王海光
- 作品数：11 被引量：28H指数：4
- 供职机构：中国兽医药品监察所更多>>
- 发文基金：引进国际先进农业科技计划国家高技术研究发展计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 检测污染兽用疫苗14种支原体PCR方法的建立及应用被引量：4
- 2014年
- 为完善兽用疫苗中支原体污染的检测技术,本研究对污染生物制品的14种常见支原体基因组进行分析,设计一对可以同时检测这14种支原体的通用引物,建立兽用疫苗中支原体污染的PCR检测方法。应用该方法对10种兽用活疫苗的61批次和10种细胞系的21份传代细胞样品进行支原体污染的检测,并与培养法、DNA荧光染色法及成品的支原体PCR检测试剂盒相比较,除成品的支原体PCR检测试剂盒的检测结果不同之外,其他3种方法的检测结果均相同。但培养法耗时长,DNA荧光染色法操作复杂,成品的支原体PCR检测试剂盒只能检测5种污染细胞的常见支原体,出现漏检情况,而本研究建立的PCR检测方法快速、准确,可以为今后兽用疫苗的支原体污染检测工作提供参考。
- 英聪王海光刘灿沈青春毕丁仁宁宜宝
- 关键词：兽用疫苗PCR检测
- 高致病性PRRSV GD疫苗株与野毒株双重荧光定量RT-PCR鉴别方法的建立被引量：4
- 2012年
- 为建立一种能够快速鉴别检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GDr180疫苗株与GD野毒株的双重荧光定量RT-PCR方法,本研究在PPRSV的Nsp2基因和Orf7基因区域分别设计不同荧光标记的MGB探针及特异性引物。这两种MGB探针能够分别特异结合GD野毒株和GDr180疫苗株。通过对PRRSV培养液、感染猪血清和组织样品检测证明了该方法的可行性;采用双重实时荧光定量RT-PCR方法检测PRRSV GDr180疫苗株和GD强毒株时敏感性分别达到19.4拷贝/μL和34.2拷贝/μL;该方法与PRRSV其他8个病毒株和猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型和猪细小病毒不发生交叉反应,表明该方法具有良好的特异性;因此可以用于PRRSV GDr180疫苗株与野毒株的鉴别检测。
- 张文利孙丰廷王海光刘灿英聪宁宜宝
- 猪瘟活疫苗效力检验替代方法的研究被引量：4
- 2015年
- 目前，我国猪瘟活疫苗效力检验最常用的方法是测定猪瘟疫苗中病毒的兔体感染量（ RID），但是用该方法易受到检验兔品种、个体和饲养环境的影响。为了探索一种不依赖动物的疫苗效力检验新方法，本研究将待检猪瘟活疫苗系列稀释后分别接种易感细胞，使用抗原捕获ELISA、RT－nestPCR和RT－PCR三种方法检测不同稀释度疫苗中活病毒在感染细胞后增殖的子代病毒，计算疫苗病毒的最高细胞感染剂量，建立了猪瘟疫苗病毒的细胞感染量（ CID）的效力检验方法。结果显示：疫苗中活病毒粒子越多，CID就越高；对不同类型猪瘟疫苗的检测结果表明，该方法适用于传代细胞源和细胞源猪瘟活疫苗的效力效检。使用CID和RID两种检测方法同时对12批猪睾丸传代细胞源（传代细胞源）和3批牛睾丸原代细胞源（细胞源）猪瘟活疫苗进行了比对效检，结果表明，用CID测定方法检验，12批猪瘟活疫苗（传代细胞源）每头份均含10^5 CID，3批猪瘟活疫苗（细胞源）每头份含量均为10^4 CID；用兔子感染体温测定法，12批猪瘟活疫苗（传代细胞源）每头份含量在2．6×10^4～3．0×10^4 RID之间，3批猪瘟活疫苗（细胞源）每头份含7．0×10^3～8．0×10^3 RID。试验证明：本实验室建立的CID检测结果与现有质量标准RID的结果存在良好的相关性，能够较好反映疫苗中活病毒的含量，有望成为RID的替代方法。
- 王海光宁宜宝赖月辉吴文福王芳刘灿张文利黄秋雪陈坚林旭埜张毓金范学政徐璐王琴赵启祖丁家波
- 关键词：猪瘟活疫苗效力检验
- 一株中等毒力牛种布鲁氏菌的鉴定和毒力测定被引量：6
- 2014年
- 【目的】对初步鉴定的牛种布鲁氏菌分离株(B.abortus 343)进行全面的生物学特性检定,为深入研究布鲁氏菌病提供参考菌株。【方法】将B.abortus 343划线培养及梯度稀释,使其形成单个菌落,观察菌落形态。挑取单个菌落进行革兰氏染色和柯氏染色,观察其染色特点;分别接种1.5×106 CFU到含硫瑾(1﹕25 000)或含碱性复红(1﹕25 000)的TSA平板上,观察其生长状态;将接种有B.abortus 343的TSA平板分别置于普通培养箱和CO2培养箱37℃培养72 h,观察其对CO2的依赖性;通过醋酸铅试纸条测定B.abortus 343代谢过程中是否释放H2S。