- 人源抗TNF-α抗体Fab基因的单链化及其表达和纯化
- 2001年
- 构建人源抗 TNF-α单链抗体基因 ,并尝试其在 E.coli中的表达和纯化 .采用人工接头 ,按 VH-linker-VL的结构将人源抗 TNF-α的 VH、VL基因拼接成单链抗体 ( Sc Fv)基因 ;并将构建好的 Sc Fv基因插入表达载体 p QE30 ;转染 E.coli M1 5,以 IPTG诱导表达 ,并用 Ni-NTA树脂纯化表达产物 .构建的 Sc Fv基因长 72 3bp,序列分析表明 ,该序列拼接正确 ;SDS-PAGE显示 ,用重组的 p QE30转化的 M1 5菌经诱导后 ,有相对分子质量 ( Mr)约为 52 0 0 0的外源蛋白表达 ,Ni-NTA树脂纯化的表达产物纯度大于 90 % .因此 ,成功地构建了人源抗 TNFα的 Sc Fv基因 ,并在 E.coli
- 袁斌白洁张广育刘一平何君王慧黄策
- 关键词：单链抗体人源抗体肿瘤坏死因子纯化
- CD14生物学特性被引量：11
- 2000年
- CD1 4在机体免疫系统的病理反应中起关键作用 ,CD1 4在人和鼠体内表达具有组织特异性和细胞特异性 ,受LPS及多种细胞因子的调节 ,以CD1 4依赖及非依赖方式诱导产生细胞因子。CD1 4介导细胞识别、吞噬LPS和一系列炎症后因子释放过程。LPS/LBP复合物与CD1 4相互作用导致细胞激活。鼠CD1 4编码区与人CD1 4具有同源性 ,对鼠CD1 4的研究可为进一步研究CD1 4功能提供理论依据。
- 白洁荫俊
- 关键词：CD14脂多糖类细胞因子肿瘤坏死因子生物学
- 可溶性CD14基因在COS-7细胞的表达被引量：2
- 2002年
- 目的 :构建重组可溶性CD14真核表达载体 ,用瞬时系统表达目的基因。方法 :将可溶性CD14基因定向克隆入真核表达质粒载体 pcDNA3.1+;DEAE -葡聚糖法转染COS - 7细胞 ,72h收集培养上清 ,Westernblot鉴定表达产物 ,ELISA检测表达水平。结果 :酶切鉴定表明重组表达载体构建成功 ;SDS -PAGE显示转染细胞可表达一分子量 5 2 .6× 10 3 u (5 3kDa)的蛋白 ;Westernblot显示 5 2 .6× 10 3 u (5 3kDa)处有免疫阳性蛋白带 ;ELISA检测表明 :转染 72h目的蛋白可达 2 .1μg/mL。 结论 :重组可溶性CD14基因可以在COS -
- 王胜朝荫俊史俊南白洁王威宋伟
- 关键词：CD14真核表达血清髓细胞
- 抗大肠杆菌O157∶H7鸡卵黄抗体的制备及其被动保护作用的研究被引量：25
- 2002年
- 目的 制备鸡蛋卵黄免疫球蛋白IgG抗体 (YolkImmunoglobulin ,IgY) ,研究其对肠出血性大肠杆菌 (EHEL)O15 7∶H7的被动保护作用。方法 采用EHECO15 7∶H7933菌株制备抗原 ,免疫SPF莱杭鸡 ,用脱脂和盐析的方法 ,从其所产鸡蛋中提取IgY抗体 ,用所得抗体对乳鼠进行动物毒性试验及动物被动保护实验。结果 用酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测提取IgY抗体滴度达到 1∶2 0 0 0 0 0以上 ,SDS -聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS -PAGE)检测所提取抗体纯度及回收率较高。未发现IgY抗体对动物的毒性作用 ,被动保护实验结果表明 ,IgY抗体对乳鼠感染模型具有明显的保护作用。 结论 (1)通过常规免疫技术 ,可使SPF鸡产生高效价的IgY抗体。 (2 )脱脂和盐析是一种简便有效的IgY抗体制备方法。 (3)建立了EHECO15 7∶H7的乳鼠肠道感染模型。 (4)
- 王忠泽侯晓军荫俊宋伟张松乐王威白洁
- 关键词：大肠杆菌O157:H7卵黄抗体抗体制备
- 鼠疫耶尔森氏菌LcrV基因的克隆及序列分析被引量：1
- 2001年
- 为了研究鼠疫耶尔森氏菌 (Y .pestis)保护性抗原V蛋白 ,从基因库中查得Y .pestisLcrV基因DNA序列 ,针对序列设计合成了一对PCR扩增引物 ,以本所保存的Y .pestis菌种为模板进行基因扩增 ,结果获得长约 980bp的DNA片段。将扩增产物回收纯化 ,克隆至pGEM T载体 ,构建重组载体pGEM T/ypV ,经过PCR ,酶切鉴定 ,并对pGEM T/ypV中的V基因片段进行测序 ,分析测序结果与已知序列相同 。
