李美蓉
- 作品数：11 被引量：15H指数：3
- 供职机构：北京大学第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- MS-MLPA方法在Prader-Willi综合征及Angelman综合征基因诊断中的应用被引量：5
- 2008年
- 目的检测甲基化特异性的多重连接依赖的探针扩增（MS-MLPA）方法的敏感性和可靠性，以寻求一种简单、重复性好、精确度高的用于Prader-Willi综合征（PWS）和Angelman综合征（AS）的基因诊断方法。方法DNA提取试剂盒提取基因组DNA，然后，用DNA纯化试剂盒进行纯化。用MS-MLPA试剂盒Me028对临床诊断的2例PWS和4例AS患儿进行基因检测分析。扩增的PCR产物用测序仪ABI310进行基因型分析，最终所得数据用GeneMarkeT软件进行分析。MS-MLPA的检测结果用甲基化特异性聚合酶链反应进行验证。结果4例As中3例源于母源染色体15q11-q13缺失，1例源于父源染色体15q11-q13单亲二倍体或印记中心缺陷；2例PWS中1例源于父源染色体15q11～q13缺失，1例尚不能明确原因。结论MS-MLPA是一种简单、高效、准确、可靠的基因检测方法。
- 李美蓉王小竹刘晓燕杨艳玲包新华张月华熊晖钟南秦炯吴希如潘虹
- 关键词：ANGELMAN综合征甲基化特异性聚合酶链反应
- 中国人群Rett综合征患儿MECP2和CDKL5基因的突变分析
- 目的:Rett综合征是一个X连锁的神经发育性遗传病,主要累及女孩,发病率为1／10．000- 15．000。1999年,Amir等通过定位功能候选的方法发现甲基化CoG结合蛋白2基因(methyl-CpG- bindin...
- 李美蓉潘虹包新华张玉稚吴希如
- 文献传递
- 26例不典型Rett综合征MECP2基因的突变分析被引量：6
- 2006年
- 目的了解不典型Rett综合征患儿MECP2基因的突变频率、突变类型、是否存在突变热点,寻找基因型和表型的相互关系。方法取26例不典型Rett综合征患儿外周静脉抗凝血,采用Miller′s蛋白酶K氯化钠盐析法提取基因组DNA,采用PCR方法扩增MECP2基因的外显子及结合区,1%的琼脂糖凝胶电泳鉴定目的PCR产物,然后进行DNA直接测序。DNA测序结果与人基因组序列(GeneBankAF030876)比较。结果26例不典型Rett综合征患儿中有12例存在突变。突变类型包括错义突变,由于单个碱基缺失导致的移码突变和剪切位点的突变,其中错义突变为最常见类型。c·397C>T为3例,c·473C>T、c·916C>T、c·806delG各为2例,c·397A>G、c·1005G>A、c·IVS2-2A>T各为1例。结论不典型Rett综合征患儿存在MECP2基因突变,R133C、T158M和R306C为其热点突变。基因突变类型和表型之间有一定的相关性。
- 李美蓉潘虹包新华张玉稚姜胜玲吴希如
- 关键词：RETT综合征非组蛋白DNA结合蛋白质类
- Rett综合征患儿甲基化CpG结合蛋白2基因和细胞周期依赖性激酶样5蛋白基因的突变被引量：1
- 2009年
- 目的了解Rett综合征（RTT）患儿甲基化CpG结合蛋白2基因（MECP2）和细胞周期依赖性激酶样5蛋白基因（CDKL5）突变及热点突变，建立适合临床诊断的检测方法和策略。方法对1987至2007年北京大学第一医院儿科神经专业组诊断的177例散发RTT患儿抽取外周抗凝血提取DNA，用PCR—DNA测序方法对MECP2的全部外显子进行突变筛查，如未发现突变，用多重连接依赖的探针扩增（MLPA）法进行基因剂量分析。对MECP2未发现突变的患儿用变性高效液相色谱法（DHPLC）进行CDKL5突变筛查。结果在177例患儿中发现145例MECP2突变，1例CDKL5突变，总的突变率82％。MECP2突变中错义突变频率最高（39％）；其后依次为无义（28％）、移码（17％）和大片段缺失突变（14％）。所有突变中8种最常见突变依次为P．T158M（13％）、pR168X（12％）、c．806delG（7％）、p.R255X（6％）、p.R270X和p.R133C各（5％）、p.R306C（4％）、p.R106W（3％）。11％的患儿存在一个或多个外显子的缺失。结论中国R1T患儿MECP2突变谱和国外报道相似，有热点突变。c．806delG是中国人群特有的一个热点突变。
