张春
- 作品数：9 被引量：34H指数：4
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- 转基因玉米试管苗移栽影响因素及移栽技术要点被引量：3
- 2016年
- 在海南省三亚地区,通过转基因技术获得规模化的转基因玉米试管苗的移栽成活率往往不高,这主要由其自身条件和外界环境引起的。该研究探讨了影响三亚地区转基因玉米试管苗移栽成活率的因素及移栽技术要点,为提高试管苗在三亚地区的移栽成活率提供参考依据。
- 李向龙张中保张春吴忠义
- 关键词：转基因移栽成活率影响因素
- 聚乙二醇和细胞穿膜肽介导提高玉米花粉管通道法转化效率
- 2022年
- 为探讨花粉管通道法加聚乙二醇(PEG)介导、加细胞穿膜肽(CPPs)介导与直接导入外源基因3种方式间的转化率差异,对2种玉米自交系材料京2416和京92进行花粉管通道法转化并统计分析。结果表明,3种方式均能获得草甘膦抗性植株,在京2416受体中PEG介导较直接导入高0.45百分点,CPPs介导的较直接导入的高0.66百分点,三者间转化率差异达显著或极显著水平;对T_(0)代草甘膦抗性植株PCR进行检测,发现因外源基因丢失或沉默,草甘膦抗性植株未必都含有目的基因,因此田间筛选应与PCR检测相结合;北京市农林科学院房山转基因基地转化验证结果发现3种导入方式其草甘膦抗性率和转化率高低顺序一致,均为CPPs介导>PEG介导>对照,与海南省三亚市崖城基地转化相同,且CPPs介导和PEG介导二者间差异极显著,京2416中二者相差0.26百分点,京92中相差0.36百分点。因此,在花粉管通道法转化玉米过程中加入介导物质有助于提高转化率,且加CPPs比加PEG更具有优势。
- 李向龙张中保张春郑登俞王作平吴忠义
- 关键词：玉米花粉管通道法转化率
- 利用微滴式数字PCR技术分析转基因玉米抗除草剂标记基因EPSP拷贝数被引量：7
- 2017年
- 基于微滴式数字PCR(Droplet digital PCR,ddPCR)平台,以转基因玉米为例,建立了转基因作物(Genetically modified crops,GM crops)外源基因拷贝数分析方法,对待测样品进行了快速鉴定,并从T_0转基因玉米株系中鉴定出多个单拷贝单株。对该方法与实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qRT-PCR)方法在分析结果的准确性方面进行了比较,从试验数据可以看出,2种检测方法的结果比较一致,单拷贝检测结果高度一致;但是ddPCR试验操作更加简便,试验结果可重复性强,试验数据更加准确可靠。研究表明,ddPCR方法是一种更加便捷、快速和准确的外源基因拷贝数分析新方法,基于其在准确性和灵敏度方面的显著优势,将会在转基因作物的外源基因拷贝数分析中得到广泛的应用。
- 王犇张春李向龙张中保邹华文吴忠义
- 关键词：转基因玉米外源基因拷贝数
- 植物转录因子AP2/ERF家族蛋白结构和功能的研究进展被引量：9
- 2022年
- AP2/ERF(APETALA2/ethylene responsive factor)转录因子家族均含有1-2个由60个左右的氨基酸所构成的AP2/ERF结构域。按照AP2/ERF结构域的个数以及是否含有其他结构域,将其分为AP2(APETALA2)、乙烯响应因子(ERF)、脱水响应元件结合蛋白(DREB)、RAV和Soloist五个亚家族。该家族在植物生长发育以及响应生物胁迫和非生物胁迫等方面起重要作用。概括了AP2/ERF转录因子的结构功能特点,以及近年来AP2/ERF家族蛋白参与植物生长发育以及对逆境响应等方面的进展,为该类转录因子今后的研究提供帮助。
