孟云芳
- 作品数：10 被引量：8H指数：2
- 供职机构：第二军医大学长征医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划上海市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 新生隐球菌COP9复合体基因CSN6的敲除与鉴定
- 2014年
- 目的构建新生隐球菌COP9复合体蛋白元件Csn6的基因同源重组敲除框,并通过基因枪转化系统敲除CSN6基因。方法应用生物信息学方法获得COP9复合体蛋白元件的基因信息,采用套叠PCR的方法,构建包含报告基因NEO和CSN6基因ORF两侧上下游同源DNA片段的同源重组框。应用基因枪将其转化入新生隐球菌感受态细胞,通过PCR和DNA测序对遗传霉素(G418)耐受的阳性克隆子进行筛选与验证。结果成功构建了新生隐球菌基因突变株csn6裣。结论 COP9复合体亚基CSN6基因突变株的构建,为今后新生隐球菌COP9复合体的分子致病机制研究奠定基础。
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- 关键词：新生隐球菌致病机制
- 条件启动子pCTR4在隐球菌基因表达调控中的应用被引量：1
- 2014年
- 目的通过条件启动子pCTR4的质粒构建以及其在新生隐球菌中的同源置换,研究其在隐球菌基因表达调控中的应用。方法应用套叠PCR,构建含报告基因NEO的铜离子抑制性启动子质粒pNEO/CTR4和启动子同源重组框,并利用基因枪将其转化入新生隐球菌感受态细胞,常规及实时定量PCR检测条件启动子对目的基因的转录调控效应。结果成功构建了质粒pNEO/CTR和隐球菌条件启动子重建菌株,条件启动子pCTR4对目的基因具有预期的转录诱导和抑制效果。结论新建铜离子抑制性启动子质粒pNEO/CTR4可以应用于对隐球菌目的基因表达水平的调控;隐球菌泛素编码基因UBI 1并非致死性关键基因。我们的研究为今后新生隐球菌泛素系统的分子致病机制研究奠定了基础。
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- 关键词：新生隐球菌泛素致病机制
- 多聚泛素UBI4低表达对新生隐球菌生长与毒力的功能影响
- 2015年
- 目的构建新生隐球菌的多聚泛素UBI4低表达菌株,检测UBI4低表达对新生隐球菌生长和毒力的功能影响。方法采用融合PCR方法,扩增含有UBI4基因的片段,将其与含有组蛋白启动子的质粒融合。通过基因枪将重组质粒片段转化入新生隐球菌,应用PCR筛选、DNA序列测序以及实时定量PCR方法对基因重建株进行鉴定与验证。检测多聚泛素UBI4低表达菌株对多种应激耐受力、生长曲线以及对蜡蛾感染的毒力影响。结果成功构建了新生隐球菌多聚泛素UBI4低表达。表型检测结果提示:较之标准株,UBI4低表达株生长速率下降,对高温、H2O2和NO应激以及多种抗真菌药物敏感性显著增强;同时,UBI4下调表达后隐球菌对蜡蛾的毒力显著下调。结论我们的研究初步证实多聚泛素蛋白UBI4对新生隐球菌的生长增殖、应激应答以及感染能力具有重要的调控作用,为后续深入探讨新生隐球菌泛素系统的功能机制奠定基础。
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- 关键词：新生隐球菌致病机制
- 新生隐球菌转录共激活因子MBF1基因的鉴定与敲除
- 2015年
- 目的构建新生隐球菌转录共激活因子MBF1基因缺陷菌株。方法采用套叠PCR方法 ,构建含有抗性基因NEO以及靶基因上下游同源DNA片段的基因敲除框,通过基因枪将重组片段转化入新生隐球菌,应用PCR筛选和DNA序列测序方法对基因突变株进行鉴定与验证。结果成功构建了新生隐球菌基因突变株mbf1裣。结论通过基因突变株mbf1裣的构建,为深入研究新生隐球菌转录辅助因子Mbf1的功能机制奠定基础。
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- 关键词：新生隐球菌致病机制基因敲除
