于健
- 作品数：49 被引量：162H指数：6
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- miR-155-5p/SOCS1在大鼠角膜移植排斥反应中的作用
- 2021年
- 目的探讨miR-155-5p/细胞因子信号转导抑制物1(SOCS1)在大鼠角膜移植免疫排斥反应中的作用及典必殊能否抑制miR-155-5p/SOCS1通路延缓排斥反应。方法建立大鼠角膜移植模型,随机分为对照组、自体移植组、同种异体移植组、同种异体移植+典必殊组(典必殊组)。术后每天按Larkin法行角膜植片排斥反应评分。术后第14天取各组大鼠术眼角膜,HE染色行组织病理学观察;RT-qPCR检测各组角膜组织中miR-155-5p表达;Western blot检测各组角膜组织中SOCS1蛋白表达。结果对照组和自体移植组角膜植片直至观察期结束均未发生排斥反应,同种异体移植组角膜植片存活时间为(12.25±0.33)d,典必殊组角膜植片存活时间明显延长至(27.08±1.78)d,差异有统计学意义(P<0.001)。HE染色结果显示同种异体移植组角膜可见大量炎症细胞及新生血管管腔结构;自体移植组、典必殊组仅有少量炎症细胞、新生血管管腔。RT-qPCR检测结果显示与对照组相比,自体移植组、同种异体移植组角膜miR-155-5p mRNA相对表达量均显著升高,同种异体移植组角膜miR-155-5p相对表达量显著高于自体移植组,差异有统计学意义(P<0.01)。Western blot检测结果显示与对照组相比,自体移植组角膜SOCS1蛋白相对表达水平明显升高;与自体移植组相比,同种异体移植组角膜SOCS1蛋白相对表达水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.001);与同种异体移植组相比,典必殊组大鼠角膜中miR-155-5p表达下降,SOCS1蛋白相对表达水平升高(P<0.001)。结论miR-155-5p/SOCS1参与大鼠角膜移植术后排斥反应,典必殊可通过阻断这一通路延缓排斥反应。
- 林淑玫吴京马明卢晓丽文静徐静田慧文于健
- 关键词：免疫排斥典必殊
- 8型重组腺相关病毒介导绿色荧光蛋白基因在角膜基质细胞中的表达及影响被引量：1
- 2011年
- 目的:评价8型重组腺相关病毒(rAAV8)介导增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)转染角膜基质细胞后的表达及对细胞增殖的影响。方法:以不同MOI的rAAV8-EGFP转染大鼠角膜基质细胞,转染后以倒置荧光显微镜观察角膜基质细胞中GFP的表达,流式细胞仪分析角膜基质细胞中rAAV8-EGFP表达的阳性率。MTT法分别检测rAAV8和rAAV8-EGFP转染对角膜基质细胞增殖的影响。结果:倒置荧光显微镜观察rAAV8-EGFP转染角膜基质细胞后GFP的阳性表达7d达到高峰,此时流式细胞仪检测rAAV8-EGFP对角膜基质细胞的转染效率分别为31.5%(MOI=5×103),42.5%(MOI=5×104),54.8%(MOI=5×105);MTT检测结果显示rAAV8及rAAV8-EGFP转染对角膜基质细胞增殖均无明显影响。结论:rAAV8-EGFP能有效地转染角膜基质细胞,并且对细胞增殖无明显影响。
- 汤明芳于健白浪刘琼
- 关键词：重组腺相关病毒基因转染角膜基质细胞增殖
- 免疫赦免在小鼠角膜移植排斥中的作用研究被引量：3
- 2011年
