卞智萍
- 作品数：45 被引量：264H指数：7
- 供职机构：江苏省人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金江苏省科委社会发展基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 人心肌肌钙蛋白I的纯化及鉴定被引量：6
- 2004年
- 目的 提取和纯化人心肌肌钙蛋白I。方法 心室肌经匀浆、离心、盐析提取 ,CMSephadexC 5 0柱层析 ,DEAESephadexA 5 0柱层析制备人cTnI ;经 (cTnI)活性检测、SDS PAGE、westernblot鉴定。结果 从 6 5 g湿重心肌中获得 4 .1mgcTnI ,分子量约为 2 4 0 0 0 ,纯度约为 84 %。结论 纯化的cTnI可被cTnI单克隆抗体特异识别 ,本实验从人心肌中成功制备cTnI。
- 卞智萍杨笛顾春荣徐晋丹杨国平张寄南
- 关键词：人心肌肌钙蛋白I纯化急性心肌梗死
- 妊娠相关血浆蛋白-A单克隆抗体的制备和初步鉴定
- 2006年
- 目的制备娠相关血浆蛋白-A(PAPP-A)单克隆抗体(M cAb)。方法利用PAPP-A抗原免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤技术将免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,间接ELISA方法对细胞培养上清检测、筛选,建立分泌PAPP-A单克隆抗体的杂交瘤细胞株,扩人培养后,Balb/c小鼠腹腔注射杂交瘤细胞株,产生腹水后,对腹水进行收集、纯化、签定。结果筛选出稳定分泌PAPP-A M cAb的杂交瘤细胞株,W estern-b lot分析证实M cAb与PAPP-A有较高的特异性及敏感性。结论本实验成功制备了抗PAPP-A特异性的M cAb,可用于PAPP-A免疫检测方法的建立。
- 顾荣花孙丽洲顾春荣卞智萍杨笛张寄南
- 关键词：妊娠相关血浆蛋白-AWESTERNBLOTTING
- 急性心肌梗死患者血小板反应素-4基因A387P多态性分析
- 2008年
- 目的 研究中国汉族人群血小板反应素-4（thrombospondin-4，TSP-4）基因G29926C（A387P）多态性与急性心肌梗死（AMI）发病的关联性。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）方法分析TSP-4A387P多态性，病例组为302例经冠脉造影确诊的AMI患者，对照组为337例冠脉造影阴性、排除冠心病诊断者。结果GC基因型在AMI组和对照组的分布差异无统计学意义（5．3％vs7．1％，P=0．34），未检测到CC纯合子。C等位基因频率在AMI组和对照组分别为2．6％、3．6％（P=0．35），对照组TSP-4387A—P变异频数明显地低于西方人群（3．6％vs19．6％～23．2％）。多元logistic回归分析显示TSP-4A387P多态性与AMI的发生无显著性相关（OR=0．81，95％CI：0．41～1．62，P=0．55）。结论TSP-4基因387A—P变异在中国汉族人群中发生频率明显地低于西方人群，且与AMI的发病无显著相关性。
- 何国平高磊马继政戚传平卞智萍杨笛吴恒芳陈相健张寄南
- 关键词：血小板反应素基因多态性急性心肌梗死
- 抗人脑钠肽单克隆抗体的制备及其鉴定
- 2006年
