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转基因兔乳腺特异性表达重组人纤溶酶原激活剂(rhPA)及其药效学研究: 自上世纪以来,血栓性疾病一直是危害人类健康和生命安全的头号因素,溶栓疗法是目前临床上使用最广泛而有效的一种治疗方法,而且溶栓药物已经历了三代发展。重组人纤溶酶原激活剂(rhPA)是一种丝氨酸蛋白酶,能够高效特异地溶解血栓...; 成勇陆睿宋绍征陈思姜磊何正义徐晟; 关键词：T-PA 乳腺上皮细胞转基因兔; 文献传递

激素剂量、品系及周龄对小鼠超数排卵的影响: 目的：采用孕马血清促性腺激素(PMSG)和人促绒毛膜性腺激素(hCG)对不同品系和周龄的小鼠进行超数排卵处理，比较分析激素(PMSG／hCG)注射剂量、小鼠品系和周龄对超排效果的影响，以便获得比较优良的超排方法。结果：(...; 宋绍征杜庆辉陈则东龚文王宝珠王怡成勇; 关键词：超数排卵品系周龄

激素剂量、小鼠品系及周龄对超数排卵的影响被引量：13: 2011年; 目的采用孕马血清促性腺激素(PMSG)和人促绒毛膜性腺激素(hCG)对不同品系和周龄小鼠进行超数排卵处理,比较激素(PMSG/hCG)注射剂量、小鼠品系和周龄对超排效果的影响,以便获得比较优良的超排方法。结果 1)激素剂量为PMSG(10 IU/只)+hCG(10 IU/只)的超排效果优于PMSG(5 IU/只)+hCG(5 IU/只),但无显著差异(P>0.05);2)相同剂量时I,CR小鼠和C57BL/6J小鼠的超排效果显著优于BALB/c小鼠和FVB小鼠(P<0.05);3)5周龄与8周龄的小鼠比较,8周龄超排效果较好,但差异不显著(P>0.05)。结论采用10 IUPMSG+10 IU hCG的组合对8周龄的ICR、C57BL/6J进行超排处理效果相对较好。; 宋绍征王怡王宝珠杜庆辉陈则东龚文成勇; 关键词：超数排卵激素周龄品系小鼠

一例犬细小病毒病的诊断与防治: 2011年; 犬细小病毒病是由犬细小病毒引起的一种急性高度接触性传染病,其感染率高达100%,致死率为10%～50%,幼犬多发。临床上多以剧烈呕吐,腹泻及出血性肠炎和非化脓性心肌炎为其特征。本文对一例犬细小病毒病临床病例进行了诊断并采取了相应的防治措施,取得了较好的效果。; 宋绍征储德文孟宪成黄真于晓谦; 关键词：犬细小病毒病接触性传染病临床病例出血性肠炎致死率心肌炎

转录激活因子样效应物核酸酶介导的山羊β-乳球蛋白基因敲除和人乳铁蛋白基因定点整合被引量：9: 2016年; 为了敲除山羊乳中致敏源β-乳球蛋白(BLG)基因,同时在BLG基因座定点整合人乳铁蛋白(hLF)基因。首先针对山羊BLG第3外显子识别位点设计了1对特异性TALEN-3-L/R质粒对;同时,构建了含有1个HSV-TK负筛选基因的hLF基因打靶载体BLC14-TK。TALENs质粒对转染山羊胎儿成纤维细胞,2μg/m L嘌呤霉素筛选3 d,PCR扩增产物测序来验证其切割DNA活性。打靶载体BLC14-TK与TALEN-3-L/R质粒对共转染山羊胎儿成纤维细胞,经700μg/m L G418和2μg/m L GCV共筛选药物抗性细胞株;通过整合检测和同源重组检测来筛选hLF基因打靶细胞株;BLG~–/hLF^+打靶细胞株作为供核细胞进行山羊体细胞核移植。结果为:TALEN-3-L/R致突变率为25%-30%;获得BLG~–/hLF^+打靶细胞6株;共制作重构胚胎335枚,移植受体山羊23只,B超检测到30-35 d的妊娠受体9只(妊娠率39.1%),其中1只50日龄克隆胎儿验证为BLG~–/hLF^+基因型。以上结果表明获得BLG基因座定点整合hLF基因的基因打靶山羊是可行的,为培育羊乳中含低致敏原和富含hLF的山羊新品系奠定了基础。; 宋绍征朱孟敏袁玉国荣耀徐晟陈思梅珺琰成勇; 关键词：人乳铁蛋白基因打靶体细胞核移植

