段验证试验中,在满足温度条件下,通道形成时间段内转化所得阳性株率要高于非时间段内。; 李向龙张中保张春吴忠义; 关键词：玉米花粉管通道结实粒数淀粉温度变化

转基因玉米试管苗移栽影响因素及移栽技术要点被引量：3: 2016年; 在海南省三亚地区,通过转基因技术获得规模化的转基因玉米试管苗的移栽成活率往往不高,这主要由其自身条件和外界环境引起的。该研究探讨了影响三亚地区转基因玉米试管苗移栽成活率的因素及移栽技术要点,为提高试管苗在三亚地区的移栽成活率提供参考依据。; 李向龙张中保张春吴忠义; 关键词：转基因移栽成活率影响因素

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李向龙