- 目的:制备抗人脑钠肽单克隆抗体并对其进行初步鉴定。方法:实验于2004-12/2006-02在南京医科大学第一附属医院心血管病研究所进行。利用碳化二亚胺法将合成的人脑钠肽与牛血清白蛋白偶联制备完全抗原,反复免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤技术将免疫小鼠的脾细胞与Balb/c小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)在PEG下融合,HAT选择性培养,间接酶联免疫吸附方法对细胞培养上清检测、筛选,选择筛选结果脑钠肽抗体阳性的细胞株连续进行3次亚克隆,建立稳定分泌脑钠肽单克隆抗体的杂交瘤细胞株。扩大培养阳性单克隆细胞株后,腹腔注射小鼠,制备腹水。对腹水亲和层析纯化,所得的单克隆抗体行初步鉴定。结果:免疫小鼠血清呈脑钠肽抗体阳性,经筛选得到3株稳定分泌脑钠肽单克隆抗体的杂交瘤细胞株,纯化的单克隆抗体经鉴定为IgG型,蛋白质印迹分析证实单克隆抗体可特异识别脑钠肽,具备较高的特异性及敏感性。结论:成功制备了3株抗脑钠肽特异性的单克隆抗体,可用于脑钠肽免疫检测方法的建立。
- 徐海祥杨笛卞智萍徐晋丹张寄南
- 关键词：酶联免疫吸附测定
- 大鼠心肌组织中高能磷酸化物的含量测定被引量：2
- 2004年
- 目的 建立了同步测定大鼠心肌组织中 5种高能磷酸化物含量的反相离子对高效液相色谱法 ,并观察异丙肾上腺素致害大鼠心肌损伤模型中能量代谢的变化。方法 色谱柱 :SupelcoODS C18(2 5 0mm× 4 6mm ,5 μm) ;柱温 :2 3℃～ 2 5℃ ;UV检测波长 2 10nm ;流动相 :2 2 0mmol·L 1磷酸盐缓冲液 (含 3mmol·L 1四丁基氢氧化铵和 7%甲醇 ) ,pH6 5 ;流速 1 2ml·min 1和1 3ml·min 1。结果 5种能量代谢物质ATP、ADP、AMP、CrP和Cr达到良好分离 ,ATP、ADP、CrP在 10～ 10 0 μmol·L 1,AMP在 10 0～ 5 0 0 μmol·L 1,Cr在 10 0～ 10 0 0 μmol·L 1浓度范围 ,峰面积与浓度呈良好线性关系。日内和日间精密度的RSD均 <10 % ,ATP、ADP、AMP、CrP及Cr的提取回收率 (% )平均为 :97 86、10 4 38、10 0 0 0、97 6 4和 98 8。与生理盐水组相比 ,ISO致害大鼠心室组织中ATP含量及能荷 (EC)显著下降 (P <0 0 5 )、ADP呈下降而AMP呈上升趋势 ,CrP含量显著上升 (P <0 0 1)。结论 本法操作简便、结果准确 。
- 冯琳孟丹陈相健卞智萍杨笛张寄南
- 关键词：高效液相色谱法大鼠心肌
- 放射免疫法测定血清抗生长激素抗体被引量：1
- 2001年
- 目的 建立人血清抗生长激素 (GH)抗体放射免疫测定法。方法 (1)以聚丙烯酰胺凝胶电泳、放射自显影 ,鉴定人重组生长激素 (r hGH)及其单抗纯度、检验r hGH在12 5I标记后是否改变其与抗GH抗体形成免疫复合物的能力。 (2 )将12 5I标记r hGH与血清于 37℃水浴孵育 3h ,经三次非特异性洗脱 ,测定并计算出12 5I结合率 ,并观察 75例原发性生长激素缺乏症患儿接受r hGH治疗前后不同时期共 2 6 3份血清抗GH抗体阳性变化。结果 (1)r hGH及其单抗为电泳纯 ,12 5Ir hGH可与其抗体形成免疫复合物。 (2 )测得阳性标本 6 1例 ,阳性率 2 3 2 %。结论 该测定方法可用于人血清抗生长激素抗体水平测定 ,敏感、可靠。
- 卞智萍刘莉张寄南
- 关键词：人重组生长激素免疫复合物放射免疫测定法生长激素缺乏症
- 心肌损伤性疾病的分子细胞机制、实验室诊断及治疗评价研究
- 张寄南苏恩本杨笛陈相健黄峻曹克将卞智萍徐晋丹耿茜马文珠顾春荣
- 该项成果的研究重点在于阐述心肌损伤性疾病的分子细胞发病机制，包括心肌细胞内钙调节蛋白、肌浆网钙泵（SERCA）、IP3受体、Ryanodine受体（RyR）和L型钙通道等的变化和失控；心肌内皮素受体、内皮素转换酶表达及活...
