许娜
- 作品数：3 被引量：18H指数：2
- 供职机构：江南大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：长江学者和创新团队发展计划国家重点基础研究发展计划教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 近平滑假丝酵母(R)-专一性羰基还原酶基因的克隆与表达被引量：7
- 2006年
- 根据纯化得到的(R)-专一性羰基还原酶(rCR)蛋白质测序结果推导出的核苷酸序列设计引物,以筛选得到的近平滑假丝酵母(Candida parapsilosis)CCTCC M203011基因组为模板,通过PCR扩增目的片段,克隆后测序。核苷酸序列测定结果表明rcr基因全长1011bp,共编码336个氨基酸,分子量为35·9kD。将序列递交NCBI比对,与醇脱氢酶超家族成员序列同源性达99%。在大肠杆菌(Escherichia coli)JM109中表达rcr基因,重组菌可还原β-羟基苯乙酮得到(R)-苯乙二醇,光学纯度为100%e·e,摩尔产率为80·4%,在反应体系中无需外加辅酶再生系统即可完成转化。
- 许娜王海燕聂尧徐岩肖荣
- 关键词：羰基还原酶
- 重组(R)-专一性羰基还原酶的表达、纯化及酶学性质
- 通过对近平滑假丝酵母(R)-专一性羰基还原酶(rCR)进行氨基酸序列分析,根据其保守性利用PCR技术得到目的基因rcr.该基因全长1011bp,共编码336个氨基酸.通过构建重组质粒pETRCR,使目的基因在Escher...
- 聂尧徐岩王海燕许娜肖荣
- 关键词：还原酶羰基还原酶酶学性质基因表达
- 文献传递
- 重组大肠杆菌不对称还原2-羟基苯乙酮合成(R)-苯基乙二醇被引量：16
- 2006年
- 通过对近平滑假丝酵母(R)-专一性羰基还原酶(rCR)进行氨基酸序列分析并根据其序列的保守性设计PCR引物,以近平滑假丝酵母基因组为模板利用PCR技术得到目的基因rcr。该基因全长1011bp,共编码336个氨基酸。将该基因与表达载体pET21c连接后构建重组质粒pETRCR,并转化入EscherichiacoliBL21(DE3)中进行表达。重组大肠杆菌具有(R)-专一性羰基还原酶活性,可催化不对称还原2-羟基苯乙酮合成(R)-苯基乙二醇。研究发现,在重组菌培养过程中,同添加IPTG诱导培养的情况相比,不添加IPTG诱导培养的酶活及不对称转化(R)-苯基乙二醇的效果较好。在反应过程中,转化48h及在pH值8～9的条件下更有利于不对称反应的进行。另外,较高的底物浓度会对反应产生抑制作用,通过提高重组菌细胞浓度可显著提高转化效果。在5g/L的底物浓度条件下,利用0.3g/mL重组菌细胞可还原2-羟基苯乙酮得到(R)-苯基乙二醇,产物光学纯度为95.5%e.e,产率为92.6%。
- 聂尧徐岩王海燕许娜肖荣
- 关键词：羰基还原酶重组大肠杆菌苯基乙二醇