- 悦曼芳张春吴忠义
- 关键词：转录因子激素生长发育逆境胁迫
- 花粉管通道法转EPSPS基因创制耐草甘膦玉米种质
- 2023年
- 【目的】对T_(0)-T_(3)代转基因植株进行抗草甘膦EPSPS基因的筛选检测,以期得到遗传稳定的转基因株系。【方法】利用花粉管通道法将EPSPS基因转入优良自交系京92中,通过田间草甘膦筛选和分子检测鉴定外源基因在世代间的遗传表达。【结果】在田间用200 mg·L^(-1)的草甘膦除草剂筛选,T_(0)代15个抗性植株经PCR鉴定,共获得10个阳性植株,转化率为1.03%;对各株系从T_(1)代到T_(3)代逐代筛选淘汰,株系内阳性株数逐渐增多,在T_(3)代5个株系中分离出K3和K8两个整合了EPSPS外源基因的稳定遗传株系;进一步对K3和K8两个株系的T_(3)代采用试纸条进行功能表达分析,发现目的基因均能正常表达。【结论】K3和K8两个转基因玉米株系后期可作为培育耐草甘膦的基础材料。
- 李向龙郑登俞张春张中保吴忠义
- 关键词：玉米花粉管通道法
- 玉米ZmbHLH161基因的克隆及功能研究被引量：10
- 2020年
- bHLH转录因子是植物第二大转录因子家族,在调节植物生长发育、信号转导和逆境胁迫响应等方面发挥着重要的作用。为了研究玉米bHLH家族基因在逆境胁迫响应中的功能,本研究从玉米根组织中克隆了ZmbHLH161(AC:NC_AQK75074)基因。生物信息学分析表明:该基因包含3个外显子, cDNA全长1460 bp,编码序列全长1059 bp,编码352个氨基酸;在玉米基因组中以单拷贝形式存在,功能未知;ZmbHLH161蛋白分子量为37.1kD,理论等电点为6.10,具有bHLH转录因子家族特有的保守结构域,但不具跨膜结构,无信号肽,为亲水性蛋白,蛋白二级结构无规则卷曲所占比例最大,为42.05%。玉米原生质体瞬时表达试验表明,ZmbHLH161定位在细胞核内。实时荧光定量PCR(qPCR)分析表明,正常生长条件下,ZmbHLH161主要在根系和幼胚中表达;在脱水和干旱处理下,ZmbHLH161在玉米苗期叶片中上调表达。转基因异源表达ZmbHLH161拟南芥株系经不同浓度NaCl处理后,其根长与野生型差异不显著,而不同浓度甘露醇处理后其根长优于野生型。由此推测ZmbHLH161基因可能参与玉米对渗透胁迫应答。
- 杨梦婷张春王作平邹华文吴忠义
- 关键词：玉米转录因子原生质体渗透胁迫
- 通过去除花丝确定玉米花粉管通道形成时间被引量：4
- 2018年
- 为研究不同玉米材料花粉管通道形成时间,对S173、S192等2个玉米材料在授粉后去除花丝统计结实粒数,确定其花粉管通道形成的时间段。结果表明,雌穗结实顺序为中部、下部、顶部,结实过程需要一段时间; 2个材料结实均在授粉后15 h开始,之后在一定时间段内结实粒数呈明显上升趋势,但该趋势因温度不同而有差异;相同温度条件下,S192结实要早于S173,不同温度条件下同一材料温度越高结实越早,说明温度对不同材料结实起始时间有很大影响;通道形成时间段验证试验中,在满足温度条件下,通道形成时间段内转化所得阳性株率要高于非时间段内。
- 李向龙张中保张春吴忠义
- 关键词：玉米花粉管通道结实粒数淀粉温度变化
- 玉米转录因子ZmbHLH91对非生物逆境胁迫的应答被引量：4
- 2022年