- 关键词：
- 关键词：心肌损伤分子生物学细胞机制
- C反应蛋白对小鼠主动脉内皮细胞胞内游离钙的影响被引量：2
- 2011年
- 目的:研究C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)对小鼠主动脉内皮细胞胞内游离钙[Ca2+]i的作用。方法:原代培养小鼠主动脉内皮细胞,取生长状态良好的内皮细胞分为对照组(未加CRP)和不同浓度CRP处理组,25 min后观察各组内皮细胞[Ca2+]i。将内皮细胞用1μmol/L阿托伐他汀预处理30 min后,加入100 mg/L CRP,观察阿托伐他汀对CRP作用的影响。结果:与对照组相比,CRP可显著升高内皮细胞胞内[Ca2+]i并呈剂量依赖关系;阿托伐他汀可明显降低CRP引起的[Ca2+]i升高。结论:CRP可导致和加重小鼠主动脉内皮细胞的炎症反应,阿托伐他汀可部分拮抗CRP的致炎作用。
- 刘强张丹丹徐晋妉卞智萍吴恒芳顾春荣陈相健杨笛
- 关键词：C反应蛋白内皮细胞动脉粥样硬化
- 黄芪总皂甙对培养大鼠心肌细胞钙超载的影响
- 目的:黄芪是一种祖国传统中药,具有多种药理活性,已广泛用于病毒性心肌炎和心衰病人的治疗。黄芪总皂甙是黄芪的重要活性成分之一,但是它的药理机制还不清楚。本研究旨在观察黄芪总皂甙是否对培养大鼠心肌细胞胞内钙超载产生影响。方法...
- 孟丹陈相健杨笛卞智萍徐晋丹张寄南
- 文献传递
- 寻找一种诊治心肌损伤的新方法:鼠抗人cTnI单抗Fab段基因克隆和序列分析(英文)
- 2005年
- 背景:为将鼠抗人cTnI单克隆抗体应用人体进行体内诊断或作为治疗心肌损伤的药物载体,必须降低鼠源性抗体的免疫源性,克服其人抗鼠抗体反应,需要对其进行人源化改造。目的:克隆鼠抗人cTnI单克隆抗体Fab段基因并进行序列分析。设计:单一样本研究。单位:一所医科大学附属医院的心血管病研究所。材料:本实验于2003-01/2004-05在南京医科大学第一附属医院心血管病研究所完成。分泌鼠抗人cTnI单克隆抗体的杂交瘤细胞株(JS200202)由南京医科大学第一附属医院心血管病研究所提供。方法:设计扩增鼠IgG重链Fd段及κ轻链引物,从分泌cTnI单抗的杂交瘤细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增,对扩增产物进行分子克隆、测序及序列分析。主要观察指标:重链Fd段和κ轻链基因序列及其所属亚型。结果:重链和轻链引物分别扩增出一约700bp和800bpDNA片段。经序列分析,与已发表的鼠IgG基因序列对比,其核苷酸及其所推导的氨基酸序列符合鼠IgG1Fab段特征。在GenBank登录,登录号为AY484430(重链),AY484431(轻链);氨基酸序列登录号为AAR83243(重链),AAR83244(轻链)。结论:本实验室获得了完整的鼠源性抗人cTnI单克隆抗体Fab段基因,为鼠抗人cTnI单克隆抗体的人源化改造奠定了基础。
- 李妍妍杨笛刘剑南卞智萍徐晋丹陈相健顾春荣张寄南
- 关键词：聚合酶链反应