- 李美蓉潘虹包新华朱兴旺曹广娜张玉稚吴希如
- 关键词：RETT综合征细胞周期蛋白质依赖激酶类突变
- 大鼠Mecp_2基因的RNA干扰有效序列筛选
- 2006年
- 目的：以RNAi技术寻找抑制大鼠Mecp2基因表达的有效序列。方法：首先构建大鼠Mecp2基因与红色荧光蛋白（RFP）的融合基因表达质粒，然后分别与针对大鼠Mecp2基因的4个备选小干扰RNA（siRNA，small interference RNA）共转染HEK293T细胞，构成外源基因系统，以此对于4个备选的siRNA对大鼠Mecp2基因的抑制有效性进行筛选。然后将筛选到的有效序列siRNA转染自身表达大鼠Mecp2基因的PC12细胞，以免疫荧光染色显示大鼠Mecp2蛋白的表达情况，通过内源大鼠Mecp2基因表达被抑制的情况验证所筛选序列的RNA干扰有效性。结果：针对大鼠Mecp2基因mRNA918—936位核苷酸的siRNA（序列：5＇-GCUGUGAAGGAAUCUUCUA-3’）是对大鼠Mecp2基因进行RNA干扰的有效序列。此有效siRNA序列所在的位置相当于大鼠Mecp2基因第4外显子，推测可同时抑制大鼠Mecp2α和大鼠Mecp2β的表达。且此靶序列位于大鼠Mecp2基因编码区，推测可同时抑制1．9kb和10kh的大鼠Mecp2基因mRNA的表达。结论：本研究为建立稳定的大鼠神经元Mecp2基因表达敲低的神经细胞模型和研究脑发育过程中Mecp2基因的功能打下了基础。
- 张玉稚王汉森潘虹李美蓉包新华金靖吴希如
- 关键词：DNA结合蛋白质类DNA甲基化RNA小分子干扰
- Rett综合征X染色体失活方式及失活X染色体起源研究被引量：3
- 2006年
- 目的研究 Rett 综合征(RTT)患儿和其母亲 X 染色体失活(XCI)方式,患儿失活 X染色体来源,探讨 RTT XCI 与基因型、表型和遗传方式之间的关系。方法对55例 RTT 患儿、53例RTT 患儿的母亲、48例正常女性对照,提取其周围血白细胞 DNA,经甲基化敏感性限制性核酸内切酶HpaⅡ消化,对消化前后雄激素受体(AR)基因片段行 PCR 扩增和基因扫描分析。结果 RTT 患儿、RTT 患儿母亲、正常对照 AR 基因片段杂合率分别为82%、77%、83%。RTT 患儿 XCI 分布方式与患儿母亲及对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),RTT 患儿母亲与正常对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。与患儿母亲及对照组相比,RTT 患儿在50:50～59:41区段内患儿人数显著减少,差异有统计学意义(P<0.05)。RTT 患儿非随机失活在 XCI≥65:35和≥80:20范围与母亲及对照组相比人数增多,但差异无统计学意义(P>0.05)。在21例非随机失活的患儿中,18例倾向于父源 X 染色体失活,占85.7%,3例倾向于母源。在同一突变位点可以观察到各种 XCI 方式,T158M 高度非随机失活率略高,R133C 无高度非随机失活。非典型 RTT 比典型 RTT 高度非随机失活率增高,其中保留语言型与先天型相比,高度非随机失活率略高。结论 RTT 患儿 XCI 分布方式与及母亲及对照组相比,完全随机失活人数显著减少,但在非随机失活人数上差异无统计学意义。母亲作为携带者传递致病基因不是 RTT 主要的遗传方式。RTT 患儿非随机失活的 X 染色体主要起源于父亲。RTT 患儿的 XCI 方式与临床表型有一定相关性,但 XCI 并不能完全解释表型。
- 姜胜玲包新华宋福英潘虹李美蓉吴希如
- 关键词：RETT综合征基因型表型
- 长片段PCR-DNA测序方法在Rett综合征诊断中的应用
- 2007年