- 目的:阐明同种异体小鼠角膜移植术后免疫排斥反应及免疫赦免的相关性。方法:建立小鼠原位角膜移植及同种异体小鼠角膜移植实验模型。观察原位移植与同种异体移植术后角膜植片发生排斥的情况,对比两种移植术后植片的存活率,了解小鼠角膜移植术后发生排斥反应与免疫赦免反应之间的关系。结果:小鼠原位角膜移植术后植片100%存活;同种异体小鼠角膜移植术后存活率为25%。结论:小鼠角膜移植术后免疫排斥并非绝对,免疫赦免在角膜移植术中发挥重要作用。
- 黄晓环吴京于健熊柯刘琼
- 关键词：免疫赦免小鼠角膜移植
- 不同浓度肽聚糖对角膜上皮细胞Toll样受体(TLR)2和TLR4表达的影响被引量：3
- 2017年
- 目的研究不同浓度肽聚糖对角膜上皮细胞Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)2和TLR4表达的影响。方法原代培养C57小鼠角膜上皮细胞,随机分为对照组(无肽聚糖刺激)及按照肽聚糖刺激浓度分为10 mg·L^(-1)组、30 mg·L^(-1)组、80 mg·L-1组(作用时间均为12 h);按照肽聚糖刺激时间分为12 h组、24 h组、36 h组(作用浓度均为30mg·L^(-1)),应用实时荧光定量PCR与流式细胞术检测各组TLR2、TLR4 mRNA和蛋白的表达量。结果与对照组(1.00±0.14、1.00±0.01)相比,10 mg·L^(-1)组(4.35±0.46、3.53±0.50)、30 mg·L^(-1)组(8.06±0.72、5.31±0.34)、80 mg·L^(-1)组(2.93±0.46、2.23±0.04)的TLR2、TLR4 mRNA表达增加,差异均有统计学意义(均为P<0.05);与对照组(1.00±0.14、1.00±0.01)相比,12 h组(2.94±0.46、2.23±0.50)TLR2、TLR4 mRNA表达增加,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。与对照组相比,各浓度组和12 h组角膜上皮细胞TLR2、TLR4蛋白表达均增加,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论肽聚糖可以刺激小鼠角膜上皮细胞TLR2、TLR4 mRNA和蛋白表达增加,提示感染性角膜炎的发生、发展可能与角膜上皮细胞TLR2、TLR4识别病原体并参与炎症反应有关。
- 刘晶白浪苏亚茹于健孟婷陈敏婷
- 关键词：肽聚糖TOLL样受体家族角膜上皮细胞感染性角膜炎
- 糖尿病性视网膜病变以及黄斑水肿和黄斑中心凹下脉络膜厚度的关系被引量：13
- 2016年
- 目的:观察糖尿病性视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)以及其是否存在黄斑水肿(diabetic macular edema,DME)和黄斑中心凹下脉络膜厚度(subfoveal choroidal thickness,SFCT)的关系。方法:纳入已确诊糖尿病患者70例122只眼。其中男36例64只眼,女34例58只眼,平均年龄(56.7±9.7)岁。所有患者均行必要眼科检查。分组:无DR(no diabetic retinopathy,NDR)组、轻度至中度非增生型DR(轻中度NPDR)组、重度非增生型DR(重度NPDR)组、增生型DR(proliferative diabetic retinopathy,PDR)组。后三组又分为伴有和不伴有显著性黄斑囊样水肿(clinical significant macular edema,CSME)两个亚组(CSME+/CSME-)。应用Sn OCT深度增强成像技术(EDI)测量受检者SFCT,应用SPSS 17.0软件统计分析。结果:NDR组、轻中度NPDR组、重度NPDR组、PDR组SFCT分别为(282.94±104.21)、(313.62±94.40)、(382.44±76.91)、(335.00±73.82)μm,NDR组SFCT比其他三组薄,差异有统计学意义(F=2.786,P=0.03)。轻中度NPDR/CSME-组与轻中度NPDR/CSME+组、重度NPDR/CSME-组与重度NPDR/CSME+组、PDR/CSME-组与PDR/CSME+组SFCT比较差异均无统计学意义。结论:DR患者的SFCT随视网膜病变程度加重增厚;视网膜病变程度相同情况下,CSME+与CSME-患者SFCT无明显差异。
