聂尧
- 作品数：59 被引量：256H指数：9
- 供职机构：江南大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学理学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 重组大肠杆菌表达氧化还原酶不对称还原2-羟基苯乙酮的研究被引量：3
- 2011年
- 将来源于7种微生物的13个氧化还原酶基因分别与表达载体pET21c连接后,转化入Escherichia coli BL21(DE3)中,得到13株重组菌。重组菌在IPTG诱导下进行表达,并对2-羟基苯乙酮进行不对称催化还原。研究发现,在17℃下诱导表达的重组酶比活明显高于30℃和37℃下诱导表达的比活。另外,来源于Candida parapsilosis CCTCCM203011羰基还原酶SCR1能够较好地不对称催化还原2-羟基苯乙酮,在5 g/L底物浓度下,2-羟基苯乙酮被还原得到(S)-PED,光学纯度大于99%,产率达到90.3%。通过对有机溶剂的筛选,构建了水/十二酸乙酯两相反应体系,可以还原底物浓度达8 g/L的2-羟基苯乙酮,光学纯度大于99%,产率为86.9%。
- 闫真聂尧徐岩
- 关键词：氧化还原酶SCR1
- 迭代饱和突变提高Bacillus cereus胺脱氢酶对苯乙酮还原的催化效率
- 2020年
- 基于同源建模建立了Bacillus cereus胺脱氢酶(Bc AmDH)的三维结构,采用半理性设计方法,对底物结合口袋附近的8个氨基酸残基(L42,G43,M67,A115,E116,T136,V293和V296)分别进行单点饱和突变,通过显色法筛选出3个正向突变位点(116,136和293).进一步采用迭代饱和突变策略对这3个正向位点进行组合突变,获得最优突变株V293A/E116V/T136S,其对苯乙酮还原反应的催化效率达到2.54 L·min-1·mmol-1,比Bc AmDH提高了719%;与Bc AmDH相比,最优突变株在催化苯乙酮的不对称还原反应时,底物浓度由100 mmol/L提高至300 mmol/L,转化率由42.1%提高至80.2%.分子对接结果表明,突变株底物结合口袋的位阻减小和底物进出通道的扩大是提高催化效率的主要原因.
- 吴涛穆晓清聂尧聂尧
- 关键词：苯乙酮
- 营养相互作用对传统发酵食品微生物群落构建的推动作用研究进展被引量：7
- 2021年
- 传统发酵食品是由自然接种的多微生物组成的混菌体系,了解微生物群落自发式构建的机制是认识发酵机理和调控发酵的关键。尽管大量的测序数据已经对传统发酵食品中微生物群落的结构和功能有了较为清晰的认识,但是仍然不清楚微生物群落自发式构建的机制。本文提出微生物群落是分布式的代谢系统,微生物之间的营养相互作用推动了传统发酵食品微生物群落的自发式构建。本文主要阐述了营养相互作用的概念、发生的机理以及研究方法体系,整理了传统发酵食品中微生物之间营养相互作用的研究进展,并提出了未来的研究方向。通过营养相互作用推动的传统发酵食品微生物群落的自发式构建有助于定向控制发酵过程中的微生物种类、提高生产效率和改善发酵质量。
- 魏军林聂尧杜海徐岩
- 关键词：传统发酵食品
- 白酒中5种生物胺的HPLC定量分析被引量：19
- 2013年
- 应用紫外检测-反相高效液相色谱(RP-HPLC)检测技术,建立了白酒中多种生物胺的定量方法。定量方法包括液液萃取(LLE)、丹磺酰氯柱前衍生、氮吹浓缩、RP-HPLC检测。采用Agilent C_(18)色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相采用乙腈和水,进行梯度洗脱,流速为0.4mL/min,柱温为20℃,检测波长为254nm。该方法在线性范围内线性关系良好(R^2>0.99),5种生物胺的最低检测限为0.001～0.032mg/L,相对标准偏差(RSD)低于6%,回收率为80.19%～104.05%。研究结果表明,白酒中生物胺与发酵酒中不同,其吡咯烷浓度最高。初步检测了三种基本香型的白酒,与浓香型、清香型白酒相比,酱香型白酒具有更低的生物胺。
- 温永柱范文来徐岩聂尧
- 关键词：白酒生物胺反相高效液相色谱衍生化
- 采用复合保护剂提高重组普鲁兰酶稳定性被引量：4
- 2015年
- 通过向重组普鲁兰酶(PUL)酶液中添加保护剂和防腐剂以提高其热稳定性及储存稳定性,在不同温度下研究了复合保护剂对酶液的热稳定性影响,并研究了保护剂和防腐剂在常温保藏下对酶液贮存稳定性的影响。结果表明,明胶、甘油、Tween20和Ca2+四种保护剂能显著提高PUL的热稳定性,并通过正交试验得到了效果最佳的复合保护剂配方,即Tween20 2 m L/L,明胶6 g/L,甘油5%,Ca2+0.1 mol/L。在60℃下,添加复合保护剂的PUL酶液保温1 h后的酶活保留率为96.07%,较对照高出85.29%;在55℃,通过添加复合保护剂,半衰期较对照提高了3.27倍。最终在常温保藏90 d后,含有复合保护剂和防腐剂(1 g/L山梨酸钾和1 g/L苯甲酸钠)的PUL酶活保留率高达85.25%,达到了工业保藏的需求。
- 赵伟超聂尧穆晓清张荣珍徐岩
- 关键词：普鲁兰酶保护剂热稳定性
- 醇类物质诱导培养改善近平滑假丝酵母(Candida parapsilosis)去消旋转化能力被引量：7
- 2005年
- 采用近平滑假丝酵母Candidaparapsilosis全细胞去消旋转化外消旋苯基乙二醇(PED)制备S-苯基乙二醇.主要研究了在菌体培养阶段添加底物醇类和酮类对菌体生长及菌体产酶的影响.研究发现添加乙醇可以促进细胞生长,提高细胞中脱氢酶活力,从而改善菌体立体选择性转化能力.通过在菌体培养至对数生长期时添加0.1%乙醇,菌体量增长10%,相对酶活提高30%,采用相同浓度菌体转化105mmol/L(R,S)-苯基乙二醇时,产物(S)-苯基乙二醇的对映过量值从90%提高至99%,产率从87.3%提高至92.4%.
