姜国忠
- 作品数：63 被引量：209H指数：9
- 供职机构：郑州大学第一附属医院更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划国家自然科学基金河南省杰出人才创新基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 盐藻hsp70a cDNA片段的克隆与分析被引量：10
- 2003年
- 根据衣藻、矮牵牛花、Pisumsativum等真核生物hsp70a氨基酸高度保守序列设计两对简并引物,以热休克盐藻cDNA为模板进行巢式PCR扩增,产物经T A克隆转化至JM109大肠杆菌中,经筛选后测序,将测序结果推导成氨基酸序列进行同源性分析,获得了盐藻热休克蛋白70acDNA片段。在盐藻中所获得的cDNA片段,核苷酸长度为372bp,编码126个氨基酸。推导的氨基酸序列与与下列物种的hsp70a比较:衣藻为96%,矮牵牛花为94%,Pisumsativum为86%,番茄为86%,人为85%,果蝇和酵母分别为84%和83%。所克隆的序列为盐藻hsp70acDNA片段。
- 姜国忠牛向丽吕玉民谢华王建民袁保梅徐培荣薛乐勋
- 关键词：杜氏盐藻CDNA克隆
- 靶向DNA甲基转移酶1的siRNA表达载体的构建与筛选被引量：1
- 2010年
- 目的:构建针对DNA甲基转移酶(dnmt1)基因的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)表达载体,以用于后续的RNA干扰研究。方法:针对人dnmt1的mRNA序列,设计并合成6条编码siRNA的寡核苷酸片段,经退火成互补双链,克隆至载体pSilencer3.1-H1中构建3个重组体,分别命名为pshRNA-dnmt1-A、pshRNA-dnmt1-B和pshRNA-dnmt1-C,并进行测序鉴定。再利用无内毒素的大提质粒试剂盒制备无内毒素的pshRNA-dnmt1-A、B和C,分别通过脂质体介导转染宫颈癌HeLa细胞,以未转染和转染空载体者为对照。采用RT-PCR和Western blot检测转染细胞dnmt1 mRNA及蛋白表达情况。结果:成功构建了表达靶向dnmt1的siRNA重组载体;转染pshRNA-dnmt1-C对HeLa细胞dnmt1基因的表达几乎无影响。pshRNA-dnmt1-A、B均能有效沉默HeLa细胞中dn-mt1基因的表达,其dnmt1mRNA表达的抑制率分别为21.8%和69.7%,蛋白表达的抑制率分别为27.9%和73.2%,以pshRNA-dnmt1-B的干扰效果最佳。结论:成功构建并筛选出了有效的dnmt1siRNA表达载体。
- 赵先兰孟志英饶燕玲孙亚兰姜国忠刘红涛
- 关键词：DNA甲基转移酶1RNA干扰HELA细胞
- 晚期非小细胞肺癌患者外周血中多个驱动基因和TP53基因检测被引量：6
- 2020年
- 目的:研究晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血中多个驱动基因和抑癌基因TP53的变异情况,探讨它们在晚期肺癌靶向治疗中的作用及临床意义。方法:采用cSMART技术检测96例NSCLC患者外周血中常见驱动基因[表皮生长因子受体(EGFR)、间变性淋巴瘤激酶(ALK)、鼠类肉瘤病毒致癌基因(KRAS)、鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌基因同源体B(BRAF)、人表皮生长因子受体2(HER2)、磷脂酰肌醇激酶-3催化亚基α(PIK3CA)、间质上皮转化因子(MET)、转导重排基因(RET)、肉瘤致癌因子1受体酪氨酸激酶(ROS1)]和TP53基因的变异,分析上述基因变异与NSCLC患者临床病理指标的关系,并分析突变检出率最高的EGFR ctDNA与NSCLC患者临床病理指标的关系。