王克勤
- 作品数：26 被引量：18H指数：2
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院基础医学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家攀登计划国家自然科学基金上海市科学技术委员会资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 树鼩肝组织cDNA文库的快速构建被引量：1
- 1998年
- 目的:为了研究不易感动脉粥样硬化动物树鼩多种载脂蛋白的基因分子结构,我们在国内外首次快速构建了树鼩肝细胞cDNA文库。方法:采用一步法提取树鼩肝细胞总RNA;以寡核胸苷酸为吸附介质,柱层析法进一步纯化mRNA。以此为模板,利用改良的cDNA快速合成方法,反转录合成树鼩肝细胞cDNA第一、二链。对cDNA双链末端修饰,连接含双酶切位点的连接子后重组于噬菌体载体。结果:包装后获得2.1×10~6高滴度的树鼩肝细胞cDNA文库,放射自显影显示合成的cDNA产物大小在400～5000个核苷酸之间,该文库的克隆重组率为98.5％以上,PCR扩增随机提取的白色噬菌斑DNA,电泳鉴定均有cDNA插入片段。以制备的两种多价抗血清为探针,从构建的cDNA文库中筛选克隆出完整的树鼩apoAI和apoCI的cDNA核苷酸序列。结论:与常规方法比较,本法简便、快速,易于操作和掌握。本研究还对应用此方法构建cDNA文库的某些环节进行了探讨。
- 吕新跃陈保生王克勤
- 关键词：CDNA文库树鼩
- 树鼩载脂蛋白CI蛋白质结构分析被引量：1
- 1998年
- 为了获得树载脂蛋白CI的蛋白质结构信息，利用相应的计算机软件及改良的Chou等方法，对从构建的树肝组织cDNA文库中克隆出的载脂蛋白CIcDNA序列进行了分析和比较，并对编码的蛋白质氨基酸序列及其二级结构、亲疏水性进行了分析和预测。结果表明，克隆出的树载脂蛋白CIcDNA序列（新基因已被GenBank接受）由380个核苷酸构成，编码翻译88个氨基酸的载脂蛋白CI前体（含26个氨基酸构成的信号肽和62个氨基酸组成的成熟蛋白），并推测出该蛋白的功能域、蛋白质的二级结构及C末端有一明显的疏水区。结果提示：树载脂蛋白CI的疏水性及结合脂质的能力强于人的载脂蛋白CI。
- 吕新跃王克勤陈保生
- 关键词：动脉粥样硬化树QU基因蛋白质结构
- 树鼩血清脂蛋白的研究 Ⅰ.树鼩血清脂蛋白的分离、提纯和某些理化性质的鉴定
- 1987年
- Barr~[1]等曾指出,血清高密度脂蛋白(HDL)含量多的人群比含量少者较少出现缺血性心脏病。近年来不少流行病学调查和实验研究都支持这一看法。 一九七五年以来,Bondjers等人证明,HDL既可促进培养细胞内胆固醇外移,又能把动脉壁内自由胆固醇动员出来,还能抑制组织对胆固醇的吸收,减少平滑肌细胞、内皮细胞及纤维母细胞对低密度脂蛋白(LDL)的摄取。这些结果表明,HDL似乎既能防止动脉粥样硬化斑块形成,又能促使斑块消退。Vesse-
- 陈保生王克勤王健美佘铭鹏夏人仪卢耀增
- 关键词：血清脂蛋白超速离心载脂蛋白HDLLDL树鼩
- 脂蛋白与动脉粥样硬化关系研究的重要里程碑被引量：9
- 1995年
- 脂蛋白与动脉粥样硬化关系研究的重要里程碑王克勤（中国医学科学院基础医学研究所，北京１００００５）一个领域内科学研究的发展和前进往往由于技术的革新和理论上的飞跃。在动脉粥样硬化研究的漫长旅途中，也有几个重要的里程碑，才使我们的研究达到了今天的水平。虽然...
