王威
- 作品数：12 被引量：38H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院微生物流行病研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人可溶性CD14及其信号转导缺失突变体的克隆表达与鉴定
- 该研究应用RT-PCR技术,从U937细胞总RNA中扩增出人可溶性CD14的cDNA片段,将其克隆至pGEM-T载体进行测序.分别克隆至pGEM-T载体进行测序.实验克隆与表达了sCD14与sCD14信号传导缺失突变体,...
- 王威
- 关键词：CD14克隆生物学活性
- 文献传递
- 可溶性CD14基因在COS-7细胞的表达被引量：2
- 2002年
- 目的 :构建重组可溶性CD14真核表达载体 ,用瞬时系统表达目的基因。方法 :将可溶性CD14基因定向克隆入真核表达质粒载体 pcDNA3.1+;DEAE -葡聚糖法转染COS - 7细胞 ,72h收集培养上清 ,Westernblot鉴定表达产物 ,ELISA检测表达水平。结果 :酶切鉴定表明重组表达载体构建成功 ;SDS -PAGE显示转染细胞可表达一分子量 5 2 .6× 10 3 u (5 3kDa)的蛋白 ;Westernblot显示 5 2 .6× 10 3 u (5 3kDa)处有免疫阳性蛋白带 ;ELISA检测表明 :转染 72h目的蛋白可达 2 .1μg/mL。 结论 :重组可溶性CD14基因可以在COS -
- 王胜朝荫俊史俊南白洁王威宋伟
- 关键词：CD14真核表达血清髓细胞
- CD14基因重组和序列分析被引量：3
- 2002年
- 目的 :对膜CD14基因进行截短突变和真核表达优化重组 ,以期得到可溶性CD14全长和最小功能段基因。方法 :根据设计合成引物 ,以膜CD14基因为模板 ,PCR扩增目的基因 ,亚克隆入pGEM -T载体 ,进行序列分析。结果 :PCR扩增分别得到 1.1和 0 .5kb的 2个基因片段 ,大小和序列同预期一致。结论 :通过PCR扩增获得重组可溶性CD14全长及最短功能段基因 ,为其结构和功能研究奠定了基础。
- 王胜朝荫俊王威史俊南王忠泽
- 关键词：基因重组CD14基因基因序列分析
- 细菌内毒素信号受体及信号转导机制研究进展被引量：1
- 1999年
- 细菌内毒素（Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，ＬＰＳ）通过分布在细胞表面的ＬＰＳ受体将其信号传递至细胞内，引发一系列胞内事件，最终激活细胞。
- 王威荫俊
- 关键词：细菌内毒素信号转导脓毒血症
- 抗大肠杆菌O157∶H7鸡卵黄抗体的制备及其被动保护作用的研究被引量：25
- 2002年
- 目的 制备鸡蛋卵黄免疫球蛋白IgG抗体 (YolkImmunoglobulin ,IgY) ,研究其对肠出血性大肠杆菌 (EHEL)O15 7∶H7的被动保护作用。方法 采用EHECO15 7∶H7933菌株制备抗原 ,免疫SPF莱杭鸡 ,用脱脂和盐析的方法 ,从其所产鸡蛋中提取IgY抗体 ,用所得抗体对乳鼠进行动物毒性试验及动物被动保护实验。结果 用酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测提取IgY抗体滴度达到 1∶2 0 0 0 0 0以上 ,SDS -聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS -PAGE)检测所提取抗体纯度及回收率较高。未发现IgY抗体对动物的毒性作用 ,被动保护实验结果表明 ,IgY抗体对乳鼠感染模型具有明显的保护作用。 结论 (1)通过常规免疫技术 ,可使SPF鸡产生高效价的IgY抗体。 (2 )脱脂和盐析是一种简便有效的IgY抗体制备方法。 (3)建立了EHECO15 7∶H7的乳鼠肠道感染模型。 (4)
- 王忠泽侯晓军荫俊宋伟张松乐王威白洁
- 关键词：大肠杆菌O157:H7卵黄抗体抗体制备
