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重组人肝细胞生长因子激活因子质粒的构建、表达和功能研究: 2010年; 背景：肝细胞生长因子激活因子（HGFA）是活化单链前体HGF（pro—HGF）成为有生物学功能的HGF的关键酶．在受损组织器官的修复和再生中发挥重要作用。目的：制备rhHGFA—Fc融合蛋白并证实其具有肝细胞保护功能。方法：采用基因重组技术构建表达人源化HGFA成熟肽段与人IgGFc段融合蛋白的载体，以脂质体介导法转染人胚肾293细胞。纯化293细胞表达产物，以蛋白质印迹法鉴定纯化蛋白（rhHGFA—Fc融合蛋白）及其对pr0．HGF的酶切活性，以流式细胞术检测融合蛋白介导的肝细胞凋亡抑制作用。结果：SDS—PAGE显示转染重组质粒的293细胞总蛋白纯化产物在62kDa处显示单一蛋白条带。蛋白质印迹法结果显示纯化的rhHGFA-Fc融合蛋白能与抗hHGFA单克隆抗体发生特异性反应，并将pro-HGF酶切为仅链和p链，酶切活性呈剂量依赖性，半效酶切活性（IC50）为8．22nmol／L；流式细胞术结果显示融合蛋白通过激活pro．HGF发挥其抑制肝细胞凋亡的作用。结论：293细胞表达的rhHGFA—Fc融合蛋白纯度高、酶切活性强，可高效激活pro—HGF，对于肝组织严重损伤，特别是肝硬化基础上肝损伤的治疗具有潜在价值。; 薛峰周学明徐龙妹张程邓维夏韵张建军夏强; 关键词：肝细胞生长因子重组融合蛋白质类细胞凋亡

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周学明

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