- 重复序列DNA探针分析我国恶性疟原虫虫株
- 1992年
- 从人工培养的恶性疟原虫安徽Fcc/AH株、云南思茅株和海南Fcc_1/HN株中,分别提取基因组DNA,去除RNA和降解的DNA,精确定量,平行梯度稀释点样(100ng～0.05 ng),以^(32)P标记的PF rep20为探针,斑点杂交的检测水平安徽Fcc/AH株为0.5 ng、云南思茅株2 ng、海南Fcc_1/HN株3 ng.进一步用HindⅢ限制性内切酶完全酶切3株P.f.DNA,Southern印迹分析显示,PF rep20识别的3株P.f.靶DNA片段的大小、数量及信号强度明显不同,提示我国P.f.安徽Fcc/AH株、云南思茅株和海南Fcc_1/HN株DNA序列存在着差异.
- 孙明林万磊陈培霞周更须刘珺刘忠湘
- 关键词：恶性疟原虫DNA探针基因分析
- 我国两种人体常见疟原虫SSurDNA序列分析及PCR检测研究
- 1997年
- 我国目前疟疾防治形势需采用新的检测技术替代常规镜检血法,以提高工作效率和诊断效果。疟原虫种内存在遗传多样性,其基因序列研究是研制疟疾分子诊断技术、抗疟亚单位疫苗及新药的重要基础。基于rDNA是生物种株分类的一个重要标志,也是核酸检测的一个良好靶物,本项目采用聚合酶链反应,定向克隆和碱基序列测定技术,以云南、海南、安徽、福建、四川五省间日疟患者血样及云南、海南、安徽三省恶性疟原虫培养株和患者血样为材料。
- 万磊陈培霞薛采芳姜绍谆智刚孙明林刘忠湘刘珺
- 关键词：恶性疟原虫疟疾防治亚单位疫苗分子诊断技术定向克隆
- 酸弗林蛋白酶酸性氨基酸簇分选蛋白-1的原核表达、纯化及多克隆抗体制备
- 2008年
- 目的:原核表达和纯化PACS-1,并制备其多克隆抗体。方法:通过RT-PCR扩增出PACS-1的编码基因,测序正确后克隆入原核表达载体pGEX4T-1,转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG诱导PACS-1与GST融合蛋白的表达并经Glu-tathione Sepharose 4B纯化;经SDS-PAGE和Western blot鉴定,应用纯化的蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,用ELISA测定抗体的效价。结果:表达和纯化了PACS-1,并获得了较高效价的抗血清。结论:获得纯化的PACS-1及其多克隆抗体,为进一步研究PACS-1的功能奠定了基础。
- 李英辉刘忠湘赵亚黄豫晓刘军薛采芳万磊
- 关键词：原核表达多克隆抗体
- 我国间日疟原虫地理株SSUrDNA特定序列的比较分析被引量：3
- 1995年
- 用已设计的一对特异引物和建立的双温度点聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术，分别从我国安徽、福建、海南、四川及云南五省疟区采集的间日疟患者血样ＤＮＡ抽提物中，扩增出长约６４０个碱基对（ｂｐ）的ＤＮＡ片段，经限制性酶切鉴定，证实为间日疟原虫小亚单位核糖体核糖核酸基因（ＳＳＵｒＤＮＡ）目的片段。将其分别与载体Ｍ１３ｍｐ１８和Ｍ１３ｍｐ１９连接、克隆，以双脱氧末端终止法测序，并分析比较。结果表明，同一地区二份样本序列完全相同，国内间日疟原虫地理株间及其与已报道的国外虫株克隆间，该序列显示出高度的同源性，但亦存在由个别碱基置换，插入或缺失所表现出的差异。
- 万磊陈培霞薛采芳姜绍谆
- 关键词：疟原虫间日疟原虫地理株
- 并殖吸虫抗原研究
- 1989年
- 并殖吸虫病是一种人兽共患蠕虫病,主要流行于亚洲、非洲和美洲,尤以亚洲地区多见。随着防治工作的开展,近年来免疫学技术在本病临床诊断、疗效鉴定及流行病学等的应用日益广泛,特别是对早期、急性和肺外型患者的诊断显得更为重要。目前对本病的免疫诊断仍主要采用检测血清抗体的方法,所用抗原多为虫体盐水或盐水缓冲液的浸出物。
- 万磊陈培霞李霖吴灿理
- 关键词：并殖吸虫抗原并殖吸虫病
- 全文增补中