- bHLH(basichelix-loop-helix)是植物中一个重要的转录因子家族,在调控植物生长发育、逆境胁迫及信号转导过程中发挥着重要作用。目前,动物中大部分bHLH转录因子功能已明确,但是在植物中,尤其是玉米中的研究报道较少。在前期工作中,我们对玉米生长发育过程中的4个关键时期进行了根系表型鉴定和转录组测序分析,发现转录因子ZmbHLH91在六叶期(V6)、十二叶期(V12)和抽雄期(VT)的相邻时期间的表达均差异显著,且ZmbHLH91在V6,V12和VT这些根系生长发育活跃期的表达量较高,推测该基因可能调控玉米根系的生长发育。为探究ZmbHLH91基因在根系生长和抵抗逆境胁迫方面的作用,本研究克隆了ZmbHLH91(AC:NC_AQL05369)基因,该基因全长2112bp,具有bHLH转录因子家族特有的保守结构域。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析表明,ZmbHLH91在玉米根中的表达量最高,其在三叶期幼根中的表达量高于抽雄期成熟根。在高盐、渗透、低温以及脱水胁迫处理下,玉米幼苗中ZmbHLH91的表达均上调。在无胁迫处理的1/2 MS培养基上,ZmbHLH91异源表达拟南芥与野生型拟南芥的根长无明显差别,而在梯度浓度NaCl和甘露醇处理的培养基上,ZmbHLH91异源表达拟南芥的根均长于野生型,且差异显著;在土壤中进行干旱和高盐处理后,转基因拟南芥比野生型拟南芥表现出更好的生长状态、更高的过氧化物酶(POD)活性和更高的绿叶率。推测ZmbHLH91基因可能参与响应高盐、干旱以及渗透胁迫等逆境条件。ZmbHLH91基因在茉莉酸(jasmonic acid,JA)、脱落酸(abscisic acid,ABA)等激素处理下均上调表达,推测ZmbHLH91基因可能参与响应JA和ABA激素信号。在梯度浓度JA处理的培养基上,转基因拟南芥的根长均长于野生型,且差异显著。酵母双杂交实验表明ZmbHLH91与ZmMYC2相互作用,ZmMYC2是JA信号通路中重要的蛋白,由此推测ZmbHLH91蛋白可能参与JA信号通路。综上�
- 悦曼芳张春郑登俞邹华文吴忠义
- 关键词：玉米盐胁迫渗透胁迫信号转导
- 玉米转录因子ZmEREB211对非生物逆境胁迫的应答
- 2023年
- AP2/ERF (APETALA2/ethylene-responsive factor)转录因子是植物中最大的转录因子家族之一,在调控植物生长发育和响应逆境胁迫等方面起重要作用。探究玉米(Zea mays L.) AP2/ERF家族基因功能将为玉米新种质创制提供重要的基因资源。本研究克隆获得了ZmEREB211(GeneID:103647485)基因,利用生物信息学分析、实时荧光定量PCR等技术对该基因的基本特性、组织表达特性及响应逆境胁迫表达模式等进行了分析;对转基因拟南芥株系进行了相应逆境胁迫处理和表型鉴定。结果显示:该基因只包含1个外显子,cDNA全长为792bp,编码263个氨基酸;ZmEREB211蛋白分子量为27.9kD,理论等电点为6.01,具有AP2家族所特有的保守结构域;ZmEREB211基因在玉米根系中的表达量最高,且在幼根中的表达量高于成熟根中的表达量;同时该基因在脱水、高盐、干旱和低温等处理条件下均有不同程度的诱导表达。在分别含有不同浓度梯度的NaCl、甘露醇(mannitol)和茉莉酸(jasmonicacid,JA)的1/2MS培养基上,转ZmEREB211基因拟南芥株系的根长显著长于野生型。在干旱和高盐处理下,盆栽转基因拟南芥株系较野生型株系表现出更强的耐受性,且苗期的绿叶数显著多于野生型,过氧化物酶(POD)活性和叶绿素含量均显著高于野生型。研究表明ZmEREB211可能参与调控玉米根系生长发育,对高盐、干旱、渗透等逆境胁迫及JA激素处理均能起到正向的调控作用。本研究为进一步解析ZmEREB211在玉米中的生物学功能提供了重要的参考依据。
- 艾蓉张春悦曼芳邹华文吴忠义
- 关键词：玉米转录因子异源表达根系逆境胁迫