结果:96例患者中64例在外周血中检出基因变异,总检出率66.7%,64例中单基因突变占65.6%(42/64),多基因突变占34.4%(22/64)。在检测的10个基因中,检出率最高的为EGFR,占44.8%(43/96),其次是TP53、KRAS和PIK3CA,分别占14.6%(14/96)、10.4%(10/96)和9.4%(9/96)。EGFR、TP53、KRAS和PIK3CA突变检出率与NSCLC患者临床病理因素无关(P>0.05)。43例EGFR基因突变中,65.1%(28/43)的患者发生EGFR基因单突变、双突变或三突变,34.9%(15/43)的患者发生EGFR基因合并其他热点基因突变,其中EGFR合并KRAS突变2例,合并PIK3CA突变6例,合并TP53突变7例。43例EGFR基因突变阳性的患者中≤60岁年龄组外周血EGFR ctDNA浓度高于>60岁年龄组(P=0.042)。结论:在晚期NSCLC的治疗中,多基因联合检测优于单基因检测。
- 王伟谢宵靓姜国忠燕迪迪夏培苡李文才王丽萍
- 凋亡诱导因子介导TAp63γ诱导的人食管鳞癌细胞株EC9706细胞凋亡被引量：1
- 2007年
- 目的探讨TAp63γ诱导的人食管鳞癌细胞株EC9706细胞凋亡的分子机制。方法用免疫组织化学和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测食鳞癌EC9706细胞中凋亡诱导因子(AIF)和p63的表达;将质粒pcDNA3.1-TAAp63γ转入EC9706细胞,流式细胞仪检测凋亡率,并用激光共聚焦显微镜和亚细胞器分离技术观察分析AIF的转化;采用RNA干扰技术下调AIF的蛋白表达水平,caspase广谱抑制剂zVAD.fmk预处理细胞,再用流式细胞仪分析EC9706细胞发达TAp63γ后调亡率的变化。结果EC9706细胞中AIF表达且定位在细胞质中,p63基因的表达亚型是ΔNp63,TAp63γ不表达;在pcDNA3.1-TAp63γ转染组和pcDNA3.1-p53转染组的细胞质及细胞核蛋白中分别检测到AIF,pc DNA3.1转染组的胞核蛋白无AIF信号;pcDNA3.1转染组、pcDNA3.1-TAp63γ转染组、AIF-siRNA干扰后再转染pcDNA3.1-TAp63γ组、zVAD.fmk处理后再转染pcDNA3.1-TAp63γ组和AIF-siRNA干扰联合zVAD.fmk处理后再转染pcDNA3.1-TAp63γ的凋亡率分别为1.37%、13.64%、4.52%、4.03%和1.91%。结论TAp63γ在诱导EC9706细胞凋亡的过程中,AIF从线粒体释放入胞质并转位到细胞核内;下调AIF的蛋白表达水平可降低TAp63γ诱导的细胞凋亡;TAp63γ诱导的细胞凋亡依赖于AIF和caspase。
- 范天黎郝义彬许培荣侯桂琴姜国忠杨观瑞
- 关键词：鳞状细胞细胞凋亡
- 逆转录病毒载体介导的RNAi抑制MCF-7细胞E2F1蛋白表达的研究
- 2008年
- 目的采用逆转录病毒载体介导的RNAi技术靶向抑制乳腺癌细胞MCF-7E2F1蛋白的表达。方法构建重组的表达E2F1siRNA的逆转录病毒载体，将重组载体和空载体转染入MCF-7细胞中，筛选出稳定转染的单克隆细胞扩大培养，应用Western Blot方法检测各组细胞E2F1蛋白的表达情况。结果筛选出4个转染逆转录病毒载体的单克隆，命名为SIR1—4，其E2F1蛋白表达量分别为0．776±0.012，0．768±0．013，0．764±0，012，0，720±0．016；转染空载体组和未转染细胞组E2F1蛋白表达量分别为1．512±0，011和1．494±0，013：SIR1～4E2F1蛋白表达量低于空载体组及未转染组，差异有统计学意义（P〈0．05），SIR1～4各组E2F1蛋白表达均受到抑制；空载体转染组与未转染组之间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论逆转录病毒载体介导的RNAi技术特异、高效抑制靶基因的表达，为肿瘤基因治疗提供了新的思路和工具。
