姜国忠
- 作品数：62 被引量：201H指数：9
- 供职机构：郑州大学更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划国家自然科学基金河南省杰出人才创新基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 盐藻hsp70a cDNA片段的克隆与分析被引量：10
- 2003年
- 根据衣藻、矮牵牛花、Pisumsativum等真核生物hsp70a氨基酸高度保守序列设计两对简并引物,以热休克盐藻cDNA为模板进行巢式PCR扩增,产物经T A克隆转化至JM109大肠杆菌中,经筛选后测序,将测序结果推导成氨基酸序列进行同源性分析,获得了盐藻热休克蛋白70acDNA片段。在盐藻中所获得的cDNA片段,核苷酸长度为372bp,编码126个氨基酸。推导的氨基酸序列与与下列物种的hsp70a比较:衣藻为96%,矮牵牛花为94%,Pisumsativum为86%,番茄为86%,人为85%,果蝇和酵母分别为84%和83%。所克隆的序列为盐藻hsp70acDNA片段。
- 姜国忠牛向丽吕玉民谢华王建民袁保梅徐培荣薛乐勋
- 关键词：杜氏盐藻CDNA克隆
- 靶向DNA甲基转移酶1的siRNA表达载体的构建与筛选被引量：1
- 2010年
- 目的:构建针对DNA甲基转移酶(dnmt1)基因的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)表达载体,以用于后续的RNA干扰研究。方法:针对人dnmt1的mRNA序列,设计并合成6条编码siRNA的寡核苷酸片段,经退火成互补双链,克隆至载体pSilencer3.1-H1中构建3个重组体,分别命名为pshRNA-dnmt1-A、pshRNA-dnmt1-B和pshRNA-dnmt1-C,并进行测序鉴定。再利用无内毒素的大提质粒试剂盒制备无内毒素的pshRNA-dnmt1-A、B和C,分别通过脂质体介导转染宫颈癌HeLa细胞,以未转染和转染空载体者为对照。采用RT-PCR和Western blot检测转染细胞dnmt1 mRNA及蛋白表达情况。结果:成功构建了表达靶向dnmt1的siRNA重组载体;转染pshRNA-dnmt1-C对HeLa细胞dnmt1基因的表达几乎无影响。pshRNA-dnmt1-A、B均能有效沉默HeLa细胞中dn-mt1基因的表达,其dnmt1mRNA表达的抑制率分别为21.8%和69.7%,蛋白表达的抑制率分别为27.9%和73.2%,以pshRNA-dnmt1-B的干扰效果最佳。结论:成功构建并筛选出了有效的dnmt1siRNA表达载体。
- 赵先兰孟志英饶燕玲孙亚兰姜国忠刘红涛
- 关键词：DNA甲基转移酶1RNA干扰HELA细胞
- 晚期非小细胞肺癌患者外周血中多个驱动基因和TP53基因检测被引量：6
- 2020年
- 目的:研究晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血中多个驱动基因和抑癌基因TP53的变异情况,探讨它们在晚期肺癌靶向治疗中的作用及临床意义。方法:采用cSMART技术检测96例NSCLC患者外周血中常见驱动基因[表皮生长因子受体(EGFR)、间变性淋巴瘤激酶(ALK)、鼠类肉瘤病毒致癌基因(KRAS)、鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌基因同源体B(BRAF)、人表皮生长因子受体2(HER2)、磷脂酰肌醇激酶-3催化亚基α(PIK3CA)、间质上皮转化因子(MET)、转导重排基因(RET)、肉瘤致癌因子1受体酪氨酸激酶(ROS1)]和TP53基因的变异,分析上述基因变异与NSCLC患者临床病理指标的关系,并分析突变检出率最高的EGFR ctDNA与NSCLC患者临床病理指标的关系。结果:96例患者中64例在外周血中检出基因变异,总检出率66.7%,64例中单基因突变占65.6%(42/64),多基因突变占34.4%(22/64)。在检测的10个基因中,检出率最高的为EGFR,占44.8%(43/96),其次是TP53、KRAS和PIK3CA,分别占14.6%(14/96)、10.4%(10/96)和9.4%(9/96)。EGFR、TP53、KRAS和PIK3CA突变检出率与NSCLC患者临床病理因素无关(P>0.05)。43例EGFR基因突变中,65.1%(28/43)的患者发生EGFR基因单突变、双突变或三突变,34.9%(15/43)的患者发生EGFR基因合并其他热点基因突变,其中EGFR合并KRAS突变2例,合并PIK3CA突变6例,合并TP53突变7例。43例EGFR基因突变阳性的患者中≤60岁年龄组外周血EGFR ctDNA浓度高于>60岁年龄组(P=0.042)。结论:在晚期NSCLC的治疗中,多基因联合检测优于单基因检测。
