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刘先菊: 作品数：46 被引量：112H指数：6; 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医学实验动物研究所更多>>; 发文基金：国家社会公益研究专项计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>; 相关领域：医药卫生生物学农业科学化学工程更多>>

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兔抗金黄地鼠酶标抗体的制备及应用被引量：1: 2012年; 目的纯化金黄地鼠血清IgG,制备兔抗金黄地鼠酶标抗体(IgG-HRP),开展金黄地鼠仙台病毒的初步检测。方法采用亲和层析纯化法纯化金黄地鼠IgG,用SDS-PAGE电泳测定IgG纯度并制备兔抗金黄地鼠IgG抗体(second antibody,Ab2);用免疫双扩散法检测抗血清效价后,再用亲和层析纯化抗血清IgG(Ab2);采用改良过碘酸钠标记法制备兔抗金黄地鼠酶标抗体(rabbit anti-hamster IgG-HRP);用直接ELISA和Western-blot法对兔抗金黄地鼠IgG酶标抗体进行工作浓度测定;应用金黄地鼠酶标抗体对金黄地鼠仙台病毒进行酶免检测(IEA)。结果金黄地鼠血清IgG纯度达95%;兔抗金黄地鼠IgG抗体(Ab2)免疫双扩散效价为1:64;兔抗金黄地鼠IgG-HRP经直接ELISA和Western-Blot测定工作浓度分别为1∶5000和1∶2000;酶免(IEA)效价为1∶2000。结论高效快速纯化了金黄地鼠IgG,制备了金黄地鼠IgG-HRP,为金黄地鼠病原微生物的血清学检测提供了条件。; 刘先菊林树柱杨帆佟巍刘云波; 关键词：金黄地鼠酶标抗体

蝙蝠血清IgG的纯化及兔抗蝙蝠IgG酶标抗体的制备被引量：5: 2008年; 目的纯化蝙蝠血清IgG,制备兔抗蝙蝠IgG酶标抗体。方法采用亲和层析纯化法纯化蝙蝠血清IgG,SDS-PAGE电泳鉴定蝙蝠IgG纯度。免疫大白兔制备兔抗蝙蝠IgG抗血清,免疫双扩散法测定抗血清效价,亲和层析纯化法纯化抗血清IgG。用改良过碘酸钠标记法制备兔抗蝙蝠IgG酶标抗体,直接ELISA和Western blot法对兔抗蝙蝠IgG酶标抗体进行工作浓度测定。结果纯化的蝙蝠血清IgG,其SDS-PAGE测定纯度大于95%;免疫大白兔所制备的抗血清免疫双扩散效价为1∶64;用改良过碘酸钠标记法制备兔抗蝙蝠IgG酶标抗体,其直接ELISA和Western blot工作浓度分别为1∶12800和大于1∶2000。结论制备了蝙蝠血清IgG的抗血清和酶标抗体,为蝙蝠的血清学检测体系提供了技术和资源储备。; 刘先菊林树柱杨帆宋铭晶施海霞全雄志秦川张连峰; 关键词：蝙蝠 IGG HRP

兔抗麻雀IgY酶标抗体的制备被引量：4: 2008年; 目的制备辣根过氧化物酶(HRP)标记的兔抗麻雀IgY抗体,为禽类血清学检测体系的建立提供技术储备。方法硫酸铵盐析法粗提麻雀血清IgY,进一步在SDS-PAGE上分离后,切下带有目的条带的凝胶作为免疫原,免疫实验兔制备抗血清,Protein-A柱亲和纯化兔抗IgY血清IgG,,使用改良过碘酸钠法制备酶结合物。ELISA检测酶标抗体的工作浓度,western blotting检测酶标抗体的特异性。结果硫酸铵盐析法粗提IgY,可去除部分杂蛋白,SDS-PAGE上分离后切下带有目的条带的凝胶,可以得到足够纯度的抗原,将带有IgY的凝胶作为抗原免疫后获得的抗血清经Protein-A纯化后,二抗在SDS-PAGE上鉴定,纯度达到99%以上。改良的过碘酸钠法标记获得的抗体浓度为1.008 mg/mL,ELISA检测酶标抗体效价为1∶1000。Western blotting鉴定抗体具有特异性。结论获得了优质可靠的兔抗麻雀IgY酶标抗体。; 杨帆刘先菊林树柱秦川张连峰; 关键词：麻雀 HRP