- 任艳秋徐岩穆晓清聂尧
- 关键词：近平滑假丝酵母
- 亮氨酸脱氢酶与葡萄糖脱氢酶高效共表达制备L-叔亮氨酸被引量：1
- 2016年
- 【目的】通过不同双基因共表达策略对亮氨酸脱氢酶和葡萄糖脱氢酶基因在大肠杆菌中表达影响的研究,获得具有高辅酶再生效率的双酶共表达重组生物催化剂,实现L-叔亮氨酸"一锅法"高效不对称合成。【方法】以来自于蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)的亮氨酸脱氢酶(LDH)和来自芽孢菌属(Bacillus sp.)的葡萄糖脱氢酶(GDH)为模板,考察单质粒共表达,双质粒共表达和融合表达等3种共表达策略对重组细胞中亮氨酸脱氢酶和葡萄糖脱氢酶活的影响,比较不同酶活比例和不同催化剂形式对三甲基丙酮酸不对称还原制备L-叔亮氨酸效率的影响。【结果】研究发现不同共表达策略对亮氨酸脱氢酶和葡萄糖脱氢酶的影响存在明显差异。亮氨酸脱氢酶在不同策略下均能够正常表达,而葡萄糖脱氢酶在融合表达时没有活力,当C端含有组氨酸标签时,表达蛋白活性低。通过表达优化,获得3株亮氨酸脱氢酶和葡萄糖脱氢酶高效表达且具有不同酶活比例的重组菌。比较粗酶液和全细胞形式下的催化效率,发现酶活比例及催化剂形式对不对称还原反应效率具有重要影响。确定单质粒串联表达C端不含His标签重组菌E.coli BL21/p ET28a-L-SD-AS-G为最佳催化剂,以粗酶液进行转化时,完全转化0.5 mol/L底物所需菌体量为15 g/L,辅酶量为0.1 mmol/L。【结论】采用单质粒共表达策略,成功构建出1株具有较高亮氨酸脱氢酶和葡萄糖脱氢酶活性的重组菌,实现高效催化TMP合成L-Tle。
- 杨兴龙穆晓清聂尧徐岩
- 关键词：葡萄糖脱氢酶C端
- 微生物立体选择性转化2-辛醇的研究
- 手性2-辛醇是合成类固醇、维生素E和昆虫性外激素(生物杀虫剂)等许多光学活性药物和农药的重要手性中间体,还是制备高性能液晶及其器件的不可缺少的重要手性原料,它的旋光性和高介电常数与液晶的许多性能密切相关。目前,生物法制备...
- 聂尧徐岩
- 文献传递
- 长野芽胞杆菌(Bacillus naganoensis)普鲁兰酶在大肠杆菌中的活性表达与分泌调控被引量：16
- 2013年
- 【目的】从长野芽胞杆菌(Bacillus naganoensis)JNB-1中克隆出普鲁兰酶基因并在大肠杆菌系统中表达,通过优化诱导条件和使用化学添加剂提高了胞外酶活。【方法】采用PCR方法,从B.naganoensis基因组中扩增出普鲁兰酶基因pul,构建重组菌E.coli BL21/pET-20b-pul。通过优化,确定优化后的IPTG诱导条件以及甘氨酸、Na+的最佳添加参数。【结果】普鲁兰酶在大肠杆菌中得到有效表达,其相对分子质量为119kDa。在优化后的诱导条件(诱导温度20℃,IPTG终浓度0.4 mmol/L,在菌体OD600至1.2时诱导)下,普鲁兰酶的总酶活达到10.8 U/mL。添加甘氨酸和Na+均能有效促进普鲁兰酶的分泌。在诱导时添加终浓度0.08 mol/L的甘氨酸和0.2 mol/L Na+,胞外酶活提高至8.1 U/mL,是不加任何添加剂的10.3倍。【结论】该重组菌的构建为普鲁兰酶制剂的工业生产提供了有价值的菌株,对化学添加剂促进分泌的研究也为重组酶的高水平胞外生产提供了有效的方法。
- 严伟聂尧徐岩
- 关键词：普鲁兰酶基因克隆和表达化学添加剂
- 新形势下煤炭企业降成本现场管理探讨
- 2016年
- 通过对煤炭生产企业充分调研分析,从现场管理和实用技术两个方面有针对性地提出降成本现场管理的方法,通过减少消耗、提高效率、全面现场管理和延伸服务产业链等方面提出可行的参考方案,从可实施性方面解决了煤炭企业面临的问题,从而达到提升煤矿现场管理效率,降低企业成本的目的。
- 丁自伟王威钦高晓旭聂尧
- 关键词：产能过剩机械设备产业链