- 唐晓娟刘琼于健丁媛媛吴京
- 关键词：糖尿病性视网膜病变黄斑水肿脉络膜
- 携带人内皮抑素基因的重组腺相关病毒感染对人脐静脉内皮细胞增生的影响被引量：1
- 2010年
- 目的评价携带人内皮抑素(endostatin,ES)基因的重组腺相关病毒(rAAV)感染对人脐静脉内皮细胞(ECV304细胞)增生的影响。方法以不同感染复数的rAAV-ES感染ECV304细胞,Western blotting检测细胞裂解液中ES蛋白的表达,ELISA法检测ES蛋白的分泌情况,流式细胞仪分析感染后ECV304的细胞周期,MTT法检测ECV304增殖情况。结果感染了rAAV-ES的ECV304细胞可表达并分泌ES蛋白,表达高峰在感染后96h,表达量为96.93μg·L-1;感染后的ECV304细胞增殖受到抑制,流式细胞仪分析其周期中G0与G1期细胞比例明显增加,S期细胞比例显著减少;MTT检测显示以感染复数为5×105vg.cell-1感染96h时对ECV304细胞增殖的抑制率最高(54.54±1.37)%。结论 rAAV-ES感染ECV304细胞后有高水平的ES蛋白表达并能显著抑制ECV304细胞的增殖。
- 汤明芳于健钟彦彦陆晓和
- 关键词：重组腺相关病毒内皮抑素基因脐静脉内皮细胞增生
- 敲除TLR2基因对同种异体小鼠角膜移植排斥反应的影响被引量：2
- 2016年
- 目的探讨敲除Toll样受体2(toll-like receptor 2,TLR2)基因后是否抑制同种异体小鼠角膜排斥反应的发生。方法以BALB/c为供体,各取30只C57BL/6和同背景TLR2基因敲除鼠为受体行右眼角膜移植术,设为野生组(WT)和基因敲除组(KO);取19只C57BL/6行右眼自体角膜移植术,为自体组(ISO);各取9只C57BL/6和TLR2基因敲除鼠分别设为野生对照组(WT control)和基因敲除对照组(KO control)。术后每周两次观察植片并记录免疫排斥的发生时间;术后14 d,收集术眼同侧颈部淋巴结,行流式细胞术分析CD4+T细胞百分比;收集术眼角膜,行免疫组织化学染色和实时荧光定量PCR检测角膜干扰素(interferon,IFN)-γ、TLR2和My D88的表达。结果 WT组和KO组小鼠角膜移植术后中位生存时间KO组(35.0±3.8)d长于WT组(21.0±1.5)d(P<0.05)。流式细胞术分析显示,WT组同侧颈部淋巴结CD4+T细胞百分比较WT control组明显增高(P<0.05),而ISO和KO组相对于其对应的control组(WT/KO control)差异均无统计学意义(均为P>0.05);免疫组织化学结果显示,ISO和KO组间角膜IFN-γ和My D88分子表达无差异,但两者均低于WT组。KO组角膜几乎不表达TLR2分子,ISO组有微量表达,WT组表达明显增高;PCR检测显示,ISO和KO组角膜IFN-γ和TLR2 mRNA相对表达量差异均无统计学意义(均为P>0.05),但两者均低于WT组(均为P<0.05);KO组角膜My D88 mRNA相对表达量比ISO组高(P<0.05),但两者均低于WT组(均为P<0.05)。结论敲除TLR2基因可以一定程度抑制同种异体小鼠角膜排斥反应的发生。
- 苏亚茹白浪汤明芳于健刘晶孙宇飞孟婷
