郝永清
- 作品数：182 被引量：841H指数：15
- 供职机构：内蒙古农业大学更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家自然科学基金内蒙古自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程医药卫生更多>>
- 猪瘟病毒囊膜蛋白E2的锚定序列部分缺失对其在细胞内表达的影响被引量：1
- 2010年
- 为了将猪瘟病毒(CFSV)的囊膜蛋白表达在细胞表面,本研究根据与CSFV同属的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的囊膜蛋白E2锚定序列,推测出CSFV的E2锚定序列。利用生物信息学软件对CSFV的E2锚定序列进行分析、建模与部分缺失,构建成4种不同的表达CSFV囊膜蛋白EmsE1E2的片段。将以上4种片段分别连接到真核表达载体pCAGGS中,转染幼仓鼠肾(BHK21)细胞,利用抗E2蛋白的单克隆抗体对表达蛋白进行westernblot检测与间接免疫荧光(IFA)检测,研究结果表明:跨膜区中锚定序列的部分缺失会降低E2在细胞内的表达,为猪瘟伪型病毒的研制提供了实验依据。
- 贺番王靖飞郝永清仇华吉
- 关键词：猪瘟病毒分子模拟技术
- 奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌FnbpB-D基因的表达及其抗血清活性被引量：7
- 2010年
- 纤维素结合蛋白B(FnbpB)是金黄色葡萄球菌(S.aureus)最主要的黏附因子之一,它能够介导S.aureus结合于细胞表面的纤维连结素(Fn)和纤维蛋白原(Fg)。FnbpB基因中D区为主要活性部位。本实验利用pET-32a表达载体表达了S.aureus FnbpB-D重组蛋白(34.7ku),并通过动物实验对重组FnbpB-D蛋白的抗血清活性进行了初步研究。采用ELISA对抗血清进行抗粘附性检测,结果显示实验组与对照组差异极显著(p<0.01),抗血清具有较强的抑制S.aureus黏附纤维连结素的作用。此外,调理吞噬实验结果显示,免疫兔全血对S.aureus有较强的调理作用。这些实验结果将为制备奶牛乳房炎S.aureus黏附素疫苗的研制提供参考。
- 史冬艳郝永清张爱荣
- 关键词：奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌
- 基于高通量测序技术分析家兔感染猪瘟兔化弱毒株后脾脏的转录组学变化被引量：9
- 2016年
- 本研究基于高通量测序技术对感染猪瘟兔化弱毒株(C株)后0h,12h,24h,30h,36h,48h的家兔脾脏组织进行测序,以家兔基因组作为参考,筛选感染后各时间点和对照组(0h)之间的差异基因。利用Uniprot和NCBI数据库查找各组中变化水平显著的前10个差异基因的生物学功能。结果发现,感染后12h,24h,30h的前10个差异基因只有少数与炎症、免疫、凋亡等相关;感染后36h,48h的前10个差异基因完全相同,其中B2M、RLA-DR-ALPHA、CD74和IGJ参与抗病毒过程。GO功能注释结果显示:感染后各时间点的差异基因都和免疫、代谢、调控途径紧密相关。KEGG通路富集分析发现,感染后24h的差异基因富集到RIG-I样受体信号通路,感染后30h的差异基因富集到黏着斑和细胞外基质-受体相互作用通路,感染后36h和48h的差异基因共同富集到的通路有20个,其中蛋白酶体,溶酶体,核糖体,趋化因子信号通路,B细胞受体信号通路,抗原加工提呈通路和FcγR介导的吞噬通路与抗病毒相关。本研究建立的家兔感染C株后脾脏组织的差异表达基因数据库,将为进一步阐述家兔适应C株的分子机制奠定基础。
- 侯玉臻赵丹彤刘国英贺番刘斌付绍印郝永清张文广
- BPIV3 NP蛋白的原核表达及其对BPIV3灭活疫苗免疫增强作用的研究被引量：1
- 2022年
- 【目的】验证牛副流感病毒3型(Bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3)NP蛋白对BPIV3灭活疫苗的免疫效果是否有增强作用。【方法】利用生物信息学软件对NP基因编码的蛋白进行抗原性分析,筛选出抗原性区域,采用PCR方法扩增BPIV3截短的NP基因序列,连接至pET-32a(+)质粒上,通过大肠杆菌原核表达系统和Ni亲和层析的方法获得了较高纯度的BPIV3 NP蛋白,经Western blotting验证其反应原性。将BPIV3用0.3%甲醛灭活后与弗氏佐剂1∶1混合制备灭活疫苗。8只新西兰白兔随机分为4组:灭活疫苗组、NP蛋白组、灭活疫苗和NP蛋白混合组及对照组,每组2只。免疫前及免疫后每7 d采集血液分离血清,采用间接ELISA方法和病毒中和试验测定并比较4组新西兰白兔特异性抗体和中和抗体的水平。【结果】经DNAStar分析,NP蛋白第193-368位氨基酸处的平均抗原指数在0.4~1.7之间,亲水指数为0~1.5,证明该区域抗原性和亲水性较强;通过PCR扩增得到NP基因,并构建重组表达载体,通过基因测序证明该重组表达载体与预期结果一致;SDS-PAGE结果显示,NP蛋白表达量较高,蛋白分子质量为50 ku且以包涵体形式表达;Western blotting结果表明,所表达的蛋白具有较强的反应原性;ELISA结果显示,在免疫后28 d,对照组的特异性抗体效价为0,灭活疫苗组、NP蛋白组及灭活疫苗和NP蛋白混合组的特异性抗体效价分别达到1∶2^(11)、1∶2^(17)和1∶2^(18)。病毒中和试验结果显示,在免疫后28 d,对照组中和抗体效价为0,灭活疫苗组、NP蛋白组及灭活疫苗和NP蛋白混合组的中和抗体效价分别为1∶2^(3.32)、1∶2^(4.48)和1∶2^(4.98)。【结论】BPIV3 NP蛋白可增强BPIV3灭活疫苗的免疫效果,在灭活疫苗中加入NP蛋白可作为BPIV3灭活疫苗的新型接种方法。
