刘德辉
- 作品数：23 被引量：86H指数：6
- 供职机构：华南农业大学更多>>
- 发文基金：江西省教育厅科学技术研究项目广东科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程更多>>
- 重组猪圆环病毒2型Cap抗原的制备方法
- 本发明公开了一种重组猪圆环病毒2型Cap抗原的制备方法，是采用酵母表达系统，先扩增PCV2-ORF2基因，然后构建表达工程菌，即将扩增序列插入酵母表达载体，形成重组表达载体，线性化后转化毕赤酵母宿主细胞，构建表达工程菌，...
- 黄毓茂刘娜吴锋刘德辉
- 文献传递
- 抗菌肽Cecropin D基因在毕赤酵母中的表达与抗菌活性分析被引量：8
- 2011年
- 为使抗菌肽Cecropin D在巴斯德毕赤酵母中高效表达,本研究根据Cecropin D全基因序列和毕赤酵母的偏嗜性设计合成4条寡聚西核苷酸,SOEing-PCR技术法合成Cecropin D基因序列,并克隆至酵母表达载体pGAPZαA中,构建重组表达质粒,将其线性化后电击转化毕赤酵母菌株SMD1168,经高浓度博莱霉素筛选,获得高拷贝转化子,菌液PCR鉴定表明Cecropin D基因已整合到酵母基因组中。在GAP强启动子调控下,重组Cecropin D高效分泌表达,产物耐高温耐酸碱,并对部分革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有抑菌效果,对E.coliDH5α和S.aureus Cowan I株的MIC值分别为2.17μg/mL和4.55μg/mL。
- 郭春和焦茂兴何俊刘德辉黄毓茂
- 关键词：抗菌肽CECROPIN毕赤酵母抗菌活性
- O型口蹄疫病毒VP1基因在毕赤酵母中的表达及免疫原性分析被引量：6
- 2010年
- 利用毕赤酵母系统表达O型口蹄疫病毒VP1基因,并对表达的蛋白进行免疫原性鉴定。将VP1基因克隆入毕赤酵母分泌性表达载体pPICZα-C中,获得重组表达载体pPICZαC-VP1。将重组质粒pPICZαC-VP1线性化后,用电穿孔法转入酵母菌X-33,用Zeocin+YPDS平板筛选重组子,经甲醇诱导表达后,SDS-PAGE和Western blot分析表达产物,并用酵母表达的VP1蛋白免疫小鼠,然后通过ELISA检测抗体水平。结果表明,酵母所表达的VP1蛋白能诱导小鼠产生特异性体液免疫应答。
- 焦颖龚劲峰何校澎黄辉荣刘德辉张春红吴锋黄毓茂
- 关键词：口蹄疫病毒VP1毕赤酵母免疫原性
- 丝状真菌异源蛋白高效表达的研究进展被引量：5
- 2010年
- 丝状真菌作为细胞工厂在生物技术领域被广泛应用于生产药物、化学试剂和酶类。近年来,丝状真菌基因组学领域取得了快速发展,利用丝状真菌表达异源蛋白也越来越受到重视。本文从基因表达与调控、蛋白质分泌途径及丝状真菌菌株等方面对丝状真菌高效表达异源蛋白的最新研究进展作一综述。
- 刘德辉黄毓茂徐蕙
- 关键词：丝状真菌基因组学蛋白质分泌异源蛋白
- 蝉新型抗菌肽Cryptonin在毕赤酵母中的分泌表达及活性鉴定被引量：3
- 2010年
- 根据毕赤酵母(Pichia pastoris)密码子的偏嗜性,通过SOEing法合成改造后的Cryptonin基因片段。基因克隆到pPICZα-C质粒中,获得分泌型重组酵母表达载体pPICZα-C-Cryptonin。pPICZα-C-Cryptonin通过限制性内切酶SacⅠ酶切线性化后,经电穿孔法转入毕赤酵母细胞X-33内。PCR检测Cryptonin基因与毕赤酵母染色体稳定结合,Zeocin抗性筛选,得到高拷贝转化子。在AOX(醇氧化酶)启动子调控下,Cryptonin蛋白获得分泌表达,其相对分子质量约为2700。表达产物耐热性强,在100℃条件下10min内抗菌活性不变,煮沸30min以上仍具有活性。琼脂糖孔穴扩散法检测显示表达产物对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都具有很好的抑菌活性。