- 关键词：TOLL样受体2MYD88角膜移植免疫排斥CD4+T细胞
- 基质细胞衍生因子-1与趋化因子受体4在大鼠角膜移植排斥反应中的作用被引量：4
- 2016年
- 目的探讨基质细胞衍生因子-1(SDF-1)与基质细胞衍生因子-1(CXCR4)在大鼠角膜组织中的表达及其在角膜移植术后免疫排斥反应中的作用。方法取15只Wistar大鼠作为正常对照组;取22只Wistar大鼠行自体角膜移植术作为自体组;取22只SD大鼠与44只Wistar大鼠,以SD大鼠为供体,Wistar大鼠为受体行穿透性角膜移植,术后随机抽取22只归入典必殊组,术眼滴典必殊眼液(每日2次),剩余22只归入异体组,术眼滴同等量生理盐水,共一个月。参照Larkin法对各组角膜植片进行临床评估;分别于术后第5、9天取术眼角膜植片,行组织病理学观察、免疫组化检查、实时荧光定量PCR检测。结果自体组不发生排斥反应,典必殊组角膜存活时间为24±0.32 d,远高于异体组10±0.36 d(P<0.001)。组织病理学检查发现异体组角膜有大量炎性细胞浸润以及新生血管形成。SDF-1和CXCR4 mRNA在异体组角膜组织中表达水平明显升高(第5天P<0.001,第9天P<0.01),典必殊组较异体组明显降低。免疫组化检查发现SDF-1/CXCR4主要表达在角膜植片的上皮层与基质层,异体组角膜组织SDF-1和CXCR4含量明显升高。结论 SDF-1/CXCR4可能参与了大鼠角膜移植术后早期的排斥反应,其机制可能为SDF-1特异性诱导CXCR4+细胞成熟和朝着排斥部位趋化,并促进角膜新生血管形成。
- 巫小送吴京马明卢晓丽于健张振瑜
- 关键词：免疫排斥角膜移植
- TLRs在大鼠穿透角膜移植术后排斥反应中的作用被引量：2
- 2010年
- 目的动态检测大鼠角膜组织TLR2、TLR3、TLR4mRNA的表达,研究TLR2、TLR3、TLR4在穿透角膜移植术后免疫排斥反应中的作用。方法采用SPF级雌性SD大鼠108只为受体,SPF级Wistar大鼠36只为供体,另取SPF级雌性SD大鼠6只12只眼为正常对照组。受体大鼠分为3组:自体角膜移植组(A)、同种异体角膜移植组(B)和同种异体角膜移植后糖皮质激素应用组(C),A、B、C组各36只大鼠接受穿透角膜移植术,术后裂隙灯下观察角膜透明度、新生血管情况并采用排斥反应指数(RI)进行评分。分别于术后第5、7、9天获取角膜标本行组织病理学检查和荧光实时定量PCR(real-timePCR)检测,动态观察角膜组织中TLR2、TLR3、TLR4mRNA的表达。结果术后随时间变化,A、B、C组大鼠角膜植片均出现不同程度的水肿、混浊、新生血管生长。B组大鼠角膜RI平均在术后7d符合排斥反应的诊断标准并经病理学检查证实。A组和C组大鼠角膜的RI计分未达到排斥反应诊断标准。正常大鼠角膜可见TLR2、TLR3、TLR4mRNA表达;术后9dB组大鼠角膜TLR2mRNA的表达较A组显著增加,差异有统计学意义(P<0.05);TLR3mRNA和TLR4mRNA在B组各时间点间表达的差异倍数比较均无统计学意义(P=0.30;P=0.32),但组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 TLR2可能作为天然免疫识别受体识别移植抗原,参与角膜移植术后的免疫排斥反应。
- 白浪陆晓和于健钟彦彦武海军熊柯
- 关键词：TOLL样受体家族穿透角膜移植排斥反应实时定量PCR
- The managenent of surgery and the complications on nonmagnetic intraocular foreign bidies in posterior segment
- 于健黄晓环吴京宗建华张庆华
