张敬梅
- 作品数：4 被引量：18H指数：2
- 供职机构：安徽农业大学安徽省人兽共患病重点实验室更多>>
- 发文基金：安徽省科技攻关计划安徽省“十五”科技攻关项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 一株分泌抗猪γ-干扰素单克隆抗体的杂交瘤细胞的鉴定被引量：7
- 2009年
- [目的]应用杂交瘤技术获得稳定分泌抗猪γ-干扰素单克隆抗体的杂交瘤细胞株。[方法]先将原核表达产物His-PoIFN-γ免疫BALB/c小鼠4次,然后进行细胞融合,再以纯化的GST-PoIFN-γ作为包被抗原,用间接ELISA筛选阳性杂交瘤无性系,最终获得能稳定分泌抗猪IFN-γ单克隆抗体的杂交瘤细胞株,对其进行间接ELISA和Western blot检测。[结果]试验获得1株能稳定分泌抗猪IFN-γ单克隆抗体的杂交瘤细胞株,被命名为B3株,经间接ELISA和Western blot检测,该株分泌的抗体能与融合蛋白His-PoIFN-γ和GST-PoIFN-γ发生特异性反应,而与其他表达鸡γ-干扰素、His和GST蛋白等的重组质粒均不发生反应。B3株分泌的抗体小鼠腹水的ELISA效价达到1∶160 000,抗体亚型为IgG1型,且轻链为κ链。[结论]该研究为建立猪γ-干扰素检测方法,研究机体的免疫状态及免疫机制提供了技术基础。
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- 关键词：猪Γ-干扰素融合蛋白单克隆抗体
- 一株分泌猪IFN-γ单克隆抗体的杂交瘤细胞的制备与鉴定
- 干扰素/(Interferon, IFN/)-γ是被发现最早,研究最多的细胞因子。IFN-γ除了具有抗病毒和抗肿瘤活性外,还具有上调MHCII类抗原的表达、促进抗原提呈等免疫调节活性/[1/]。为了建立猪γ-干扰素的检测...
- 张敬梅
- 关键词：猪Γ-干扰素融合蛋白单克隆抗体
- 文献传递
- 猪γ干扰素基因的克隆表达及其抗原性的初步研究被引量：1
- 2010年
- 为研究猪γ干扰素(poIFN-γ)的生物学活性及其在机体免疫应答中的作用机理,克隆并表达了猪IFN-γ基因。首先应用RT-PCR方法通过一对自行设计的引物从猪脾脏淋巴细胞中扩增了猪γ干扰素基因片段,分别将其定向插入原核表达载体pGEX-4T-1和pET-32 a中,经测序表明与已报道的核苷酸序列同源性为100%。接着将重组质粒pGEX-poIFN-γ和pET-poIFN-γ分别转化大肠杆菌BL21株,经IPTG诱导,得到高效表达。所表达的融合蛋白均以不溶性的包涵体形式存在,分子量分别为43.0和35.0 ku,与理论推算值相符。为研究IFN-γ在表达中结构的变化,采用上述2种融合蛋白分别作为免疫抗原和检测抗原。结果用GST-poIFN-γ免疫小鼠所诱导的抗体可与poIFN-γ产生特异性结合,表明不同原核质粒表达的猪IFN-γ仍保持其特有的结构。
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- 关键词：猪Γ干扰素克隆原核表达抗原性
- 猪瘟病毒E2蛋白A/D区单抗的制备及其抗原表位的初步研究被引量：11
- 2009年
- 应用分子克隆技术将猪瘟病毒E2蛋白部分基因插入到载体pGEX-4T-1中构建重组质粒pGEX-4T-E(A),在大肠杆菌Rosetta中表达融合蛋白GST-E(A),以纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,经克隆化和间接ELISA筛选,获得了C3、A1两株稳定分泌抗猪瘟病毒E2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,ELISA结果显示,其腹水效价为1∶128000和1∶256000。Western blotting结果证实,单克隆抗体C3和A1能与猪瘟病毒(classical swinefever virus,CSFV)发生特异性的反应,表明该单抗是针对猪瘟病毒E2蛋白的保守线性表位。
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- 关键词：猪瘟病毒E2蛋白
