肖湘文
- 作品数：10 被引量：20H指数：2
- 供职机构：中山大学达安基因诊断中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省教育厅科研基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生电子电信更多>>
- 运用数字差异展示方法克隆一个人类新的锌指蛋白基因ZNF474(英文)
- 2006年
- 运用数字差异展示方法,克隆一个与生精相关的睾丸高表达基因。借助公共ESTs数据库,利用DDD软件比较分析各种睾丸文库与其他组织或细胞系文库有差异表达的ESTs,成功克隆到一个在人类睾丸中高表达的新基因。结合实验获得新基因cDNA全长,该基因被国际人类基因命名委员会命名为ZNF474(GeneBank登陆号AY461732)。ZNF474的cDNA全长为1 972 bp,定位在5 q23.2。通过RT-PCR及测序验证,其开放阅读框的位置在377 bp^1 471 bp处,编码364个氨基酸,在氨基酸水平与小鼠同源基因有66%的一致性,而与其他已知蛋白质无明显同源性。Northern杂交分析显示ZNF474在成体睾丸组织特异高表达,卵巢组织弱表达,在多种其他组织中不表达,为单一转录本。原位杂交显示ZNF474基因在正常成人睾丸组织各级生精细胞、隐睾组织以及精原细胞癌组织中均有较高表达。综上考虑,推测ZNF474作为生殖细胞中特异的转录因子,对人类的精子发生和卵母细胞的发育可能起重要作用。
- 周畅师建明肖湘文李麓芸卢光琇
- 关键词：表达序列标签
- 高迁移率族蛋白HMGB4的表达及多克隆抗体的制备被引量：1
- 2011年
- 高迁移率族蛋白B4(high mobility group box,HMGB4)是HMGB家族的新成员,研究表明其可能在睾丸发育和精子发生等方面发挥重要作用.为进一步研究HMGB4的结构、功能及与其相互作用的蛋白而进行his-HMGB4融合蛋白表达载体的构建.序列鉴定分析后,用该重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),异丙基β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导产生his-HMGB4融合蛋白,继而纯化获得相对分子质量约25 000的融合蛋白.将此融合蛋白免疫新西兰兔,经Western印迹和ELISA检测,制备的抗体可特异性识别HMGB4蛋白,其效价达1∶20 000.获得的高效价、高特异性的兔抗HMGB4蛋白多克隆抗体为下阶段研究HMGB4的功能奠定了基础.
- 易朵王成帅勇肖湘文赵晓蒙周畅
- 关键词：原核表达纯化多克隆抗体
- 运用染色质免疫沉淀技术筛选出AP-2α的靶基因GALK1
- 2008年
- 在后基因组时代,DNA-蛋白质的相互作用是研究基因表达调控的一个重要领域。与其他方法相比,染色质免疫沉淀技术(chromatin immunoprecipitation assay,ChIP)是一种近来研究体内DNA与蛋白质相互作用的最好方法之一。本研究利用ChIP克隆方法,找出了AP-2α所调控的新的下游靶基因GALK1,并应用Lucifer-ase assay和RT-PCR实验进行了初步的验证。这一新发现,有利于我们进一步研究转录因子AP-2α的功能。
- 肖湘文贺爱兰周畅任道龙胡翔韩梅张健
- 关键词：靶基因AP-2Α
- 多重实时荧光定量PCR检测急性肝炎患者HBV和HCV方法的建立与意义分析被引量：2
- 2014年
- 目的建立一种新的可以快速筛查急性肝炎患者HBV和HCV感染的多重实时荧光定量PCR方法。方法收集596例急性肝炎患者血清或血浆样本,应用自主构建的多重实时荧光定量PCR方法同时检测HBV和HCV,同时应用HBV和HCV单管检测试剂进行检测分析。结果新建立的多重实时荧光定量PCR体系,可以有效地检测HBV和HCV的阳性质控品及阳性样本。多重实时荧光定量PCR体系特异性较好,检测HBV和HCV时,两者之间无交叉反应,且以多种血浆病毒的核酸样品为模板进行检测时结果全为阴性;多重实时荧光定量PCR体系检测HBV、HCV的灵敏度分别为20 IU/ml、50 IU/ml;多重实时荧光定量PCR体系精密度好,检测HBV、HCV的CV值分别为0.11%、0.096%。在检测临床样本时,多重复合体系检测血清或血浆中HBV和HCV的检出率与单独检测HBV和HCV具有很好的一致性,且HBV和HCV的一致率分别达到97.7%(k=0.952)、98.8%(k=0.976);同时有6例样本出现HBV和HCV共感染。结论新型多重实时荧光定量PCR方法对快速检测及筛查HBV和HCV较快捷,而且特异性好、灵敏度高、精密度好。因此多重实时荧光定量PCR方法对2种肝炎病毒的检测具有重要意义。
- 陈泽惠李欣钰肖湘文丁渭刘淑园陈华云
- 运用染色质免疫沉淀技术筛选AP-2α的靶基因
- 2008年
- 在后基因组时代,DNA-蛋白质的相互作用是研究基因表达调控的一个重要领域.染色质免疫沉淀技术(chromatin immunoprecipitation assay,简称ChIP)是目前唯一研究体内DNA与蛋白质相互作用的方法.对与ChIP有关的实验条件进行了优化,获得了较优的实验条件,并运用ChIP实验筛选出了转录因子activatorprotein-2alpha(AP-2α)的未知靶基因,对于进一步研究AP-2α的功能和调控网络打下了基础.