- 王伟谢宵靓姜国忠燕迪迪夏培苡李文才王丽萍
- 凋亡诱导因子介导TAp63γ诱导的人食管鳞癌细胞株EC9706细胞凋亡被引量：1
- 2007年
- 目的探讨TAp63γ诱导的人食管鳞癌细胞株EC9706细胞凋亡的分子机制。方法用免疫组织化学和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测食鳞癌EC9706细胞中凋亡诱导因子(AIF)和p63的表达;将质粒pcDNA3.1-TAAp63γ转入EC9706细胞,流式细胞仪检测凋亡率,并用激光共聚焦显微镜和亚细胞器分离技术观察分析AIF的转化;采用RNA干扰技术下调AIF的蛋白表达水平,caspase广谱抑制剂zVAD.fmk预处理细胞,再用流式细胞仪分析EC9706细胞发达TAp63γ后调亡率的变化。结果EC9706细胞中AIF表达且定位在细胞质中,p63基因的表达亚型是ΔNp63,TAp63γ不表达;在pcDNA3.1-TAp63γ转染组和pcDNA3.1-p53转染组的细胞质及细胞核蛋白中分别检测到AIF,pc DNA3.1转染组的胞核蛋白无AIF信号;pcDNA3.1转染组、pcDNA3.1-TAp63γ转染组、AIF-siRNA干扰后再转染pcDNA3.1-TAp63γ组、zVAD.fmk处理后再转染pcDNA3.1-TAp63γ组和AIF-siRNA干扰联合zVAD.fmk处理后再转染pcDNA3.1-TAp63γ的凋亡率分别为1.37%、13.64%、4.52%、4.03%和1.91%。结论TAp63γ在诱导EC9706细胞凋亡的过程中,AIF从线粒体释放入胞质并转位到细胞核内;下调AIF的蛋白表达水平可降低TAp63γ诱导的细胞凋亡;TAp63γ诱导的细胞凋亡依赖于AIF和caspase。
- 范天黎郝义彬许培荣侯桂琴姜国忠杨观瑞
- 关键词：鳞状细胞细胞凋亡
- 逆转录病毒载体介导的RNAi抑制MCF-7细胞E2F1蛋白表达的研究
- 2008年
- 目的采用逆转录病毒载体介导的RNAi技术靶向抑制乳腺癌细胞MCF-7E2F1蛋白的表达。方法构建重组的表达E2F1siRNA的逆转录病毒载体，将重组载体和空载体转染入MCF-7细胞中，筛选出稳定转染的单克隆细胞扩大培养，应用Western Blot方法检测各组细胞E2F1蛋白的表达情况。结果筛选出4个转染逆转录病毒载体的单克隆，命名为SIR1—4，其E2F1蛋白表达量分别为0．776±0.012，0．768±0．013，0．764±0，012，0，720±0．016；转染空载体组和未转染细胞组E2F1蛋白表达量分别为1．512±0，011和1．494±0，013：SIR1～4E2F1蛋白表达量低于空载体组及未转染组，差异有统计学意义（P〈0．05），SIR1～4各组E2F1蛋白表达均受到抑制；空载体转染组与未转染组之间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论逆转录病毒载体介导的RNAi技术特异、高效抑制靶基因的表达，为肿瘤基因治疗提供了新的思路和工具。
- 黄慧敏张红姜国忠高冬玲李惠翔
- 关键词：逆转录病毒载体RNAIE2F1MCF-7细胞
- 表达E2F1小干扰RNA的逆转录病毒载体的构建被引量：6
- 2005年
- 目的 :建立一个表达E2F1小干扰RNA的靶向抑制E2F1表达的重组逆转录病毒载体。方法 :通过重组DNA技术 ,将设计好的两条互补寡核苷酸片段退火后与载体连接 ,利用载体上的BglⅡ和EcoRⅠ位点进行双酶切初步鉴定 ,重组载体应产生 3 3 2bp和 6182bp两个片段 ,选择酶切正确的重组载体进行测序 ,保证siRNA的方向和序列正确。结果 :表达siRNA的重组逆转录病毒载体构建成功。结论 :重组逆转录病毒载体的成功构建为下一步基因治疗的研究奠定了基础。
- 黄慧敏张红李惠翔姜国忠高冬玲王秀利
- 关键词：SIRNA逆转录病毒载体E2F1
- 2种PCR方法扩增盐藻肌动蛋白基因3’旁侧序列比较被引量：11
- 2004年