- 隐球菌感染体外血脑屏障模型的构建与应用被引量：1
- 2015年
- 目的构建体外血脑屏障模型,并检测隐球菌不同菌株穿越血脑屏障的能力。方法本研究应用商品化的小鼠脑微血管内皮细胞系b END.3构建体外血脑屏障模型,并验证该模型应用于隐球菌穿越血脑屏障机制研究的可行性。通过构建模型,以非致病性的酿酒酵母作为阴性对照,比较新生隐球菌不同血清型标准株及基因缺陷株穿越体外血脑屏障能力的差异。结果跨膜电阻值(TEER)检测提示体外血脑屏障模型构建成功。检测结果显示酿酒酵母作为阴性对照穿越血脑屏障效率最低,新生隐球菌血清A型标准株H99穿越细胞屏障效率最强,血清D型标准株JEC21穿越细胞屏障效率显著低于H99。较之H99,黑色素酶缺陷株lac1裣穿越体外血脑屏障模型的效率没有显著差异;尿素酶缺陷株ure1裣效率显著下降(P<0.05),约为标准株H99通过率的59.9%;荚膜缺陷株cap59裣突破体外血脑屏障模型效率最低,约为标准株H99的18%(P<0.001)。结论隐球菌中枢系统感染体外模型成功构建。新生隐球菌突破血脑屏障的能力与其血清型以及荚膜、尿素酶等毒力因子的表达密切相关。
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- 关键词：新生隐球菌血脑屏障体外模型致病机制
- 人类免疫缺陷病毒与深部真菌感染被引量：2
- 2015年
- 人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的发病率与致死率很高,已成为人类健康的一大威胁,其中约50%的HIV感染者最终因侵袭性真菌病而死亡。高效抗反转录病毒治疗(HAART)的应用大大降低了HIV感染者深部真菌病的发生率。因此,深入研究HIV与深部真菌病的关系,对预防、诊断和治疗HIV感染者深部真菌病具有十分重要的意义。本文归纳了HIV感染者深部真菌病的流行病学调查、诊断与治疗进展,有助于临床医师预防和诊治HIV感染者深部真菌病,也为将来新型抗真菌药物的研发提供了思路和方向。
- 孟云芳廖万清
- 关键词：人类免疫缺陷病毒深部真菌病流行病学抗真菌药物
- 去泛素化酶Ubp5p和植物同源结构域蛋白家族对隐球菌毒力与形态的调控
- 第一部分 格特隐球菌是临床上主要的致病真菌之一，多侵犯免疫正常人群，通常会引起肺部感染疾病，而新生隐球菌多侵犯免疫抑制人群，一般会引起脑膜脑炎。虽然格特隐球菌和新生隐球菌归属于不同的菌种，其感染所致隐球菌病致死率都非常...
- 孟云芳
- 关键词：隐球菌病
- 文献传递
- COPD9信号小体对新生隐球菌生长与毒力的多效性调控及机制研究
- 目的 探索COP9信号小体蛋白Csn1201对新生隐球菌生长与毒力的功能影响及分子机制。方法 应用基因敲除获得其基因缺陷株,通过体外表型检测、细胞与动物模型分析Csn1201缺失对隐球菌应激耐受力、毒力因子表达以及致病感...
- 杨雅骊张超周兆靖法振宗孟云芳赵静宇桑军军方伟廖万清
- 蛋白质过敏原与食物过敏被引量：4
- 2013年
- 蛋白质过敏原诱发的食物过敏是医学界亟待解决的难题,目前预防措施主要是避免摄入特定食物和免疫治疗。但是,我们应该认识到各种蛋白质过敏原的结构和含量都存在差异,因此在制定预防措施时要充分考虑到这一点才能防止难以预测的不良反应发生和达到预想的脱敏治疗效果。
- 廖万清孟云芳
- 关键词：蛋白质食物过敏免疫治疗蛋白质改性
- 重要疑难真菌病及皮肤病的诊治研究
- 2015年
- 随着临床真菌感染的发病率、耐药率日益升高,真菌致病及耐药机制的分子生物学研究受到广泛关注。该项目对重要疑难真菌病的诊治,致病真菌致病机理、遗传多态性、体外药敏特征及耐药机制,对少见疑难皮肤病的诊治等方面进行了系列研究。在真菌病的诊疗方面,国际首次发现指甲隐球菌引起人类脑膜炎。
- 廖万清姜远英姜远英曾永兵潘炜华王彦方伟施伟民孟云芳李梦王彦方伟陈向芳陈敏刘晓刚
- 关键词：真菌病隐球菌病致病真菌遗传多态性菌谱
