肖苏生
- 作品数：21 被引量：82H指数：6
- 供职机构：中国热带农业科学院热带生物技术研究所更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家自然科学基金公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学化学工程更多>>
- 广东雷州杂草稻黑壳基因Bh4和红皮基因Rc的基因型鉴定
- 2020年
- 为测定雷州杂草稻的黑色颖壳基因Bh4和红色果皮基因Rc的基因型,本研究对雷州10个杂草稻群体的100个单株的种子的颖壳和果皮颜色进行表型观察,同时通过PCR扩增及序列分析对Bh4和Rc的基因型进行鉴定。结果表明,雷州杂草稻中黑色颖壳和黄色颖壳的种子几乎各占一半,果皮颜色则以红色为主,有少量白色和浅红色果皮的种子。雷州杂草稻的Bh4和Rc的基因型与表型鉴定结果一致。57份黑色颖壳杂草稻的Bh4基因型为39个野生型和18个杂合型,25份黄色颖壳和18份黄色带黑斑颖壳杂草稻的Bh4基因型均为缺失22 bp的突变型;90份红色果皮杂草稻的Rc基因型为73个野生型和17个杂合型,4份白色和6份浅红色果皮杂草稻的Rc基因型均为缺失14 bp的突变型。本研究为分析雷州杂草稻的Bh4和Rc基因的来源提供了分子基础。
- 夏启玉赵辉赵辉贺萍萍杨小亮张丽丽杨小亮肖苏生
- 关键词：杂草稻基因型鉴定
- ETR1靶向RNA干扰重组体的构建及序列分析被引量：1
- 2008年
- [目的]构建拟南芥乙烯受体(ETR1)特异性短发夹环RNA(shRNA)真核表达载体。[方法]从ETR1基因cDNA序列上选取目标序列,设计2对引物,经PCR扩增得到正反向2个DNA片段(S5I和AI),构建含有该正反向互补重复序列DNA片段的中间载体,测序分析正确后再克隆到植物表达载体pCAMBIA1301中的Gus位置并经双酶切证实。[结果]ETR1基因S5I和AI片段被成功克隆进质粒pCAM-BIA1301中,酶切鉴定及测序分析显示,重组质粒shRNA编码序列与设计片段的序列完全一致。[结论]ETR1靶向RNA干扰重组体的成功构建,为进一步获得拟南芥乙烯受体基因的功能缺失突变体奠定良好基础。
- 肖苏生张颖张春发
- 关键词：ETR1RNA干扰短发夹环RNA重组体
- 定性PCR方法检测转基因玉米MON810转化事件的研究被引量：5
- 2014年
- 转基因玉米MON810(Yield Gard R)是孟山都公司通过DNA重组技术和微注射轰击研发的一种具有对欧洲玉米螟(ECB;Ostrinia nublialis)有特殊抗性的转基因玉米品系,目前在世界各地已经得到广泛种植,为加强对该品系玉米的安全管理,本研究旨在建立MON810品系玉米的转化事件特异性定性PCR检测方法。根据MON810的插入序列信息,在3′端的侧翼序列处设计定性PCR检测的引物,检测MON810在其他几种常见转基因作物混合样品的特异性。结果表明,该方法具有很好的特异性。同时检测该引物系统的扩增灵敏度,结果表明,检测引物的灵敏度可达0.1%。建立的MON810特异定性PCR检测方法经全国7家实验室的验证,进一步证实该方法能够特异地检测出样品中的MON810转化事件,检测方法的灵敏度可达0.1%,且检测结果具有良好的可重复性和可重现性。MON810转化事件定性PCR检测方法的建立可满足于抗虫转基因玉米MON810及其衍生品种生物安全管理的需要。
- 易小平贺萍萍夏启玉肖苏生谢翔杨小亮李美英郭安平
- 关键词：灵敏度特异性
- 高粱高效Ubiquitin启动子的克隆及活性鉴定
- 2022年