- 王克勤
- 关键词：动脉粥样硬化脂蛋白病理
- 人血清载脂蛋白E的分离、提纯和鉴定(简报)
- 1987年
- 载脂蛋白E(apoE)主要存在于极低密度脂蛋白(VLDL)和高密度亚组分I(HDL)中,并较大量地存在于B-VLDL和HDLC,二种异常的脂蛋白。它能与外周组织细胞和肝细胞表面β/E受体及E受体相结合,因此apoE在上述脂蛋白及其在胆固醇的代谢中起极重要的作用,且与动脉粥样硬化的形成和消退密切相关。国外已对apoE进行了大量研究并分离提纯了人apoE,测出其一级结构,含299个氨基酸残基、分子量34000道尔顿。并从分子水平和基因水平研究了其基因结构。
- 张友明王克勤李志高陈保生
- 关键词：脂蛋白分离提纯VLDL
- 北京鸭血清HDL及apo AⅠ在胆固醇代谢中的作用
- 1997年
- 对纯化的北京鸭脂蛋白进行了电镜观察、梯度凝胶电泳、总胆固醇及卵磷脂胆固醇脂酰转移酶(LCAT)活力分布测定等研究 ,对鸭apoAⅠ的氨基酸组成、序列、亲 疏水性同人及其他动物进行了比较并初步进行了二级结构预测 .实验结果进一步证实北京鸭血清胆固醇是由高密度脂蛋白 (HDL)携带运输 。
- 尹银亮王克勤陈保生
- 关键词：胆固醇代谢北京鸭高密度脂蛋白
- 北京鸭为什么不易患动脉粥样硬化被引量：1
- 1991年
- 血浆脂蛋白异常学说在动脉粥样硬化研究中占有极为重要的地位。该学说认为,血浆中高密度脂蛋白(HDL)是心血管系统的保护性因素,其保护作用主要是通过参与胆固醇的逆相运输以及抑制低密度脂蛋白(LDL)与LDL受体的特异性结合来完成的。而血浆LDL则是致动脉粥样硬化的因素。当LDL进入细胞后。
- 武须军王克勤陈保生
- 关键词：动脉粥样硬化北京鸭
- 抗高血压药物对血浆脂蛋白代谢的影响
- 1990年
- 高脂血症、吸烟和高血压是缺血性心血管疾病的三个主要危险因素。其中高血压是个相对较容易控制的因素。目前广泛应用于临床的抗高血压药物主要有利尿剂、肾上腺素能抑制剂和血管扩张剂等。
- 武须军王克勤
- 关键词：抗高血压药脂蛋白代谢血浆
- 树鼩载脂蛋白CI cDNA及其蛋白质结构
- 1998年
- 目的:克隆获得树鼩(tree shrew,TS)载脂蛋白CI的基因及蛋白质结构。方法:分离提取TS肝组织mRNA,以此为模板,反转录构建了TS肝组织cDNA文库。利用制备的兔抗TS载脂蛋白CI多抗血清为探针筛选该文库,获得两个阳性克隆,对其进行DNA测序及序列比较。利用相应的计算机软件对推译出的该蛋白氨基酸序列及其二级结构、亲疏水性分析和预测。结果:两克隆均为TS apoCI cDNA基因。大的克隆由380个核苷酸构成,包括21 bp、95 bp组成的5’和3’非翻译区,264 bp组成的一个完整开放阅读框架,编码翻译88个氨基酸的apoCI前体,含26个氨基酸构成的信号肽和62肽的成熟蛋白。其成熟肽长度与大鼠、小鼠和狗的相应结构一致,但较人和狒狒apoCI的成熟肽多5个氨基酸。并推测出该蛋白的功能域及蛋白质的二级结构;蛋白质的疏水性强于人的apoCI。结论:上述结果为进一步研究TS apoCI基因和蛋白质的分子结构、功能奠定了基础。
- 吕新跃王克勤陈保生
- 关键词：树鼩CDNA序列
- 北京鸭肝组织cDNA文库的构建及ApoAI cDNA克隆的筛选和测序(简报)被引量：2
- 1997年
- 吕新跃陈保生王克勤
- 关键词：CDNA克隆APOAI北京鸭
