徐晓霞
- 作品数：8 被引量：12H指数：2
- 供职机构：长春生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 发文基金：吉林省科技发展计划基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 细胞培养结合实时荧光RT-PCR法快速检测甲肝病毒滴度的研究被引量：2
- 2014年
- 目的建立一种细胞培养与实时荧光RT-PCR相结合的快速检测甲肝病毒滴度的方法。方法根据甲肝病毒(HAV)L-A-1株5'端基因组序列,设计了2条基因特异性引物及一条探针,建立实时荧光RT-PCR法,结合细胞培养检测甲肝病毒滴度,并与ELISA检测法进行比较。结果实验中建立的方法能特异检测甲肝病毒,细胞培养8d检测病毒滴度为lg107.0CCID50/mL。同一样本重复检测3次,批内样本Ct值的变异系数最大为0.89%,批间样本Ct值变异系数最大为1.66%。建立的细胞培养结合实时荧光RT-PCR法(细胞培养8 d)与细胞培养ELISA法(细胞培养28 d)检测甲肝病毒滴度结果差异无统计学意义(P>0.05)。结论该方法具有快速、灵敏、特异等优点,应用于疫苗常规检测有良好前景。
- 徐晓霞夏青娟徐艳玲岳立广惠琦褚东林曹玉婷刘令九
- 关键词：甲型肝炎病毒细胞培养实时荧光RT-PCRELISA
- 甲型肝炎灭活疫苗(L-A-1减毒株)的制备及其免疫原性被引量：4
- 2015年
- 目的用甲型肝炎病毒（hepatitis A virus,HAV）L-A-1减毒株制备甲型肝炎灭活疫苗,并检测其免疫原性。方法用细胞工厂培养人胚肺二倍体细胞（2BS株）,感染L-A-1减毒株增殖病毒,收获含病毒的细胞,经裂解、聚乙二醇（polyethylene glycol,PEG）6000沉淀、三氯甲烷抽提、凝胶过滤层析纯化后,甲醛灭活,氢氧化铝佐剂吸附,制备3批试验疫苗。按照《中国药典》三部（2010版）中甲肝灭活疫苗标准进行各项检定,并进行小鼠效力试验,计算半数有效稀释倍数;将疫苗于37℃存放5、10、15、20、25和30 d,考察疫苗的加速稳定性。结果甲型肝炎病毒经提取纯化后,抗原回收率达80%以上,杂蛋白去除率达95%以上;制备的3批试验疫苗各项检定结果均符合《中国药典》三部（2010版）要求;小鼠效力试验结果显示,半数有效稀释倍数分别为进口疫苗和国产疫苗的1.25～1.40和2.02～2.26倍;37℃保存30 d,疫苗的体外相对效力仍在合格范围内。结论制备了纯度较高的甲型肝炎灭活疫苗,其在小鼠体内具有良好的免疫原性,为进一步规模化生产甲型肝炎灭活疫苗奠定了基础。
- 刘令九岳立广徐艳玲惠琦徐晓霞侯丽娟李淑焱李勇夏青娟赵小琳
- 关键词：甲型肝炎灭活疫苗免疫原性
- 一种甲型肝炎灭活疫苗及其制备方法
- 本发明涉及生物技术领域，公开了一种甲型肝炎灭活疫苗的制备方法，即培养接种了甲肝病毒L-A-1减毒株的人胚肺二倍体细胞2BS细胞株至病毒增殖高峰期，用胰酶、细胞裂解液常规消化细胞，收获病毒液，经PEG沉淀、氯仿抽提，去除细...
- 刘令九岳立广赵小琳徐艳玲侯丽娟李海滨刘兵岳丹蔡晖徐晓霞李景良
- TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测甲型肝炎减毒活疫苗病毒含量的研究被引量：3
- 2013年
- 目的：建立一种快速定量检测甲型肝炎减毒活疫苗病毒含量的实时荧光定量RT-PCR方法。方法对Gen-Bank中登陆的甲型肝炎减毒活疫苗株（ L-A-1）和其他甲型肝炎病毒基因组全序列比较分析，根据其高度保守的5′端非编码区设计针对甲型肝炎减毒活疫苗株特异性引物与探针，对荧光定量RT-PCR反应条件进行优化，检测该方法的特异性和灵敏性，并对甲型肝炎减毒活疫苗病毒含量进行定量检测。结果该方法对甲型肝炎减毒活疫苗株高度特异，扩增片段为207 bp，不与其他肠道病毒发生非特异性反应。在104 CCID50/管～10-1 CCID50/管之间有良好的扩增曲线，检测的灵敏度可达0．1CCID50～0．01CCID50，比普通RT-PCR高100倍。结论该方法具有快速、灵敏、特异、重复性好等优点，可应用于甲型肝炎减毒活疫苗生产过程中病毒含量滴度测定及指导疫苗成品的配制。
- 夏青娟徐晓霞李树林岳立广龚士卿刘令九
- 关键词：甲肝病毒TAQMAN探针
- 抗甲型肝炎病毒卵黄免疫球蛋白的制备及应用
- 2013年