- 王宇琛田广原周雅坪郭婷赵红梅孙雅婕赵逢淼卞宇晨于佳梁郝永清
- 关键词：NP蛋白原核表达灭活疫苗
- Chelex-100法直接提取乳样中奶牛乳房炎主要致病菌DNA方法的建立被引量：5
- 2014年
- 为建立一种直接从乳样中快速提取细菌DNA的方法,试验通过人工制备8个倍比稀释细菌的乳样,检测了Chelex-100法提取3种奶牛乳房炎主要致病菌(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和无乳链球菌)DNA进行PCR扩增的敏感性,并与苯酚—氯仿法进行了比较分析。结果显示,以Chelex-100法提取乳样中细菌DNA进行PCR扩增具有较高的敏感性,所检测金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和无乳链球菌的最小浓度分别为103、102、102 CFU/mL;而使用苯酚—氯仿法提取乳样中各细菌DNA的PCR敏感性均为104 CFU/mL。综上所述,Chelex-100法提取乳样细菌DNA的PCR敏感性可以满足临床检测奶牛乳房炎的需要,显现了简单快速、经济、无污染的优点,为从乳样中直接提取细菌DNA提供了新的思路,对PCR快速检测乳房炎致病菌具有重要意义。
- 许金朋郝永清
- 关键词：奶牛乳房炎细菌DNAPCR敏感性
- 鸡大肠埃希氏菌的分离鉴定
- 1995年
- 从包头市郊区某鸡场病鸡和病死鸡体内分离出18株革兰氏阴性短杆菌,经生化反应和血清型鉴定,确认是大肠埃希氏菌,其中有7株血清型为 O_(78)、8株血清型为O_9、血清型为 O_8和 O_(132)的各有一株。经药敏试验,分离菌株对呼拉杀星、氯霉素、氟哌酸、头孢菌素、庆大霉素高度敏感,对青霉素、链霉素、白霉素、呋喃唑酮中度敏感,对氨苄青霉素、高利米先、土霉素、复方新诺明、复方敌菌净等不敏感。
- 霍蕾郝永清张爱荣周雨霞
- 关键词：鸡大肠埃希氏菌血清型鉴定大肠埃希氏菌病复方敌菌净复方新诺明分离菌株
- 金黄色葡萄球菌FnBPA D基因片段的表达被引量：2
- 2009年
- 金黄色葡萄球菌是引起奶牛乳腺炎的主要传染性病原菌。本实验采用分子克隆及蛋白表达技术,成功的表达了金黄色葡萄球菌纤维素结合蛋白A(FnBPA)D片段并对其免疫学活性进行了初步研究。表达产物免疫实验动物后,获得较高效价的抗体。用制备血清进行吞噬调理试验,抗金黄色葡萄球菌黏附等一系列试验,证明抗体对金黄色葡萄球菌具有吞噬调理作用,也有抗金黄色葡萄球菌黏附的作用,这将为制备奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌黏附素疫苗奠定基础。
- 赵艳张爱荣郝永清
- 关键词：奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌原核表达
- 农牧交错区奶牛的饲养管理与疾病防治技术被引量：1
- 2004年
- 由于内蒙古部分农牧交错区科学饲养管理与疾病防治技术缺乏,导致在生产中奶牛常见疾病的发病率较高,造成很大的经济损失,因此本文针对这些奶牛养殖区饲养管理和疾病防治技术的需要,综述了“养”和“防”两大关键技术。一是根据奶牛各饲养阶段对营养需要的不同进行科学合理的饲料搭配与管理;二是根据目前奶牛常发的四大疾病提出了具体的防制措施;运用上述两大技术不仅提高了整体养殖水平,而且带来了很大的经济效益。
- 考桂兰郝永清禹旺盛王彦容郝景峰
- 关键词：农牧交错区奶牛饲养管理疾病防治
- 国内外发酵肉制品微生物限量标准比较研究
- 2006年
- 论述了国内外发酵肉制品的历史起源及发展现状,对我国发酵肉制品发展进行探讨,指出发酵肉制品中有害微生物的危害,并通过比较国外一些国家的微生物限量标准,指出我国发酵肉制品微生物限量标准的重要性和紧迫性,对我国发酵肉制品微生物限量标准制定提出几点意见。
- 马菊孙宝忠郝永清
- 关键词：发酵肉制品
- 华南地区猪圆环病毒1型与2型感染情况调查及相互关系被引量：3
- 2007年
- 根据已发表的猪圆环病毒1型(PCV-1)与猪圆环病毒2型(PCV-2)的全基因组序列,设计4对特异性引物,用套式PCR方法对广东地区的规模养猪场或个体养殖户送检的144份猪血清进行了PCV- 1与PCV-2病毒检测。结果显示PCV-1阳性血清21份,PCV-2阳性血清40份,PCV-1与PCV-2均为阳性的血清7份,PCV-1阳性率为14.6％,PCV-2阳性率为27．8％;PCV-1与PCV-2均为阳性的阳性率为4．9％,从数据上的比较可知PCV-2的感染率高于PCV-1的感染率。说明PCV-2感染比较普遍,患病猪群中也存在一定比例的PCV-1病毒感染。
- 孙丽华徐维加刘燕玲蒋智勇郝永清宋长绪李旭阳