- 黄慧敏张红姜国忠高冬玲李惠翔
- 关键词：逆转录病毒载体RNAIE2F1MCF-7细胞
- 胃肠道血管球瘤15例临床病理学分析被引量：12
- 2020年
- 目的探讨胃肠道血管球瘤(GIGT)的组织病理学特征、诊断及鉴别诊断。方法收集郑州大学第一附属医院2011年1月至2018年6月诊断的15例GIGT,分析其临床病理特征、免疫表型、BRAF基因突变及预后,并复习相关文献。结果15例GIGT,男性7例,女性8例。14例发生于胃,1例发生于回肠。患者年龄37~59岁,中位年龄49岁,平均50岁。11例胃血管球瘤以间断腹痛、腹胀入院,另3例于体检时发现胃窦部占位入院;1例回肠血管球瘤以腹痛伴大便带血入院。影像学检查,胃血管球瘤位于黏膜下,边界清楚,动脉期强化明显;肠血管球瘤累及局部肠壁全层并堵塞管腔。大体检查:瘤体最大径1.5~3.0 cm不等,平均2.3 cm,切面实性。显微镜下观察:胃血管球瘤位于固有肌层间,富血管,与周围分界清楚,但均无明显包膜形成;瘤细胞大小一致,呈圆形或卵圆形,围绕血管周围呈血管外皮瘤样或实性巢团状排列;细胞形态温和,核圆形居中,染色质细腻,核仁不明显,核分裂象难见,无坏死,其中2例局部见小灶状钙化;2例见肿瘤侵入黏膜层;2例见脉管瘤栓;5例见神经侵犯。肠血管球瘤累及肠壁全层,细胞密度高,异型性明显,核分裂象热点区约(5~6)个/HPF。免疫组织化学显示,瘤细胞弥漫强表达平滑肌肌动蛋白(SMA)和Ⅳ型胶原,部分区域中等强度表达Caldesmon或Calponin,有12例局部弱表达突触素。胃血管球瘤的Ki-67阳性指数1%~30%不等,均值约6%。肠血管球瘤的Ki-67阳性指数约70%。15例GIGT均未检测到BRAF基因V600E位点突变。所有患者手术治疗后均未行放化疗。电话随访到13例患者,随访时间18~90个月,平均42个月,12例胃血管球瘤患者均健存,肠血管球瘤患者术后15个月出现肝转移。结论血管球瘤是胃肠道少见的间叶源性肿瘤,应与胃肠道间质瘤、神经内分泌肿瘤、平滑肌瘤、孤立性纤维性肿瘤及副节瘤等鉴别。多数GIGT生物学行为良善,预�
- 马怡晖李盼姜国忠金汝佳李文才
- 关键词：血管球瘤胃肠肿瘤
- AIF的蛋白水平下调可减少TAp63γ诱导的细胞凋亡
- 2007年
- 目的:探讨凋亡诱导因子(AIF)在TAp63γ诱导细胞凋亡中的作用。方法:将质粒pcDNA3.1-TAp63γ转入人食管鳞癌EC9706细胞,抽提细胞DNA检测细胞是否凋亡,流式细胞仪检测凋亡率,并用亚细胞器分离技术分析AIF的转位;利用化学合成及基因重组技术构建AIF发夹状RNA表达载体,western blot检测干扰效果并用流式细胞仪分析凋亡率的变化。结果:pcDNA3.1-TAp63γ转染细胞24h后出现DNA ladder,凋亡率为13.64%,并在pcDNA3.1-TAp63γ转染组中细胞质和细胞核蛋白中检测到AIF;而空载体转染组则无DNA ladder,凋亡率为1.37%,且此组的细胞质和细胞核蛋白尤其是核蛋白内无AIF信号。成功构建表达发夹状AIF-siRNA的载体,其干扰效率约为80%。转染pcDNA3.1-TAp63γ24h后,AIF-siRNA组的凋亡率是4.52%。结论:TAp63γ基因表达可诱导EC9706细胞凋亡;下调AIF的蛋白表达水平可降低TAp63γ诱导的细胞凋亡。