兔抗五种鱼免疫球蛋白抗体的制备和HRP标记被引量：6: 2008年; 目的制备兔抗鱼类免疫球蛋白抗体并进行辣根过氧化酶标记,为鱼类血清学检测系统的建立提供工具。方法利用proteinA亲和层析的方法纯化鱼血清免疫球蛋白,免疫大耳白兔制备抗血清,利用免疫双扩散来检测抗血清的效价,并用Protein A亲和层析的方法来纯化兔抗鱼免疫球蛋白的抗体,采用简易过碘酸钠法对纯化的兔抗鱼免疫球蛋白的抗体进行HRP标记,通过ELISA方法测定标记抗体的效价,并利用Western blotting来考察标记抗体与其他常见鱼类血清蛋白间的交叉反应。结果纯化了鳙、鲤、乌鳢、黄鳝、鲈五种鱼血清免疫球蛋白,免疫双扩散法测定兔抗这五种鱼免疫球蛋白的抗血清效价均达到1∶32,并对纯化的兔抗鳙、鲤、乌鳢、黄鳝、鲈五种鱼类免疫球蛋白的抗体进行了HRP标记,ELISA测定标记抗体的效价达到1∶10000左右,Western blots显示标记抗体与部分其他鱼类免疫球蛋白之间存在不同程度的交叉反应。结论成功制备了HRP标记的兔抗鱼类免疫球蛋白抗体,为鱼类血清学检测体系的建立提供了工具。; 林树柱李万波刘先菊杨帆秦川张连峰; 关键词：免疫球蛋白 HRP

兔抗狨猴IgG-HRP标记抗体的制备及初步鉴定被引量：1: 2018年; 目的狨猴血清中纯化IgG抗体,制备兔抗狨猴抗血清,并纯化抗血清中IgG,HRP(辣根过氧化物酶)标记兔抗狨猴IgG。方法 Hi TrapTMProtein G亲和层析纯化狨猴和兔抗狨猴血清IgG,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行纯度鉴定,免疫琼脂双扩散法(double immunodiffusion assay)测定制备的兔抗狨猴抗血清效价,改良"简易过碘酸钠标记法"制备兔抗狨猴IgG-HRP标记抗体,酶联免疫吸附测定法(ELISA)及蛋白免疫印迹法(Western blotting)对兔抗狨猴IgG-HRP标记抗体进行工作浓度测定及特异性鉴定。结果狨猴和兔抗狨猴血清纯化IgG纯度分别大于95%、97%;兔抗狨猴IgG抗血清的效价为1∶64。ELISA和Western blotting鉴定了兔抗狨猴IgG-HRP酶标抗体参考工作浓度为1∶256 000、1∶15 000,特异性明显。结论制备狨猴IgG-HRP标记抗体并初步鉴定,包括ELISA及Western blotting的特异性及使用浓度,为狨猴病原体免疫学检测体系及分子免疫学检测体系储备了资源。; 丛日旭刘先菊滕永康向志光佟巍张丽芳阮研硕刘云波; 关键词：狨猴抗体制备酶标抗体

血管紧张素转换酶2在SARS-CoV感染中的功能(第1部分)——血管紧张素转换酶2基因剔除小鼠的建立被引量：1: 2005年; 目的血管紧张素转换酶是肾素-血管紧张素系统的重要组成部分。血管紧张素转换酶主要功能是通过把血管紧张素Ⅰ转换成血管紧张素Ⅱ来调节血压,最新的研究显示它也是SARS冠状病毒的一种受体。建立血管紧张素转换酶2基因剔除小鼠,为进一步的SARS机理研究提供工具。方法通过将D3小鼠胚胎干细胞DNA进行同源重组,用反向表达的新霉素基因替代ACE2基因-2000 bp至+489 bp的DNA片段,并用Western blot检测纯合体小鼠ACE2基因的表达。结果血管紧张素转换酶2基因剔除小鼠ACE2基因的表达被完全阻遏。结论建立了ACE2基因剔除小鼠。; 秦川刘先菊沈洁董伟张扬清宋明晶邸冉张连峰; 关键词：基因剔除 ACE2 小鼠

