王淼
- 作品数：13 被引量：117H指数：9
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- GeXP多重PCR技术同时检测12种常见呼吸道病毒被引量：33
- 2011年
- 本研究建立了一种基于GeXP多重基因表达遗传分析系统的多重RT—PCR检测方法，该方法可以同时检测12种呼吸道病毒，包括流感病毒A型和B型、季节性H1N1、副流感病毒1～3型、人鼻病毒、人偏肺病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒A型和B型、人博卡病毒。针对病原体保守区序列设计12种病毒的特异性引物，分别用已验证的阳性标本为模板检验多重体系的特异性。多重检测体系在10^3拷贝／μL水平可同时检测到12种病毒。另检测24份临床标本，以realtime RT—PCR为参考标准，进一步验证检测体系。结果表明，这种基于GeXP系统的新方法灵敏度高、特异性强，可以快速同时检测12种常见呼吸道病毒。
- 李瑾毛乃颖秦萌胡秀梅杨梦婕王淼张晨许文波马学军
- 关键词：呼吸道病毒
- 基于颜色判定的环介导等温扩增技术检测HPV6和HPV16被引量：9
- 2011年
- 建立了一种基于颜色判定的简单、快速和灵敏的检测方法,即环介导等温核酸扩增技术(LAMP)应用于HPV6和HPV16亚型的检测。该技术设计分别对应于HPV6和16的E6和E7基因序列中6个区段的4条特异引物,在等温条件下(63℃)进行核酸扩增反应1h,在扩增前加入HNB染料(羟基萘酚蓝)作为反应指示剂,以HNB染料颜色的变化做为结果判定的标准,并经LA-320实时浊度仪和琼脂糖电泳证实。文中利用这种技术对13份已知的单重感染13种HPV不同亚型的临床样本进行了特异性分析,同时对2个含目的片段的克隆质粒的系列稀释物进行了灵敏度分析。结果显示LAMP方法特异性高,颜色法判断的灵敏度均为1000个拷贝DNA分子水平,比Real-time PCR低10～20倍,对62份宫颈刮片临床标本的HPV6和HPV16检出率和HPV分型试剂盒一致。因此,基于颜色判定的环介导等温扩增方法有望应用于人乳头瘤病毒HPV6和HPV16感染的快速筛选,具有在基层疾病预防控制中心和医院推广和应用的潜力。
- 芦春斌罗乐杨梦婕聂凯王淼马学军
- GeXP多重PCR技术用于人乳头瘤病毒HPV检测和分型的研究被引量：12
- 2011年
- 目的建立一种基于GenomeLab^TM GeXP（GenomeLab eXpress Profiling）遗传分析系统的人乳头瘤病毒（HPV）分型新技术。方法针对5种中国人常见的HPV亚型（HPV6，11，31，33和52）的基因序列进行比对分析，设计型特异性引物，建立并优化GeXP多重PCR反应体系，评价其特异性和灵敏性，并应用于30份临床标本检测。结果本研究建立的GeXP多重PCR技术能够成功检测和鉴别5种不同亚型的HPV病毒，灵敏度高，特异性好。结论成功建立了一种新的快速同时检测和鉴别5种HPV亚型病毒的多重PCR方法，适用于临床HPV感染的实验室诊断与流行病学研究。
- 芦春斌杨梦婕罗乐王淼马学军
- 关键词：聚合酶链反应乳头状瘤病毒基因型
- 一种基于新型再测序芯片的不明原因呼吸道感染样品检测方法的建立被引量：1
- 2013年
- 再测序芯片(Resequencing Pathogen Microarray,RPM)是一种新的基于微阵列DNA芯片的病原体检测与鉴定技术。为了将RPM应用于不明原因呼吸道感染的检测,提高应对传染病暴发的能力,本研究建立了基于一种新型RPM的呼吸道多病原检测方法。该方法可以同时检测19种常见呼吸道病毒、9种甲型流感(Flu A)和11种鼻病毒(HRV)、28种肠病毒、18种少见呼吸道病毒。选取已验证的16种常见呼吸道病毒感染阳性的样本评价RPM的特异性,用克隆质粒或体外转录的RNA梯度稀释液来检验RPM的灵敏度,在10～103拷贝/反应水平时RPM仍能检测和分辨出相近的病毒亚型。将8份不明原因的咽拭子样品提取的核酸合并,用新建立的方法进行检测,根据RPM结果再以普通PCR加测序作为验证,同时和Abbott公司的质谱测序(PLEX-ID)结果进行比较,除RPM检出假阳性PIV1外,三者的其余检测结果一致。结果表明,这种基于新型RPM的方法具有高灵敏度、高通量的优点,对应对新发和突发传染病具有重要意义。
- 申红卫李瑾王淼张晨王佶聂凯杨梦婕张益谭文杰马学军
- 关键词：呼吸道病毒
- GeXP多重基因表达遗传分析系统在手足口病病原分型检测中的应用被引量：16
- 2011年
- 利用GeXP多重基因表达遗传分析系统,建立一种多重逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,同时检测引起手足口病的9种常见的人肠道病毒—人肠道病毒71型(HEV71)、柯萨奇病毒A组(CVA)16、4、5、9、10型和柯萨奇病毒B组(CVB)1、3、5型。优化多重反应体系中针对5'UTR区的肠道病毒通用引物和11对针对9种血清型人肠道病毒VP1区的特异性引物的浓度比例,分别以病毒细胞培养物和阳性粪便标本来验证多重反应体系的特异性,以TCID50定量的细胞培养物和克隆质粒体外转录的RNA梯度稀释液来检测多重检测体系的灵敏度。结果表明,优化后的多重检测体系,可扩增出人肠道病毒共有的保守片段的和型特异性片段,HEV71和CVA16细胞培养物的检测下限为100.5TCID50/μL,并可在103copies/μL水平同时、特异地检测出9种病毒RNA。该方法灵敏度高、特异性强,可快速对大量临床样本进行高通量检测,用于手足口病的分子流行病学调查。
- 胡秀梅张勇徐邦牢杨梦婕王淼张晨李瑾白如银周小棉许文波马学军
- 关键词：手足口病多重RT-PCR
- GeXP多重PCR技术用于人乳头瘤病毒HPV检测和分型的研究
- GeXP多重PCR技术用于人乳头瘤病毒HPV检测和分型的研究，本发明属于生物技术应用领域，涉及各级疾病预防控制机构，医院等用于对宫颈分泌物等标本的多种人乳头瘤病毒HPV亚型(包括HPV6，HPV11，HPV31，HPV3...