- 范天黎许培荣袁保梅侯桂琴姜国忠卢洁杨观瑞
- 关键词：凋亡诱导因子细胞凋亡
- 抑制Pokemon蛋白表达对人肺癌细胞株NCI-H520的作用
- 2014年
- 目的利用RNA干扰（RNAi）技术将针对性构建的重组质粒转染人人肺癌细胞株NCI-H520，观察下调Pokemon基因对人肺癌细胞生物学行为的影响。方法利用Ambion公司设计软件设计针对Pokemon基因的2条小干扰RNA（siRNA）序列，并合成2对互补的siRNA编码DNA片段，定向克隆至RNAi-ReadypSIREN-RetroQ载体的BamHI和EcoRI位点，构建重组体质粒，分别命名为pSIREN-Pokemon-1和pSIREN-Pokemon-2，同时设立转染空载体对照组。Westernblot检测人肺癌细胞中Pokemon蛋白表达，噻唑蓝（M1vr）比色实验检测转染后细胞的增殖抑制结果，流式细胞分析技术检测转染后细胞周期的分布。结果利用RNAi-Ready pSIRENR RetroQ载体构建的重组质粒可以成功抑制人肺癌细胞NCI-H520中Pokemon蛋白的表达。Westernblot检测发现人肺癌细胞NCI-H520中Pokemon蛋白高水平表达，转染后其表达水平明显下降。转染后第3天，M1Tr比色实验显示pSIREN-Pokemon-1组（0．0015±0．0030）和pSIREN-Pokemon-2组（0．0086±0．0015）与pSIREN-Pokemon.0组（0．0230±0．0010）比较差异有统计学意义（P〈0．05），而pSIREN-Pokemon-1与pSIREN-Pokemon-2组之间差异无统计学意义（P〉0．05）。流式细胞分析检测发现转染siRNA细胞与转染空载体细胞的细胞周期差异无统计学意义（P〉0．05）。pSIREN-Pokemon-1转染组及pSIREN-Pokemon-2转染组形成克隆的数量（18．0±0．3、16．0±0．4）明显低于pSIREN-Pokemon-O组（52．0±0．4，P〈0．05）。结论使用pSIREN载体成功构建的重组质粒转染人肺癌细胞可有效抑制原癌基因Pokemon的表达。转染后细胞增殖受到抑制，生长速度减慢。抑制Pokemon蛋白表达对细胞周期无明显影响。靶向siRNA可以存人肺癌细胞中抑制Pokemon蛋白表达，负调节肺癌细胞生长。
- 袁坦姜国忠李宏云
- 关键词：小干扰RNA重组质粒增殖抑制
- 肝脏炎性假瘤样滤泡树突状细胞肿瘤1例的诊治被引量：1
- 2015年
- 肝脏炎性假瘤样滤泡树突状细胞肿瘤是一种非常罕见的肝脏肿瘤，至今为止，该肿瘤发病机制尚未明确，国内外报道非常少。近来病理学研究证实，该肿瘤多与EB病毒感染有关，治疗方法以手术切除为主，尚无十分有效的保守治疗方法，该病预后尚无明确报道。本文报道1例肝脏炎性假瘤样滤泡树突状细胞肿瘤患者，手术完整切除肿瘤，术后1个月复查，患者健康状况良好，未见明显复发、转移。
- 高石吴阳姜国忠吴大帅
- 关键词：肝脏炎性假瘤EB病毒免疫组织化学
- 合成人降钙素基因实验研究的初步报告被引量：2
- 2004年
- 目的 :合成含人胰岛素分泌信号的人降钙素基因。方法 :将人胰岛素分泌信号和人降钙素基因的序列分成六个片断合成单链寡核苷酸作为PCR的引物和cDNA合成的模板。应用动态模板PCR反应直接扩增出人胰岛素和降钙素的编码序列。结果 :经含EB的 1.5 %琼脂糖凝胶电泳 ,证明合成的基因含编码人胰岛素分泌信号和人降钙素的全长DNA序列。结论 :本研究为基因合成提供了一种新的可靠方法。
- 王秀利王义生姜国忠李晓林
- 关键词：降钙素基因人胰岛素琼脂糖凝胶电泳PCR反应基因合成CDNA合成