- 王忠泽荫俊王威白洁侯晓军宋伟张松乐
- 关键词：鼠疫耶尔森氏菌基因克隆测序基因克隆
- 鼠疫耶尔森氏菌LcrV基因的克隆与表达研究被引量：1
- 2001年
- 目的 研究鼠疫耶尔森氏菌 (Yersiniapestis)保护性抗原V蛋白的生物学活性 ,进而研究Y .pestis的致病机理。方法 采用PCR方法 ,从Y .pestis菌种中扩增出LcrV基因片段 ,进行鉴定后 ,然后将该片段克隆于原核表达载体pBV2 2 0 ,构建成重组质粒 pBV/LcrV ,进行温控诱导表达。 结果 ( 1)获得长约 980bp的PCR片段 ,序列分析结果与已知LcrV序列相同。( 2 )SDS -PAGE检测表达产物 ,在相对分子量 3 8× 10 3处有表达条带。 ( 3 )经薄层扫描分析 ,目的蛋白条带占全菌蛋白的 3 8.4 %。 ( 4 )表达后菌体超声破碎后 ,目的蛋白主要存在于上清中。结论 获得了LcrV基因 ,并在大肠杆菌中获得了高效表达 ,表达产物主要以可溶状态存在。
- 王忠泽荫俊王威白洁侯晓军宋伟张松乐
- 关键词：鼠疫耶尔森氏菌基因克隆测序基因表达
- 可溶性CD14基因克隆及序列分析被引量：1
- 2001年
- 针对人可溶性CD14 (sCD14 )的cDNA序列设计引物 ,通过反转录PCR技术 ,从U93 7细胞中 ,扩增出编码人可溶性CD14的基因序列 ,并将其克隆至质粒pGEM T中 ,通过PCR、酶切及序列测定鉴定重组载体。结果表明获得了人可溶性CD14基因片段 ,为下一步进行CD14表达及生物学活性研究奠定了基础。
- 白洁王威荫俊王占东王忠泽
- 关键词：CD14基因克隆
- 人可溶性CD_(14)基因克隆表达及功能研究被引量：1
- 2001年
- 利用反转录PCR技术 ,从U93 7细胞总RNA中 ,扩增编码人可溶性CD1 4 的基因序列 ,构建了重组表达质粒pEF1 HisC sCD1 43 48aa;用脂质体转染法 ,实现了在真核细胞中的高效表达 ;用免疫亲和层析纯化表达产物 ,纯度达90 %以上 ;LPS刺激U93 7细胞产生CD1 4 的变化 。
- 白洁荫俊王占东王威王忠泽宋伟
- 关键词：CD14基因克隆真核表达纯化生物学功能
- 人可溶性CD_(14)基因在CHO细胞中的表达被引量：1
- 2001年
- 目的 :将人可溶性 CD14 重组基因 ,用真核表达系统进行表达 ,为进一步研究 CD14 的功能打下基础。方法 :用 PCR方法扩增 s CD14 34 8aa片段 ,将产物与载体 p EF1/ His C酶切 ,纯化 ,连接后克隆至大肠杆菌 DH5α中 ,酶切鉴定 ;将重组质粒 p EF1/ His C/ s CD14 34 8aa用脂质体转染法转染至 CHO细胞中 ,用SDS- PAGE、Westen- Blot方法进行检测。结果 :阳性重组子可以切出 10 4 4 bp大小的片段 ,得到重组质粒 p EF1/ His C/ s CD14 34 8aa;转染后的 CHO细胞裂解液 ,Westen- Blot在大小约 530 0 0附近有一条较强的特异性棕色条带 ,说明 s CD14 34 8aa基因在 CHO细胞中得到表达。在 CD14 的 N端有 5个潜在的糖基化位点 ,经真核系统表达 ,表达产物分子量与文献报道基本一致 ,证明重组蛋白糖基化完全。结论 :重组质粒p EF1/ His C/ s CD14
- 白洁荫俊王占东王威王忠泽宋伟
- 关键词：基因克隆真核表达CHO细胞重组质粒
- 鼠疫耶尔森氏菌LcrV基因在大肠杆菌中的高效表达被引量：3
- 2001年
- 将测序后的鼠疫耶尔森氏菌 (Yersiniapestis)LcrV基因重组质粒pGEM T ypV酶切 ,克隆于原核表达载体pBV2 2 0 ,构建成pBV ypV表达质粒 ,转化大肠杆菌DH5α ,进行PCR及酶切鉴定 ,筛选阳性克隆 ,进行温控诱导表达 ,SDS PAGE检测表达产物 ,在相对分子质量 3 80 0 0处有一表达条带 ,经薄层扫描分析目的蛋白条带占全菌蛋白的3 8.4 %以上 ,主要以可溶形式存在。
- 王忠泽荫俊侯晓军宋伟张松乐王威白洁
- 关键词：鼠疫耶尔森氏菌基因表达