- 在转基因植物的研究中,启动子是影响转基因表达效率的重要因素之一。植物泛素(ubiquitin)基因启动子以启动效率高、甲基化程度相对较低、遗传性状稳定等特点成为单子叶植物中应用较为广泛的启动子。其中,玉米的Ubi-1是最常使用的Ubiquitin启动子之一。本研究旨在克隆高粱高效Ubiquitin启动子,为高粱及其他单子叶植物的遗传转化研究提供新的组成型启动子选择。本研究从NCBI数据库中查找到多个polyubiquitin基因,下载其起始密码子上游3000 bp的序列。根据Ubiquitin启动子的特点,选择含有5′UTR内含子且大小合适的序列,并通过在线启动子预测网站进行启动子分析,最后选择2个基因(LOC8076096、LOC8063786)进行启动子克隆,将其启动子序列分别命名为U1和U5。将这2个启动子片段PCR扩增后,连入含有GUS报告基因的植物表达载体Ubi-GUS,得到重组表达载体U1-GUS和U5-GUS。重组载体通过农杆菌介导法转化水稻和狗尾草,PCR筛选阳性转化苗,对阳性转化苗进行GUS染色分析,鉴定U1和U5的启动子活性。GUS染色观察发现,所有以U1和U5为启动子的水稻和狗尾草阳性转化苗的根、茎和叶均呈现较深的蓝色,比以玉米Ubi-1为启动子的阳性转化苗的蓝色略深,且以U5为启动子的阳性转化苗比以U1为启动子的蓝色更深,而非转基因的水稻和狗尾草小苗则完全染不上蓝色。因此,启动子U1和U5在水稻和狗尾草中均具有组成型强启动子的活性,可作为新的组成型启动子应用于高粱、水稻、狗尾草及其他单子叶植物的遗传转化研究。
- 夏启玉夏启玉张丽丽贺萍萍肖苏生张丽丽
- 关键词：高粱泛素基因启动子克隆活性鉴定
- 巴西橡胶树顺式异戊烯基转移酶基因cDNA克隆及其序列特征分析被引量：5
- 2009年
- 以巴西橡胶树(Hevea brasiliensis)胶乳的RNA为Tester;叶片RNA为Driver,利用抑制消减杂交法(suppressive subtractive hybridization,SSH)构建了一个胶乳特异表达基因差减文库。通过反式Northern点杂交(reverse Northern dot blots)筛选到一个与顺式异戊烯基转移酶基因(橡胶生物合成的关键酶基因)高度同源的阳性克隆R363。采用RACE方法获得该克隆的全长cDNA(GenBank登陆号:AY461414)。序列分析表明,该基因长1156 bp,含有873 bp的阅读框,编码290个氨基酸,分子量约为32.9 kD,等电点为7.2,含有N-端跨膜螺旋区。同源性分析表明R363编码的蛋白质具有异戊烯基转移酶家族的特征,含有cis-异戊烯基链转移酶的5个高度保守区,推测R363可能是一种新的顺式-异戊烯基转移酶基因。Northern blot分析显示,R363在胶乳中高度表达,在叶中不表达。乙烯处理前后表达强度一致,表明该基因表达不为乙烯所诱导。
- 罗明武邓柳红易小平曾会才肖苏生
- 关键词：巴西橡胶树胶乳
- 原核表达Cry3Aa蛋白对椰心叶甲的杀虫活性被引量：4
- 2009年
- 椰心叶甲是近年来传入我国的危险性有害生物,严重危害了我国海南省、广东省、台湾省和香港地区的椰子、槟榔等棕榈科植物,并有蔓延趋势,。BtCry3Aa毒蛋白对鞘翅目害虫有较强的杀虫活性。本研究首次发现大肠杆菌原核表达的Cry3Aa重组蛋白对椰心叶甲成虫具有快速杀灭作用,工程菌表达的包涵体重组蛋白处理叶片,饲喂椰心叶甲成虫,浓度为2.0mg/mL时,24h內死亡率为100%。一次性饲喂处理24h、48h和72h的LC50分别为0.7516mg/mL、0.4755mg/mL和0.3714mg/mL,连续性饲喂即使低浓度也达到较高死亡率。本试验结果为cry3Aa基因在转基因技术方面的应用或研发生物农药防治椰心叶甲害虫提供了重要的理论与技术支撑。
- 苏震邓柳红易小平肖苏生张春发
- 关键词：椰心叶甲包涵体