通过平板凝集试验测定布鲁氏菌单相特异性血清(牛种布鲁氏菌单因子血清A、羊种布鲁氏菌单因子血清M和布鲁氏菌粗糙型血清R)与B.abortus 343抗原的反应性;利用布鲁氏菌AMOS-PCR种属分型等方法对B.abortus 343进行了PCR种属特性鉴定;将B.abortus 343免疫小鼠,分别测定其抗血清与光滑型和粗糙型抗原的反应性;通过小鼠和豚鼠感染试验,全面评价该分离株的毒力;分别以1×105 CFU感染6周龄Balb/c小鼠,测定B.abortus 343在小鼠体内存活时间;以1×109 CFU感染Hartley豚鼠,2周后测定试验豚鼠每克脾脏含菌量;分别以10 000、1 000、100、25 CFU/只4种不同剂量感染豚鼠,初步测定分离株对豚鼠的最小感染量(MID),在此基础上,进一步以40、60和90 CFU/只测定MID。【结果】分离株B.abortus 343为光滑型牛种布鲁氏菌,菌落逆光观察微带蓝绿色乳光;革兰氏染色为阴性,柯氏染色为红色,H2S试验阳性。该菌能在含硫瑾和碱性复红的培养基上生长,不依赖于CO2。B.abortus 343抗原能与A因子血清呈明显凝集反应,免疫小鼠后能产生特异性抗体。以1×105 CFU感染6周龄Balb/c小鼠,可在小鼠体内存活29周;以1×109 CFU感染350—400 g雌性豚鼠,14 d后豚鼠每克脾脏含菌量2.4×105—1.2×106;以1×105 CFU感染豚鼠1个月后,所有试验豚鼠均能产
- 丁家波王芳杨宏军王楠朱良全顾进华张广川王海光赵鹏程君生毛开荣冯宇
- 关键词：布鲁氏菌毒力
- 猪瘟兔化弱毒细胞源疫苗体外效检替代方法的建立和应用
- 目前,按照我国《兽药典》规定,猪瘟活疫苗效力检验有两种方法,一种是通过兔子对猪瘟兔化弱毒感染后体温升高的特性,利用替代动物兔检测猪瘟疫苗的兔体感染量( RID)来判定猪瘟活疫苗的效力；另一种方法就是用猪瘟疫苗免疫猪,然后...
- 王海光宁宜宝吴文福赖月辉王芳黄秋雪陈坚
- 关键词：免疫效力
- HP-PRRSV GD株及传代致弱毒株GDr180株在SPF仔猪体内的动态分布研究
- 本研究旨在利用实时荧光定量PCR技术对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒GD株及其传代致弱毒株GDrl80株在SPF仔猪体内动态分布的规律和特点进行研究。笔者将GD株和GDrl 80株分别人工感染35日龄SPF仔猪，后于3d...
- 刘灿英聪宁宜宝张磊王海光陈坚
- 关键词：仔猪荧光定量PCR动态监测
- 支原体污染的检测及鉴定方法研究进展被引量：5
- 2012年
- 自1956年国外学者第一次检测到细胞培养物中存在支原体污染以来,这个世界性问题持续了半个多世纪。对于生物制品中支原体污染的检测方法多种多样,但尚无统一的内控标准,而建立一种快速、准确的方法用于支原体污染的检测,可以有效地减少和预防支原体污染,从而提高生物制品的纯净性。本文对支原体污染的几种常见检测及鉴定方法进行综述,包括DNA荧光染色法、PCR、IFA与ELISA等,以期为支原体污染的检测及鉴定研究提供参考。
- 英聪刘灿王海光宁宜宝毕丁仁
- 猪瘟兔化弱毒ST传代细胞源疫苗效检替代方法和猪瘟病毒鉴别检测方法的建立
- 猪瘟(classical swine fever, CSF)是由猪瘟病毒(classical swine fever virus, CSFV)引起的高度接触性、多系统出血性猪传染病。我国对于猪瘟的防控主要以猪瘟兔化弱毒疫...
- 王海光
- 关键词：猪瘟兔化弱毒猪瘟野毒
- 文献传递网络资源链接
- 支原体污染的实验室检测及鉴定方法
- 支原体污染造成的危害非常广泛，其影响涉组织培养的细胞、鸡胚及其生产的疫苗，应当引起高度重视。本文对支原体污染的几种常见检测及鉴定方法进行综述，包括DNA荧光染色法、PCR、IFA、ELISA等，以其为支原体污染的检测研究...
- 英聪刘灿宁宜宝王海光
- 关键词：荧光染色法免疫疫苗
- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征GD强弱毒株感染对猪外周血淋巴细胞亚群的影响
- 2015年
- 为了从细胞水平探讨PRRSV GD强毒株和PRRSV弱毒疫苗接种仔猪后对其外周血淋巴细胞亚群的影响,运用血常规技术和流式细胞技术分析了猪体外周血淋巴细胞亚群的动态变化。将30日龄20头SPF猪分成3组,分别感染HP-PRRSV GD第5代强毒株、GDr180弱毒疫苗株及留作对照。于感染后第0、3、7、10、14、21、28及35天采血进行外周血淋巴细胞亚群测定,分析淋巴细胞亚群的变化。结果表明:HP-PRRSV GD强毒株感染可导致白细胞、淋巴细胞数量、单核细胞、粒细胞、B细胞、Tc细胞、Th细胞、Tm细胞、和γδT细胞数量的下降;而弱毒疫苗GDr180株免疫则表现为白细胞、淋巴细胞、单核细胞、引起粒细胞、B细胞、Tc细胞、Th细胞和Tm细胞的上升,对γδT细胞的影响不大;阴性对照组在整个检测期间各种细胞基本上保持稳定状态。从实验结果可以看出:与HP-PRRSV GD强毒株破坏免疫细胞不同,PRRSV弱毒疫苗GDr180株免疫接种能刺激猪免疫细胞增殖,给试验猪提供良好的免疫反应。
- 张文利王海光孙丰廷刘灿英聪宁宜宝
- 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征疫苗株野毒株外周血淋巴细胞亚群