人工锌指核酸酶突变EGFP基因的功能分析被引量：1: 2013年; 锌指核酸酶技术在基因定点修饰中具有效率高和特异性好等特点,并成功应用于数十种生物。目前,该技术是否能应用羊上尚未报道。为了敲除转基因山羊标记基因(EGFP),构建了一对针对EGFP外显子上的锌指核酸酶表达载体,将其电转染至转EGFP基因胎儿成纤维细胞中,研究了锌指核酸酶突变EGFP基因的效率和方式,利用基因显微注射单细胞获得获得的转基因(EGFP)细胞系作为锌指核酸酶的靶细胞。结果显示,通过锌指核酸酶的突变作用,转染后的细胞发绿色荧光比例下降,测序结果显示在EGFP外显子中插入1个碱基G,导致编码EGFP基因的阅读框改变,从而起到基因突变的作用。结果表明,文中构建的锌指核酸酶对EGFP基因有突变作用,可以为以后获得无标记基因供核细胞进行体细胞核移植生产克隆羊奠定基础。; 袁玉国于宝利宋绍征周峰张利清顾迎迎禹明慧成勇; 关键词：核移植 EGFP 基因打靶

家兔超数排卵和胚胎移植妊娠率的影响因素分析被引量：3: 2013年; 应用FSH和HCG相结合的不同方法 (递减量与恒量法),对不同兔龄和是否经产的中国家兔进行了超数排卵处理。其中,递减量法超排处理:每间隔12 h依次肌肉注射15、15、10、10、5及5 U/只共60 U的FSH,6次之后间隔12 h,经耳缘静脉注射HCG 100 U/只,合笼;恒量法超排处理:每间隔12 h肌肉注射10 U/只共60 U的FSH,6次之后间隔12 h,经耳缘静脉注射HCG 100 U/只,合笼。17 h后,取卵经显微注射后移植到排卵点分布不同的家兔输卵管中,比较分析了超数排卵及胚胎移植妊娠率的影响因素,旨在优化兔超数排卵和胚胎移植方法。结果显示,①总量为60 U的FSH递减量肌肉注射法超排效果略优于恒量法(688枚、671枚),但差异不显著(P>0.05);②9～11月龄的母兔超排效果明显优于6～8月龄的母兔(794枚、565枚),差异显著(P<0.05);③经产母兔的超排效果明显优于未经产的母兔(887枚、472枚),差异显著(P<0.05);④经显微注射重组DNA的胚胎移植受体时,两侧卵巢均有排卵点的胚胎移植受体妊娠率明显高于一侧卵巢有排卵点和两侧卵巢均无排卵点的受体(81.25%、38.46%、37.50%),差异显著(P<0.05)。试验证明,通过肌肉注射递减总量为60 U的FSH对9～11月龄经产母兔的超排效果最佳,且两侧卵巢均有排卵点的受体胚胎移植妊娠率最高,为胚胎研究工作者提供了一定的参考依据。; 宋绍征葛欣张利清成姚斌荣耀顾迎迎吉学桥刘昊成勇; 关键词：超数排卵胚胎移植妊娠率显微注射

转录激活因子样效应物核酸酶介导的山羊β-乳球蛋白基因敲除和人乳铁蛋白基因定点整合: 为了敲除山羊乳中致敏源β-乳球蛋白(BLG)基因，同时在BLG 基因座定点整合人乳铁蛋白(hLF)基因.首先针对山羊BLG 第3 外显子识别位点设计了1 对特异性TALEN-3-L/R 质粒对;同时，构建了含有1 个HS...; 宋绍征朱孟敏袁玉国荣耀徐晟陈思梅珺琰成勇; 关键词：人乳铁蛋白体细胞核移植

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