- 目的 :比较扩增盐藻肌动蛋白基因 3’旁侧序列的 2种PCR方法。方法 :用pvuⅡ、EcoRⅤ和StuⅠ 3种限制性内切酶消化盐藻基因组DNA后 ,供 2种PCR用 ,一种是连接介导法PCR(LMPCR) ,与用人工合成的适配子相连并用适配子引物和盐藻肌动蛋白基因特异引物扩增未知序列 ;另一种是反向PCR(IPCR) ,酶切后的DNA自身环化做模板 ,用 2对基因特异引物反向扩增。结果 :2轮PCR后 ,LMPCR中得到大量的非特异扩增产物 ,测序结果发现许多产物是由适配子引物AP2单独扩增引起。而反向PCR在得到pvuⅡ和StuⅠ消化的自连文库中扩增得到 2 .5kb特异产物 ,经测序发现 ,片段两侧为基因特异引物 ,部分序列与已知序列相一致。Southern也进一步证实了IPCR扩增片段来源于盐藻基因组DNA。结论 :IPCR技术在克隆基因旁侧序列时优于LMPCR方法。
- 姜国忠谢华郭玉忠范天黎薛乐勋
- 关键词：反向PCR盐藻肌动蛋白
- 人端粒酶逆转录酶基因启动子区的克隆及其真核表达载体的构建被引量：7
- 2004年
- 目的 :构建人端粒酶逆转录酶基因启动子区的真核表达载体。方法 :用核酸内切酶NotⅠ和KpnⅠ酶切报告基因GFP ,插入pcDNA3.1 (+)载体 ,得到pcDNA3.1 (+) -GFP(PG)载体 ;用PCR方法扩增hTERT基因ATG上游的启动子序列 ,测序后用核酸内切酶BglⅡ和KpnⅠ酶切插入PG载体 ,得到pcDNA3.1 (+) -GFP -hTERT(PGT)载体。将PGT载体转染人食管癌EC970 6细胞系 ,经G4 1 8筛选 ,荧光显微镜下观察。结果 :克隆得到的启动子序列与文献相符 ,重组载体经酶切鉴定方向正确 ,含有人端粒酶逆转录酶基因启动子序列。经转染人食管癌EC970 6细胞系 ,在荧光显微镜下观察到绿色的阳性克隆。结论 :克隆的人端粒酶逆转录酶基因启动子序列在真核细胞中具有启动子活性。
- 郭玉忠李杰姜国忠王建民薛乐勋
- 关键词：人端粒酶逆转录酶启动子真核表达载体
- 晚期糖化终产物受体在食管鳞癌组织中的表达及其意义被引量：2
- 2016年
- 目的探讨食管鳞癌组织中晚期糖化终产物受体(RAGE)的表达及意义。方法采用免疫组化SP法对50例食管鳞癌组织、30例癌旁不典型增生组织以及50例正常食管黏膜组织中RAGE蛋白表达进行检测;运用原位杂交方法对50例食管鳞癌组织、30例癌旁不典型增生组织以及50例正常食管黏膜组织中RAGE mRNA表达进行检测。结果食管鳞癌组织中RAGE蛋白、mRNA阳性表达率明显高于癌旁不典型增生组织及正常食管黏膜组织,三者两两比较差异均有统计学意义(P均<0.05);食管鳞癌组织中RAGE蛋白、mRNA阳性表达率与肿瘤浸润深度、淋巴结转移有关(P均<0.05)。结论 RAGE高表达可能与食管鳞癌发生和发展有关。
- 孙淼淼姜国忠赵志华刘凯陈奎生
- 关键词：食管鳞癌晚期糖化终产物受体免疫组化原位杂交
- 环状RNA hsa_circ_0009244对食管鳞癌细胞生物学行为的影响被引量：1
- 2022年
- 目的探讨环状RNA hsa_circ_0009244(circ-9244)在食管鳞癌组织中的表达及其与食管鳞癌患者预后的关系,分析下调circ-9244对食管鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法运用实时荧光定量聚合酶链反应检测circ-9244在食管鳞癌细胞及正常食管上皮细胞Het-1A中的表达水平,构建circ-9244下敲质粒PLKO.1-circ-9244-shRNA并转染至高表达circ-9244的食管鳞癌细胞KYSE410、KYSE520中,运用MTS实验、划痕实验及Transwell实验检测其下调后对食管鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果实验组食管鳞癌细胞增殖效率、划痕愈合率及穿膜细胞数明显低于空载组,差异均有统计学意义(KYSE410细胞:t=12.345,P<0.001;t=10.910,P<0.001;t=11.040,P<0.001;KYSE520细胞:t=7.941,P<0.001;t=8.499,P<0.001;t=10.720,P<0.001)。结论下调circ-9244可抑制食管鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。
- 张岚朱迪姜国忠
- 关键词：食管鳞癌生物学行为