- 贺爱兰肖湘文孙一兵刘如石胡翔周建林张健
- 关键词：靶基因AP-2Α
- 应用MGB探针检测人丙型肝炎病毒的基因型被引量：1
- 2014年
- 目的检测血浆或血清样本中人丙型肝炎病毒(HCV)的基因型,建立了基于MGB探针的实时荧光定量PCR检测体系。方法在HCV基因组型特异性碱基的聚集区域设计荧光定量PCR引物及探针,为保证特征特异性及高分辨率,选择设计MGB探针,然后将PCR扩增的产物先进行基因克隆,而后制备病毒样颗粒做为阳性质控品,从而建立完整的MGB探针法的荧光定量PCR检测体系,最后对该检测体系进行方法学评价。结果成功建立了基于MGB探针的HCV荧光定量PCR的基因分型检测体系。方法学评价显示,该检测体系的灵敏度达100IU/mL;重复性好;特异性良好,以多种血浆病毒的核酸样品为模板进行检测时结果全为阴性。结论本研究建立基于MGB探针的HCV荧光定量PCR的基因分型检测方法,可定性检测血浆或血清样本及血液制品中的人丙型肝炎病毒HCV的基因型及含量,对于该疾病的研究及临床治疗都具有重要的意义。
- 陈泽惠李欣钰肖湘文丁渭刘淑园陈华云
- 关键词：荧光定量PCR
- 应用MGB探针检测人乙型肝炎病毒的基因型
- 2014年
- 目的检测血浆或血清样本中人乙型肝炎病毒HBV的基因型,建立了基于MGB探针的实时荧光定量PCR检测体系。方法在HBV基因组型特异性碱基的聚集区域设计荧光定量PCR引物及探针,为保证特征特异性及高分辨率,选择设计MGB探针,然后将PCR扩增的产物纯化后进行基因克隆,克隆成功后提取的质粒制备为阳性质控品,从而建立完整的MGB探针法的荧光定量PCR检测体系,最后对该检测体系进行方法学评价。结果成功建立了基于MGB探针的HBV荧光定量PCR的基因分型检测体系。方法学评价显示,该检测体系的灵敏度达50 IU/mL;重复性好;特异性良好,以多种血浆病毒的核酸样品为模板进行检测时结果全为阴性。结论本研究建立基于MGB探针的HBV荧光定量PCR的基因分型检测方法,可以很好地定性的检测血浆或血清样本及血液制品中的人乙型肝炎病毒HBV的基因型及含量,对于该疾病的临床治疗具有重要的意义。
- 陈泽惠李欣钰肖湘文丁渭刘淑园陈华云
- 关键词：荧光定量PCR
- 人锌指蛋白ZNF256基因克隆、表达谱分析及其功能研究
- 2009年
- 人ZNF256基因属于C2H2型锌指蛋白家族。该家族里面的基因大部分为转录因子，它们能够促进细胞分化、参与胚胎及心脏的发育，与精子的形成有关，并且与肿瘤相关。本文采用实时定量PCR方法分析了ZNF256基因在各个组织和不同细胞系中的表达情况，亚细胞定位发现ZNF256定位于细胞核，萤光素酶实验分析确定ZNF256可以抑制AP1的转录活性。这些研究结果为进一步研究ZNF256基因在疾病发生中的作用奠定了一定的基础。
- 任道龙胡兴旺徐甜肖湘文贺爱兰颜峰张健刘如石
- 关键词：表达谱荧光实时定量PCR转录活性
- 乳腺癌细胞中转录因子AP-2γ的靶基因的鉴定
- 转录激活因子AP-2γ是转录因子激活蛋白AP-2家族中的一员,它在人类的癌症发生、发展过程中起着重要作用。AP-2γ蛋白在人的乳腺癌细胞中有高表达,并且在乳腺癌的不同形成过程中起着双重作用:抑制肿瘤的发生和促进细胞增值。...
- 肖湘文
- 关键词：乳腺癌靶基因
- 文献传递
- 高迁移率族蛋白被引量：16
- 2006年
- 高迁移率族蛋白(highmobilitygroupprotein,HMG蛋白)广泛存在于真核生物细胞中,因其在聚丙稀凝胶电泳中的高迁移率而得名。HMG蛋白是真核细胞基因调控的动力体现者,是真核细胞内继组蛋白之后含量最为丰富的一组染色质蛋白质,它们在染色质的结构与功能及基因表达调控过程中均发挥着重要作用。HMG蛋白家族可分为HMGA、HMGB和HMGN三类亚家族。现对HMG蛋白家族的三类亚家族蛋白HMGA、HMGB和HMGN的结构与功能进行综述。
- 肖湘文周建林周畅
- 关键词：HMGB