- 马学军芦春斌杨梦婕罗乐聂凯王淼郑建新
- 文献传递
- 基于颜色判定的环介导逆转录等温扩增技术检测人甲型H1N1流感病毒基因被引量：25
- 2010年
- 建立了一种基于颜色判定的简单、快速和灵敏的检测方法,即环介导逆转录等温核酸扩增技术(RT-LAMP)应用于人甲型H1N1流感病毒基因检测。该技术使用对应于人甲型H1N1流感病毒HA序列中8个基因区段的6条特异引物,在等温条件下(65℃)进行核酸扩增反应1.5h,在扩增前加入染料HNB(羟基萘酚蓝)作为反应指示剂,以HNB的颜色变化做为结果判定标准并经琼脂糖凝胶电泳验证。文中利用这种技术对不同来源及亚型的流感病毒进行了特异性分析,对体外转录的人甲型H1N1流感病毒HA基因RNA的系列稀释物进行了灵敏度分析,成功检测美国CDC提供的人甲型H1N1流感病毒标准品,利用RT-LAMP和RT-PCR同时检测了30份人甲型H1N1和26份季节性流感咽拭子标本。结果显示RT-LAMP方法特异性高,灵敏度可达到60个拷贝RNA分子水平,对临床标本的检出率与常规RT-PCR法相当,利用650nm的比色分析通过标准曲线可以实现对样品的定量。因此,基于颜色判定的环介导逆转录等温扩增方法可用于人甲型H1N1流感病毒感染的快速筛选,具有在基层疾病预防控制中心流感监测网络实验室和哨点医院推广和应用的潜力。
- 聂凯王大燕秦萌高荣保王淼邹淑梅韩峰赵翔李希妍舒跃龙马学军
- 同时检测新甲型H1N1及人季节性H1N1和H3N2流感病毒的单管多重荧光定量PCR方法被引量：9
- 2010年
- 本研究设计的一种4重荧光定量RT-PCR检测方法,以A型流感病毒各亚型的血凝素基因(HA)为检测靶标,实现了同时检测新甲型H1N1流感病毒、人季节性H1N1流感病毒和人季节性H3N2流感病毒。本法使用人细胞RNA酶P基因作为内参,以判断标本来源和实施质量控制。利用不同来源和亚型的流感病毒验证了该方法的特异性;利用连续稀释的新甲型H1N1流感病毒HA全基因体外转录物进行灵敏度分析。结果表明该方法灵敏度高,可检测低至20个拷贝的RNA;特异性强,每对引物只检测出对应的病毒,无交叉反应;并且成功地验证性检验了34份新甲型H1N1流感病毒阳性临床标本和20份人季节性H1N1和H3N2流感病毒及人乙型(HB)流感病毒阳性临床标本。因此,该多重荧光定量RT-PCR法是一种可同时检测2009年新甲型流感病毒及季节性流感病毒的有效方法。
- 秦萌王大燕黄芳聂凯曲梅王淼韩峰赵翔成艳辉舒跃龙马学军
- 关键词：实时定量PCR
- 多重基因表达分析系统在氨基糖苷类多重耐药基因检测中的应用被引量：9
- 2011年
- 氨基糖苷类抗生素耐药趋势逐年增强，氨基糖苷类耐药基因的研究成为近年来研究的热点问题。与细菌耐药最为密切的是氨基糖苷类修饰酶（aminoglycoside modifying enzymes，AMEs）基因和16S rRNA甲基化酶（16S rRNA methylase）基因，国内最常见的氨基糖苷类抗生素相关的耐药基因有：5种AMEs基因aac（3）-Ⅱ、aac（6’）-Ⅰb、aac（6’）-Ⅱ、ant（3＂）-Ⅰ、
- 胡秀梅徐邦牢杨银梅周小棉杨梦婕王淼马学军
- 关键词：氨基糖苷类抗生素基因检测基因表达分析多重耐药氨基糖苷类修饰酶
- 核酸提取方法的研究进展被引量：9
- 2014年
- 随着近年来分子生物学技术的高速发展，以核酸杂交、核酸扩增和核酸序列分析为代表的分子诊断和检测技术在诸多领域中日益凸显出至关重要的作用。新型的分子生物学检测技术包括聚合酶链反应（PCR）、微芯片、高通量测序等，然而，所有现代分子生物学检测技术首先面临的问题就是如何从复杂多样的生物样本中迅速有效地分离和提取所需要的基因组核酸，而且抽提后的核酸质量及其完整性都会直接影响到随后的实验结果。目前，全世界的研究者在核酸分离提取的技术方法上也取得了许多突破性的进展，本文将就新型的核酸分离提取方法作一综述。
- 王淼马学军
- 关键词：分子生物学技术核酸序列分析聚合酶链反应核酸杂交