- hGH-双精氨酸C肽人胰岛素原基因的克隆表达及纯化研究被引量：1
- 2009年
- 旨在提高基因重组人胰岛素在大肠杆菌中表达的稳定性及表达包涵体蛋白的复性水平。在人胰岛素原N端前融合人生长素N端的一段序列来充当前导肽,同时将C肽设计为两个精氨酸,分10段合成长链寡核苷酸链,利用重叠延伸PCR技术(SOE PCR)扩增得到该基因片段。与表达载体PET-30a连接,转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的融合蛋白采用Ni-NTA亲和层析纯化,纯化后的蛋白经复性、冻干等步骤后用胰蛋白酶,羧肽酶B双酶切再过DEAE Sepharose FastFlow阴离子交换柱,收集洗脱峰。对制备所得的胰岛素用SDS-PAGE,Western blot进行性质鉴定,及皮下注射小鼠测定生物活性。结果显示,目的蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中得到了表达,表达产物以不溶性包涵体形式纯在,约占大肠杆菌总蛋白的30%。经Ni-NTA亲和层析得到的重组蛋白纯度为85%,DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换纯化得到单组分胰岛素。Western Blot显示制备所得的胰岛素具有胰岛素免疫原性,皮下给药注射小鼠活性测定表明具有明显的降血糖活性。获得了一种高效生产基因重组人胰岛素的方法,为研究胰岛素类似物奠定了前期基础同时也为今后探索胰岛素的非注射给药途径提供了原料。
- 胡兵黄超李文静邓柳红肖苏生张春发
- 关键词：重叠延伸PCR融合蛋白表达纯化活性测定
- 农杆菌介导的香蕉枯萎病菌4号生理小种高效遗传转化体系的建立及影响因子的优化
- 本文针对香蕉枯萎病菌4号生理小种这一危害极大的有害真菌,建立了农杆菌介导的该生理小种的转化体系,确定了影响转化效率主要因子的最佳条件分别是:农杆菌在IM培养基AS诱导前,农杆菌OD600为0.15,Focr4孢子浓度为1...
- 高剑肖苏生曾涛曾会才
- 关键词：香蕉枯萎病菌4号生理小种
- 文献传递
- 香蕉枯萎病菌4号生理小种转化体系的优化研究
- 香蕉枯萎病是世界范围内香蕉种植区最为严重的病害之一,严重威胁和影响着香蕉产业的发展。本文针对香蕉枯萎病病原菌的4号生理小种,建立了农杆菌介导的转化体系,确定了影响转化效率主要因子的优化体系是:农杆菌在IM培养基诱导前农杆...
- 高剑肖苏生王文华曾涛曾会才
- 关键词：香蕉枯萎病T-DNA插入
- 文献传递
- 美洲商陆抗病毒蛋白缺失型基因PAP-C_(23)在大肠杆菌中的表达
- 2008年
- 目的:在大肠杆菌中高效表达缺失型美洲商陆抗病毒蛋白PAP-C_(23),并制备其抗血清。方法:从成熟PAP中克隆了C端缺失23个氨基酸的基因PAP-C_(23),以PET101为表达载体构建了重组质粒,转化入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。切胶回收表达的重组蛋白,冰浴研磨后用PBS溶解,再加入等体积福氏不完全佐剂,免疫家兔,制备抗PAP蛋白的多克隆抗体。结果:SDSPAGE分析表明,目的蛋白在BL21(DE3)中获得表达,表达产物以不溶的包涵体形式存在。通过对表达条件的优化,重组蛋白的表达量可占总包涵体蛋白的29.6%。间接ELISA法测定所制备抗血清效价为1:1000,Western blot分析结果显示,该抗血清与表达的重组蛋白和天然的PAP蛋白均发生特异性的免疫反应,结论:PAP-C_(23)基因在大肠杆菌中得到了正确表达,且重组蛋白的免疫原性较好,所制备的抗血清与天然PAP发生特异性免疫反应。
- 夏启玉肖苏生邓柳红易小平张春发
- 关键词：包涵体抗血清
