张文利
- 作品数：6 被引量：8H指数：2
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- 高致病性PRRSV GD疫苗株与野毒株双重荧光定量RT-PCR鉴别方法的建立被引量：4
- 2012年
- 为建立一种能够快速鉴别检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GDr180疫苗株与GD野毒株的双重荧光定量RT-PCR方法,本研究在PPRSV的Nsp2基因和Orf7基因区域分别设计不同荧光标记的MGB探针及特异性引物。这两种MGB探针能够分别特异结合GD野毒株和GDr180疫苗株。通过对PRRSV培养液、感染猪血清和组织样品检测证明了该方法的可行性;采用双重实时荧光定量RT-PCR方法检测PRRSV GDr180疫苗株和GD强毒株时敏感性分别达到19.4拷贝/μL和34.2拷贝/μL;该方法与PRRSV其他8个病毒株和猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型和猪细小病毒不发生交叉反应,表明该方法具有良好的特异性;因此可以用于PRRSV GDr180疫苗株与野毒株的鉴别检测。
- 张文利孙丰廷王海光刘灿英聪宁宜宝
- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征GD强弱毒株感染对猪外周血淋巴细胞亚群的影响
- 2015年
- 为了从细胞水平探讨PRRSV GD强毒株和PRRSV弱毒疫苗接种仔猪后对其外周血淋巴细胞亚群的影响,运用血常规技术和流式细胞技术分析了猪体外周血淋巴细胞亚群的动态变化。将30日龄20头SPF猪分成3组,分别感染HP-PRRSV GD第5代强毒株、GDr180弱毒疫苗株及留作对照。于感染后第0、3、7、10、14、21、28及35天采血进行外周血淋巴细胞亚群测定,分析淋巴细胞亚群的变化。结果表明:HP-PRRSV GD强毒株感染可导致白细胞、淋巴细胞数量、单核细胞、粒细胞、B细胞、Tc细胞、Th细胞、Tm细胞、和γδT细胞数量的下降;而弱毒疫苗GDr180株免疫则表现为白细胞、淋巴细胞、单核细胞、引起粒细胞、B细胞、Tc细胞、Th细胞和Tm细胞的上升,对γδT细胞的影响不大;阴性对照组在整个检测期间各种细胞基本上保持稳定状态。从实验结果可以看出:与HP-PRRSV GD强毒株破坏免疫细胞不同,PRRSV弱毒疫苗GDr180株免疫接种能刺激猪免疫细胞增殖,给试验猪提供良好的免疫反应。
- 张文利王海光孙丰廷刘灿英聪宁宜宝
- 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征疫苗株野毒株外周血淋巴细胞亚群
- 猪瘟活疫苗效力检验替代方法的研究被引量：4
- 2015年
- 目前，我国猪瘟活疫苗效力检验最常用的方法是测定猪瘟疫苗中病毒的兔体感染量（ RID），但是用该方法易受到检验兔品种、个体和饲养环境的影响。为了探索一种不依赖动物的疫苗效力检验新方法，本研究将待检猪瘟活疫苗系列稀释后分别接种易感细胞，使用抗原捕获ELISA、RT－nestPCR和RT－PCR三种方法检测不同稀释度疫苗中活病毒在感染细胞后增殖的子代病毒，计算疫苗病毒的最高细胞感染剂量，建立了猪瘟疫苗病毒的细胞感染量（ CID）的效力检验方法。结果显示：疫苗中活病毒粒子越多，CID就越高；对不同类型猪瘟疫苗的检测结果表明，该方法适用于传代细胞源和细胞源猪瘟活疫苗的效力效检。使用CID和RID两种检测方法同时对12批猪睾丸传代细胞源（传代细胞源）和3批牛睾丸原代细胞源（细胞源）猪瘟活疫苗进行了比对效检，结果表明，用CID测定方法检验，12批猪瘟活疫苗（传代细胞源）每头份均含10^5 CID，3批猪瘟活疫苗（细胞源）每头份含量均为10^4 CID；用兔子感染体温测定法，12批猪瘟活疫苗（传代细胞源）每头份含量在2．6×10^4～3．0×10^4 RID之间，3批猪瘟活疫苗（细胞源）每头份含7．0×10^3～8．0×10^3 RID。试验证明：本实验室建立的CID检测结果与现有质量标准RID的结果存在良好的相关性，能够较好反映疫苗中活病毒的含量，有望成为RID的替代方法。
- 王海光宁宜宝赖月辉吴文福王芳刘灿张文利黄秋雪陈坚林旭埜张毓金范学政徐璐王琴赵启祖丁家波
- 关键词：猪瘟活疫苗效力检验
- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立
- 2012年
- 根据GenBank公布的24株高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒毒株和5株PRRSV经典毒株的保守区基因序列,使用PrimerExpress 3.0软件设计并合成实时荧光定量PCR(Real-timeFluorescent Quantitative PCR,Real-time FQ-PCR)用引物和探针,建立了Real-time FQ-PCR检测方法以鉴别检测高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒。用建立的检测方法对已定量的10倍倍比稀释的质粒pGET-258为标准品进行检测,并与常规PCR进行比较。结果显示,该Real-time FQ-PCR方法敏感度可达1.5个拷贝,比常规PCR敏感度高100倍,且批内和批间重复性检测结果的变异系数均小于2%。用该方法与常规PCR方法及病毒分离方法对18份临床样品进行对比检测,显示该方法灵敏度高、成本低,并且能够对样品中病毒进行定量,为高致病性猪繁殖与呼吸综合征的快速鉴别诊断提供了有效的技术手段。
- 刘灿孙丰廷宁宜宝张文利王海光英聪陈坚毕丁仁
- 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征实时荧光定量PCRTAQMAN探针
- 高致病性PRRSV GD强弱毒感染猪外周血淋巴细胞亚群的变化及双重荧光定量RT-PCR鉴别方法的建立
- 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的各个年龄的猪的繁殖与呼吸障碍疾病。PRRS对养猪业危害很大，经济损失可观，世界动物卫生组织将其列为必须报告的疫病，我国将其列为二类动物疫病。在我...
- 张文利
- 关键词：猪繁殖呼吸综合征弱毒疫苗免疫机理
- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征GD强弱毒株感染猪外周血淋巴细胞亚群的变化研究
- 为了从细胞水平探讨PRRSV GD强弱毒和PRRSV弱毒疫苗感染对外周血淋巴细胞亚群的影响,为疫苗的研制提供理论依据。本研究运用血常规技术和流式细胞技术分析了PRRSV感染SPF猪后,猪体内外周血淋巴细胞亚群变化。试验将...
- 张文利王海光孙丰廷刘灿英聪宁宜宝
- 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征疫苗株野毒株外周血淋巴细胞亚群