- 刘德辉焦颖徐蕙吴锋张春红黄毓茂
- 关键词：基因设计分泌表达抑菌活性
- 抗菌肽的生物活性及在畜牧生产中的应用前景被引量：10
- 2009年
- 近年来,由于抗生素的滥用而不时地引起耐药菌的出现,而且出现的频率超过新型抗生素的开发速度,以至于给感染性疾病的治疗带来诸多新的问题。抗菌肽作为传统抗生素的可能替代物以其无比优越的特性越来越成为人们关注的热点。本文综述了抗菌肽的分类与特征、生物活性,并阐述了抗菌肽在畜牧业的应用前景。
- 刘德辉徐蕙黄毓茂
- 关键词：抗菌肽生物学活性
- 胰高血糖素样肽-2的研究进展被引量：1
- 2010年
- 胰高血糖素样肽-2(glucagon-like peptide-2,GLP-2)是胰高血糖素原基因(proglucagon)在肠上皮组织中由L内分泌细胞表达翻译后处理加工的产物之一,它作为一个促肠黏膜生长修复物质,促进绒毛的高度和隐窝深度的增长,同时GLP-2能恢复和维持小肠黏膜上皮屏障的完整性,促进小肠损伤后的修复等作用。因此,GLP-2在动物营养上的应用前景广阔。作者从GLP-2的分泌与代谢、功能等方面综述GLP-2的最新研究进展。
- 张承勇梁梓森刘德辉黄毓茂
- 关键词：肠绒毛营养吸收
- 猪β-干扰素的研究进展被引量：1
- 2009年
- 干扰素是由干扰素诱生剂诱导生物细胞所产生的一类高活性多功能的糖蛋白,干扰素自被发现以来,由于其广谱抗病毒、抗肿瘤活性及其强大的免疫调节作用而受到研究者们的重视。在其基因结构、作用机理及体外重组表达等方面都取得了巨大突破。作者综述了猪β-干扰素的基本特性、作用机理及其临床应用。
- 徐蕙刘德辉郭霄峰
- 一种猪细小病毒基因工程疫苗的制备方法
- 本发明公开了一种猪细小病毒基因工程疫苗的制备方法。本发明所述方法首先是构建重组酵母表达载体pGAPZαA-VP2，然后电击转化巴斯德毕赤酵母菌株SMD1168，使VP2蛋白在YPD培养基中高效分泌表达，形成不含病毒核酸的...
- 黄毓茂郭春和刘德辉
- 猪β干扰素基因的修饰及其蛋白活性的检测被引量：1
- 2010年
- 为获得高效表达的重组猪β干扰素,在保留编码蛋白序列的同时,对PoIFN-β基因进行毕赤酵母偏嗜性改造,使基因序列G+C的含量增加到最大限度,并将其终止密码子改为TAA。构建了酵母表达载体pPICZαC-PIB。pPICZαC-PIB经SacⅠ酶切线性化后电转导入毕赤酵母菌株X-33。对PCR鉴定为阳性的酵母菌株进行高抗性筛选,获得1株高效表达PoIFN-β酵母菌株,其表达量约258.3 mg/L,是未经密码子改造菌株表达产物的3.4倍。经SDS-PAGE和Western blotting检测,表达产物为相对分子质量约22 000和24 000的蛋白,两者均可与抗PoIFN-β阳性血清发生特异反应。将表达产物进行氨基酸测序,测得2段随机肽段与PoIFN-β的氨基酸序列完全一致。在VSV-Vero系统上检测重组PoIFN-β对水泡性口炎病毒在Vero细胞中增殖的抑制作用,其抗病毒活性为1.88×106IU/L,是未经密码子改造菌株表达产物抗病毒活性的5.6倍。用MTT法检测PoIFN-β对猪外周血淋巴细胞成熟的影响,结果表明,猪重组PoIFN-β能有效刺激淋巴细胞转化,具有良好的免疫学活性。
- 徐蕙朱艳平刘京军刘德辉郭霄峰
- 关键词：基因修饰毕赤酵母抗病毒活性MTT