- 套式PCR扩增特定SSUrDNA片段诊断恶性疟的研究被引量：11
- 1995年
- 设计2对针对恶性疟原虫（P．f.）小亚单位核糖体核糖核酸基因（SSUrDNA）的特异引物，采用双温度点套式聚合酶链式反应（PCR）技术，从用煮沸法快速萃取的样本DNA中，扩增P．f.SSUrDNA片段，进行恶性疟原虫的检测。结果表明，该系统扩增样本DNA片段大小恒定，经限制性酶切进一步分析，证实均为P．f.SSUrDNA目的片段，其检测原虫的灵敏度为0．8×10-6，较常规镜检敏感，并具有鉴别红内期早期阶段疟原虫种类和确认有无混合感染的潜力。因而认为该系统是灵敏、准确、简易、快速的疟疾诊断新方法，值得推广使用。
- 万磊陈培霞薛采芳姜绍谆
- 关键词：疟原虫疟疾聚合酶链反应基因诊断
- 斯氏狸殖吸虫成虫尿素溶解性抗原用于皮试调查的初步研究被引量：1
- 1993年
- 本文比较了一种新型抗原制剂斯氏狸殖吸虫成虫尿素溶解性抗原(PsAWU)与该虫常规盐水浸出抗原(PsAWS)的皮试效果。结果表明,在425名受试者中,PsAWU和PsAWS的皮试阳性率分别为10.3％(44/425)和10.8％(46/425)。皮试阳性平均肿胀差为6.72±3.94和6.87±3.74。皮试阳性者中,以PsAWS作LA和ELISA,两项试验均阳性者24例。其皮试平均肿胀差PsAWU8.00±4.31、PsAWS8.31±4.40。经统计处理均无显著差别。认为PsAWU可替代PsAWS进行皮试。
- 万磊陈培霞张景栓
- 关键词：斯氏狸殖吸虫抗原
- 套式PCR法检测间日疟原虫的研究被引量：4
- 1996年
- 以滤纸采集间日疟原虫患者血样，点沸法萃取ＤＮＡ模板，用间日疟原虫ＳＳＵｒＤＮＡ特异序列为内外引物，进行双温度点套式ＰＣＲ扩增，其检测原虫率水平为０．８４×１０￣（－６），特异性强。检测云南疟区发热患者血样１６６份，检出率为６３．９％，显著高于镜检法的４８．２％。以镜检法为参照，本法的敏感性为９７％，特异性为６１％，阳性预期值和阴性预期值分别为６５％和９７％，表明是检测间日疟原虫感染的一个良好手段，可作为疟区流行病学监测、药物和疫苗效果考核及供血员筛选的有效工具。
- 孙明林陈培霞薛采芳万磊刘忠湘
- 关键词：疟疾间日疟原虫聚合酶链反应基因诊断
- 通过序列分析筛选单纯疱疹病毒I型蛋白组中的PACS-1结合蛋白被引量：1
- 2001年
- 目的筛选单纯疱疹病毒I型蛋白组中的PACS1结合蛋白。方法根据筛选标准,利用ScanProsite和PSORT软件对蛋白质进行分析,并结合相关文献中的实验数据对分析结果进行校正。结果该方法可有效地筛选出PACS1结合蛋白。利用该方法,在单纯疱疹病毒I型蛋白组中,共筛选出可能与PACS1结合的蛋白质33种。结论建立了一种有效的筛选PACS1结合蛋白的方法。筛选出的单纯疱疹病毒I型的PACS1结合蛋白,将为研究PACS1在疱疹病毒发生及潜伏性感染中的作用提供指导。
- 刘军李英辉薛采芳甄荣芬李旬王宪锋刘忠湘万磊
- 关键词：蛋白组生物信息学
- 恶性疟原虫SSUrDNA特定片段的体外扩增及鉴定被引量：3
- 1994年
- 根据已知疟原虫、其它寄生人体原虫及人的小亚单位核糖体核糖核酸基因（ＳＳＵｒＤＮＡ）编码区序列，借助计算机核酸序列软件分析，设计出一对用于恶性疟原虫（Ｐ．ｆ．）ＳＳＵｒＤＮＡ特定片段扩增的引物。采用双温度点聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，从我国Ｐ．ｆ．ＦＣＣ／ＹＮ茅芽株红内期基因组ＤＮＡ中，扩增出约５７０个碱基对（ｂｐ）的ＤＮＡ片段，与预期长度相符；而间日疟原虫（Ｐ．ｖ．）、利什曼原虫（Ｌ．ｄ．）、弓形虫（Ｔ．ｇ．）及人白细胞ＤＮＡ样本均无此扩增带出现。扩增片段经限制性内切酶消化和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交分析，证实为Ｐ．ｆ．ＳＳＵｒＤＮＡ目的片段。
- 万磊陈培霞薛采芳刘忠湘姜绍谆
- 关键词：疟原虫聚合酶链反应
