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非对称PCR-FP技术同步检测HSV-1/-2、CMV和EBV被引量：2: 2009年; 目的应用非对称PCR-荧光偏振（FP）技术建立一种同步检测全血中4种主要疱疹病毒（单纯疱疹病毒1／2型，巨细胞病毒、EB病毒）的新方法。方法以人疱疹病毒属通用引物行非对称PCR，扩增从179例样本中抽提的DNA。PCR扩增产物与特异性单纯疱疹病毒1／2型（HSV-1／-2）、巨细胞病毒（CMV）和EB病毒（EBV）寡核苷酸探针混合物温育杂交，荧光偏振检测技术检测杂交液荧光偏振值，据荧光偏振值判断病毒感染类型，并以DNA序列测定结果为参照。结果与DNA序列测定的阳性检测符合率为100％，但DNA序列测定检测均未检出多重混合感染。非对称PCR-FP方法对HSV-1／-2检测的灵敏度达到1．0×10^3拷贝／ml．对EBV和CMV检测的灵敏度达到2．0×10^3拷贝／ml。结论本法对于4种主要疱疹病毒感染的筛查及预防、预后判断具重要价值。; 张菊吴中亮李丁王香玲梁平郭宴海李宏伟颜真; 关键词：人疱疹病毒荧光偏振同步检测

TDI-FP法检测肿瘤患者ERCC1 Asn118Asn基因多态性: 2010年; 目的建立一种可靠、敏感、全面的ERCC1 Asn118Asn基因多态性检测新方法,用于预测肿瘤患者对铂类的耐药性。方法以ERCC1基因第4个外显子Asn118Asn的一对引物行PCR扩增227例临床样本DNA,将荧光偏振检测技术与模板指导的末端延伸反应(TD I-FP)结合,应用探针杂交延伸反应对临床样本扩增产物进行ERCC1 Asn118Asn基因多态性检测,并以DNA序列测定验证检测结果。结果227例临床样本DNA中,119例(52.4%)ERCC1 Asn118Asn基因为C/C纯合子(AAC)基因型,88例(38.8%)为C/T杂合子基因型,20例(8.8%)为T/T纯合子(AAT)基因型。但DNA序列测定法检出杂合子基因型仅33例。结论本研究初步建立了特异性较好、操作简便、无需标记探针的临床标本ERCC1 Asn118Asn基因多态性检测新方法,有望用于肿瘤患者铂类耐药性的检测。; 张菊李丁李小惠张贺龙郭宴海颜真刘文超; 关键词：基因多态性

建立人乳头瘤病毒6,11型感染皮损移植模型的研究被引量：4: 2002年; 目的　建立人乳头瘤病毒 6,11型感染皮损的移植模型 ,为人乳头瘤病毒感染相关疾病的进一步体内研究提供实验方法。方法　将感染人乳头瘤病毒 6,11型的人新鲜疣组织移植于裸小鼠皮下 ,采用组织病理学及反转录聚合酶链方法验证移植疣组织的组织学及分子生物学特性 ,鉴定所建模型的可靠性。结果　以我们所设计的实验方案 ,大部分裸小鼠的移植皮损组织块在 8周内存活 ,在 5周内组织病理学呈显著的尖锐湿疣组织增生及挖空细胞改变 ,并且从移植疣组织RNA模板中能得到预期大小的人乳头瘤病毒PCR产物 ,表明人乳头瘤病毒感染状态的持续存在。结论　我们所建人乳头瘤病毒 6,11型感染皮损裸小鼠移植模型具备该病毒感染的病理学及分子生物学特征。; 张菊高艳娥阎小君李丁郭宴海苏振兴陈蕤赵锦荣; 关键词：人乳头瘤病毒尖锐湿疣裸小鼠

结肠癌中p73基因改变的意义被引量：28: 2000年; 目的　研究 p73基因在结肠癌中的改变及其意义 .方法　采用 PCR- SSCP方法检测 40例结肠癌及其癌旁非癌组织中 p73基因突变 ,采用定量 RT- PCR方法检测 p73基因的表达 .结果　 1PCR- SSCP检测出 7例存在 p73等位基因缺失 ,未见突变 ;2定量 RT- PCR检测出 33例结肠癌呈高表达 ,7例呈中等表达 ;非癌组织中 2 6例呈低水平表达 ,14例呈中等水平表达 ;p73基因在结肠癌与癌旁组织中的表达存在显著性差异 (P<0 .0 1) .结论　 p73基因以等位基因缺失。; 李陕区崔大祥刘变英闫小君孙安乐郭宴海段杰苏成芝; 关键词：结肠癌 P73基因定量RT-PCR

pLXSN-HPVL2-Angiostatin的构建及转染T细胞淋巴瘤细胞系的体外杀伤活性研究: 2003年; 目的　探讨人乳头瘤病毒 (HPV)感染相关疾病既具靶向性又能阻断局部血管生长的基因治疗新途径。方法　将血管生长抑制因子 (angiostatin)及HPV抗原基因同时克隆入逆转录病毒表达载体pLXSN ,用PA3 17细胞包装、筛选 ,建立高滴度的感染性重组病毒产生细胞系 ,以重组病毒转染T细胞淋巴瘤Hut 78细胞系 ,在体外观察其对HPV感染阳性宫颈癌细胞的杀伤活性。结果　PCR及RT PCR检测显示获得了 pLXSN HPVL2 Angiostatin ,并成功转染Hut 78细胞系 ,镜下观察及MTT检测 ,显示了其对HPV阳性宫颈癌细胞的特异趋向及高杀伤活性。结论　pLXSN HPVL2 An giostatin及其成功转染的Hut; 张菊郭宴海程虹白玉杰李丁赵锦荣阎小君; 关键词：血管生长抑制因子

荧光偏振技术分析全血XPD基因单核苷酸多态性的研究被引量：3: 2010年; 将荧光偏振与非对称基因扩增技术联用,建立了可用于检测全血XPD基因单核苷酸多态性的新方法。用不等量(1∶5)的XPD基因上、下游引物对含单核苷酸多态性位点的目的片段进行非对称扩增,再用两种单核苷酸多态性序列特异的荧光标记探针对扩增产物进行检测。由于扩增得到的单链片段能够与各自不同的荧光标记探针特异结合,使荧光标记分子的分子量增加,偏振值(FP)增高。通过检测增高的FP值,可确定目的片段单核苷酸多态性。采用本方法对98例全血的XPD基因第751位密码子进行了单核苷酸多态性分析,并与传统的荧光偏振检测方法进行了比较,取得满意结果。; 李丁张菊颜真张贺龙郭宴海刘文超李小惠李宏伟; 关键词：单核苷酸多态性 XPD基因

医学研究生药物基因组学教学探讨被引量：3: 2009年; 该文主要分析了药物基因组学在研究生医学教育中的重要性和特点,从教学内容、手段和教学考核方式,提高教学质量和水平,开展教学科研实践活动等方面,对医学研究生的药物基因组学教学进行了初步探讨。; 张菊李丁李宏伟梁平黄启超郭宴海颜真; 关键词：药物基因组学研究生教育教学改革

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郭宴海