- 目的探讨利用长片段 PCR-DNA 测序方法检测 Rett 综合征(RTT)患儿 MECP2基因突变的可行性及临床意义。方法对40例临床诊断的 RTT 患儿用盐析法从外周血提取基因组DNA,采用长片段 PCR 同时扩增 MECP2基因的第3和第4外显子,用1.5%的琼脂糖凝胶鉴定扩增目的片段的大小,进行 DNA 直接测序。结果在40例 RTT 患儿中有33例患儿 MECP2基因存在突变:无义突变16例;错义突变14例;缺失突变3例,其中有一例为314 bp 的大片段基因缺失。突变以p.T158M 最为多见,占21%(7/33),其后依次为 p.R255X,占12%(4/33),p.R168X 和p.R106W 各占9%(3/33),p.R270X 和 p.Y141X 各占6%(2/33),p.R133C、p.D156H、p.F157L、p.P225R、p.Q244X、p.Q262X、p.R294X、p.R306C、P322L、c.1005delG、c.1005-1318del 314 bp 和 c.1127-1179del 53bp 各占3%(1/33)。结论长片段 PCR 方法鉴定了83%(33/40)的 RTT 患儿存在 MECP2基因突变,目前是一种简单、方便、快速、准确的基因诊断方法,能同时发现常见突变和基因大片段的缺失,有助于 RTT 的诊断。
- 李美蓉潘虹包新华曹广娜吴希如
- 关键词：RETT综合征聚合酶链反应DNA结合蛋白质类
- 散发Rett综合征患儿新生MECP2突变亲源鉴定和X染色体失活15例分析
- 2009年
- 目的了解Rett综合征（RTT）患儿致病基因甲基化CpG结合蛋白2基因（MECP2）的突变亲源起源和X染色体失活（XCI）的影响。方法选取15例临床典型RTT并经DNA测序证实存在新生MECP2突变和一个已知单核苷酸多态性位点的患儿，分别对患儿及父母外周血DNA进行等位基因特异性PCR扩增，通过DNA测序和凝胶电泳判定患儿突变的亲源起源；用雄激素受体基因（AR）的三核苷酸多态性进行基因型分析判定XCI是否发生偏斜和失活X染色体的亲源性。结果15例RTT患儿中13例是由于C→T碱基转换引起的点突变，2例为移码突变。13例点突变患儿的突变全部来自父源，2例移码突变中1例突变来自父源，另外1例来自母源。突变来自父源的RTT患儿占选取病例总数的93．3％；XCI分析除2例由于无AR多态性信息无法判定外，其余13例中有8例XCI为随机失活，5例为非随机失活。5例非随机失活的患儿均表现为父源X染色体优先失活。结论散发RTT患儿新生MECP2突变几乎全部来自其父源X染色体，XCI多为随机失活，部分非随机失活均表现为其父源X染色体优先失活。
- 朱兴旺潘虹李美蓉包新华张晶晶吴希如
- 关键词：RETT综合征X染色体失活染色体畸变
- Rett综合征患儿2例MECP2基因大片段缺失突变分析被引量：1
- 2006年
- 目的研究Rett综合征患儿2例MECP2基因用常规突变筛查方法未检出异常者是否存在大片段的缺失突变。方法用标准的盐析法从外周血提取基因组DNA,用多重连接依赖的探针扩增法(MLPA)进行突变分析,对存在突变的样本进一步用长片段PCR-DNA直接测序进行验证,同时确定突变在基因组序列中的位置。结果2例典型的Rett综合征患儿发现第四外显子有大片段缺失突变。例1用MLPA方法发现在第四外显子的4d探针位置存在缺失,长片段PCR-DNA直接测序证实在cDNA的第905至1138位之间缺失234个核苷酸,并且插入三个核苷酸(c.905-1138delinsCAC);例2用MLPA方法发现在第四外显子的4d和4a探针位置存在缺失,长片段PCR-DNA直接测序证实在cDNA的第1047至1198位之间缺失152个核苷酸(c.1047-1198del152)。结论对于常规的突变筛查不能检出MECP2有突变的Rett综合征患儿,进一步进行MLPA筛查是必要的。MLPA不仅简便、快速,而且能够发现大片断缺失。
- 李美蓉潘虹包新华张玉稚吴希如
- 关键词：RETT综合征聚合酶链反应
- 大鼠Mecp2基因的RNA干扰有效序列筛选
- 为建立稳定的大鼠神经元甲基化CpG结合蛋白2基因(Methyl-CpG-binding protein 2,MECP2)表达敲低的细胞模型,研究脑发育过程中MECP2基因功能,本研究旨在以RNA干扰(RNA interf...
- 张玉稚王汉森潘虹李美蓉包新华金靖吴希如
- 文献传递