- 鼠疫耶尔森氏菌LcrV基因的克隆及序列分析被引量：1
- 2001年
- 为了研究鼠疫耶尔森氏菌 (Y .pestis)保护性抗原V蛋白 ,从基因库中查得Y .pestisLcrV基因DNA序列 ,针对序列设计合成了一对PCR扩增引物 ,以本所保存的Y .pestis菌种为模板进行基因扩增 ,结果获得长约 980bp的DNA片段。将扩增产物回收纯化 ,克隆至pGEM T载体 ,构建重组载体pGEM T/ypV ,经过PCR ,酶切鉴定 ,并对pGEM T/ypV中的V基因片段进行测序 ,分析测序结果与已知序列相同 。
- 王忠泽荫俊王威白洁侯晓军宋伟张松乐
- 关键词：鼠疫耶尔森氏菌基因克隆测序基因克隆
- 鼠疫耶尔森氏菌LcrV基因的克隆与表达研究被引量：1
- 2001年
- 目的 研究鼠疫耶尔森氏菌 (Yersiniapestis)保护性抗原V蛋白的生物学活性 ,进而研究Y .pestis的致病机理。方法 采用PCR方法 ,从Y .pestis菌种中扩增出LcrV基因片段 ,进行鉴定后 ,然后将该片段克隆于原核表达载体pBV2 2 0 ,构建成重组质粒 pBV/LcrV ,进行温控诱导表达。 结果 ( 1)获得长约 980bp的PCR片段 ,序列分析结果与已知LcrV序列相同。( 2 )SDS -PAGE检测表达产物 ,在相对分子量 3 8× 10 3处有表达条带。 ( 3 )经薄层扫描分析 ,目的蛋白条带占全菌蛋白的 3 8.4 %。 ( 4 )表达后菌体超声破碎后 ,目的蛋白主要存在于上清中。结论 获得了LcrV基因 ,并在大肠杆菌中获得了高效表达 ,表达产物主要以可溶状态存在。
- 王忠泽荫俊王威白洁侯晓军宋伟张松乐
- 关键词：鼠疫耶尔森氏菌基因克隆测序基因表达
- 可溶性CD14基因克隆及序列分析被引量：1
- 2001年
- 针对人可溶性CD14 (sCD14 )的cDNA序列设计引物 ,通过反转录PCR技术 ,从U93 7细胞中 ,扩增出编码人可溶性CD14的基因序列 ,并将其克隆至质粒pGEM T中 ,通过PCR、酶切及序列测定鉴定重组载体。结果表明获得了人可溶性CD14基因片段 ,为下一步进行CD14表达及生物学活性研究奠定了基础。
- 白洁王威荫俊王占东王忠泽
- 关键词：CD14基因克隆
- 人可溶性CD_(14)基因克隆表达及功能研究被引量：1
- 2001年
- 利用反转录PCR技术 ,从U93 7细胞总RNA中 ,扩增编码人可溶性CD1 4 的基因序列 ,构建了重组表达质粒pEF1 HisC sCD1 43 48aa;用脂质体转染法 ,实现了在真核细胞中的高效表达 ;用免疫亲和层析纯化表达产物 ,纯度达90 %以上 ;LPS刺激U93 7细胞产生CD1 4 的变化 。
- 白洁荫俊王占东王威王忠泽宋伟
- 关键词：CD14基因克隆真核表达纯化生物学功能
- 人可溶性CD_(14)基因在CHO细胞中的表达被引量：1
- 2001年
- 目的 :将人可溶性 CD14 重组基因 ,用真核表达系统进行表达 ,为进一步研究 CD14 的功能打下基础。方法 :用 PCR方法扩增 s CD14 34 8aa片段 ,将产物与载体 p EF1/ His C酶切 ,纯化 ,连接后克隆至大肠杆菌 DH5α中 ,酶切鉴定 ;将重组质粒 p EF1/ His C/ s CD14 34 8aa用脂质体转染法转染至 CHO细胞中 ,用SDS- PAGE、Westen- Blot方法进行检测。结果 :阳性重组子可以切出 10 4 4 bp大小的片段 ,得到重组质粒 p EF1/ His C/ s CD14 34 8aa;转染后的 CHO细胞裂解液 ,Westen- Blot在大小约 530 0 0附近有一条较强的特异性棕色条带 ,说明 s CD14 34 8aa基因在 CHO细胞中得到表达。在 CD14 的 N端有 5个潜在的糖基化位点 ,经真核系统表达 ,表达产物分子量与文献报道基本一致 ,证明重组蛋白糖基化完全。结论 :重组质粒p EF1/ His C/ s CD14
- 白洁荫俊王占东王威王忠泽宋伟
- 关键词：基因克隆真核表达CHO细胞重组质粒