近交系小鼠微卫星DNA引物的筛选和Tm值优化研究被引量：4: 2012年; 目的通过对近交系小鼠微卫星引物的筛选和Tm值优化研究,以探索小鼠DNA多态性检测方法。方法随机选用32对位于小鼠不同染色体的微卫星引物,用PCR扩增方法对常用C57BL/6、C3H、BALB/c、DBA/2、129、FVB及SCID近交系小鼠DNA多态性进行扩增和电泳分析,并对其中25对引物的Tm值进行优化。结果 25对引物可稳定扩增,2对引物在不同品系小鼠间表现为单态性,23对引物在不同品系间呈多态性,10对引物呈显著多态性(3～4个态性)。结论所筛选和优化的25对微卫星引物,对不同品系小鼠DNA可稳定扩增,其电泳结果具有较高的DNA多态性,可反映不同品系小鼠的遗传概貌。; 刘先菊王艳蓉高子琪代小伟佟巍张丽芳刘云波; 关键词：近交系小鼠微卫星引物

淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒在实验大鼠中的感染状况被引量：6: 2010年; 目的对实验室留存的大鼠血清样本进行淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)抗体检测,调查LCMV在我国实验大鼠中的感染情况。方法依据现行国家标准中规定的免疫荧光试验(IFA)方法对我实验室保存的172份大鼠血清样本(包括48份无级别、100份清洁级和24份SPF级大鼠血清样本)进行LCMV抗体检测。结果无级别大鼠血清样本(n=48)15份阳性,阳性率为33.25%,强阳性样本滴度可达1∶1280;SPF级及清洁级大鼠血清样本全部阴性。结论大鼠可以感染LCMV,实验动物等级标准应增加对大鼠LCMV的检测。; 佟巍乔红伟魏强张丽芳代小伟刘先菊王艳荣刘云波

黑线毛足鼠和金仓鼠血清IgG的纯化及抗血清的制备被引量：6: 2007年; 目的纯化黑线毛足鼠和金仓鼠血清IgG,制备兔抗金仓鼠和黑线毛足鼠血清IgG的抗血清。方法用Hitrap Protein G亲和层析纯化黑线毛足鼠和金仓鼠血清IgG,经SDS-PAGE电泳鉴定纯度,标准免疫方法免疫兔子制备抗血清。结果黑线毛足鼠和金仓鼠血清IgG对protein G有很高的亲合性,用Hitrap Protein G亲和层析纯化,得到高纯度黑线毛足鼠和金仓鼠IgG,利用纯化的IgG作抗原制备了高效价的抗血清,免疫双扩散测定效价达1∶32和1∶16。结论证实黑线毛足鼠和金仓鼠IgG和Protein G具有很高的亲和性,Protein G亲和层析是纯化黑线毛足鼠和金仓鼠IgG有效的方法之一,制备了黑线毛足鼠和金仓鼠IgG的抗血清。; 刘先菊林树柱杨帆李万波秦川张连峰; 关键词：金仓鼠 IGG

鹭科和鸬鹚科卵黄抗体的纯化被引量：1: 2007年; 目的纯化鹭科具有代表性的夜鹭及鸬鹚科具有代表性的鸬鹚的卵黄抗体IgY。方法采用了水稀释法和硫酸铵分级沉淀法粗提IgY,再过HiTrap IgY Purification HP柱子进一步纯化。结果经两步纯化,得到了纯化的鸬鹚和夜鹭的卵黄抗体IgY,经SDS-PAGE检测为电泳纯,夜鹭和鸬鹚的卵黄抗体的相对分子质量约为180×103。结论证实了鸬鹚和夜鹭的卵黄抗体IgY的存在及其特性,为这两种鸟类的卵黄抗体IgY纯化,二级抗体制备提供了参考。; 杨帆林树柱刘先菊全雄志秦川张连峰; 关键词：鹭科 IGY

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