- 目的 制备抗甲型肝炎病毒（hepatitis A virus,HAV）卵黄免疫球蛋白（immunoglobulin of yolk,IgY）,并建立双抗体夹心ELISA法,用于测定甲肝疫苗中的HAV抗原含量。方法 用纯化的HAV免疫健康产蛋母鸡,制备抗HAVIgY,采用多步骤分离纯化IgY,紫外分光光度法测定纯化IgY的蛋白含量,还原型SDS-PAGE分析IgY的相对分子质量及纯度,间接ELISA法检测IgY的效价、特异性及其热稳定性和酸碱稳定性。以纯化的IgY作为包被抗体,HRP标记的抗HAV单克隆抗体作为二抗,建立双抗体夹心ELISA法,对疫苗生产过程中的HAV抗原含量进行测定,并与市售ELISA试剂盒的检测结果进行比较。结果 亲和层析纯化后的抗HAV IgY浓度为3.67 mg/ml;重链和轻链的相对分子质量分别为66 000和27 000,纯度为96.78豫;效价最高为1：16 000;纯化的抗HAV IgY只与HAV呈阳性反应,与脊髓灰质炎病毒和肠道病毒71（enterovirus 71,EV71）均不反应;纯化的抗HAV IgY在25～70℃条件下处理15 min及经pH 3.0～10.0的Tris-HCL缓冲液处理2 h,其抗体效价基本无影响。建立的双抗体夹心ELISA法HAV浓度在15.62～2 000.00 ng/ml范围内,HAV浓度的对数值与A450值之间呈线性相关,R2=0.935,最低检测量为7.81 ng/ml,与市售试剂盒检测结果具有良好的相关性,相关系数为0.952 7。结论 制备的抗HAV IgY浓度、纯度、效价均较高,特异性较强,稳定性良好,建立的双抗体夹心ELISA法可用于检测甲肝疫苗生产过程中HAV的抗原含量。
- 夏青娟李树林孟凡东赵淑杰徐晓霞惠琪刘令九
- 细胞培养/链特异性RT-PCR方法检测甲型肝炎减毒活疫苗病毒滴度被引量：2
- 2015年
- 目的建立检测甲型肝炎减毒活疫苗病毒滴度的细胞培养/链特异性逆转录聚合酶链式反应(strand-specific reverse transcriptase-polymerase chain reaction,strand-specific RT-PCR)方法。方法根据甲型肝炎病毒(HAV)L-A-1株基因组序列,设计5条特异性引物。将甲型肝炎减毒活疫苗原液感染2BS细胞,收获增殖高峰期的HAV,提取RNA,进行2轮链特异性PCR扩增,检测HAV复制过程中的负链RNA,通过Reed-Muench公式计算HAV病毒滴度,并对建立的细胞培养/链特异性RT-PCR法进行特异性及敏感性验证,同时用该方法检测4批冻干甲型肝炎减毒活疫苗病毒滴度,并与《中国药典》三部(2010版)中甲型肝炎减毒活疫苗病毒滴度检测方法(细胞培养时间为28 d/ELISA法)进行比较。结果 HAV负链RNA经2轮扩增获得阳性扩增条带,大小与预期相符。该方法检测HAV复制过程中的负链RNA,特异性、敏感度均较好。两种方法检测的病毒滴度接近,差异无统计学意义(P>0.05)。结论建立的细胞培养/链特异性RT-PCR方法检测周期短,灵敏度、特异性好,可用于疫苗的滴度检测。
- 夏青娟徐艳玲李树林禇东琳候丽娟翁滨肖想邱璐徐晓霞刘令九
- 关键词：甲肝减毒活疫苗病毒滴度
- 不同佐剂对preS2/S乙型肝炎疫苗免疫原性的影响
- 2013年
- 目的探讨不同佐剂对preS2/S乙型肝炎疫苗免疫原性的影响。方法将BALB/C小鼠随机分为6组:铝佐剂组(S+Al和S2/S+Al)、细胞因子佐剂组(S2/S+CK1、S2/S+CK2和S2/S+CK3)及阴性对照组(NG),用相应抗原腹腔免疫各组小鼠,1 mL/只,分别于免疫后2、4和6周采血,分离血清,ELISA法检测血清中抗-HBs抗体和preS2抗体水平;WST-1法检测淋巴细胞增殖情况。结果免疫后2周,铝佐剂组(S+Al和S2/S+Al)抗体水平较高,阳转率达100%,而细胞因子佐剂组抗-HBs抗体水平均较低,S2/S+CK2及S2/S+CK3组抗体阳转率为0,与NG组比较差异无统计学意义(P>0.05);免疫后4周,细胞因子佐剂组抗-HBs抗体水平升高明显,铝佐剂组S2/S+Al抗体水平显著高于S+Al(P<0.05);免疫后6周,细胞因子佐剂组抗体水平高于铝佐剂组,其中S2/S+CK1组抗体水平较高。免疫后2周,各组小鼠血清中抗-preS2抗体均达到较高水平,各组间差异均无统计学意义(P>0.05);免疫后4周和6周,抗体水平均有所下降,但下降不明显;铝佐剂组S+Al和S2/S+Al抗-preS2抗体水平差异无统计学意义(P>0.05)。免疫后4周,各组小鼠淋巴细胞刺激指数铝佐剂组(S+Al和S2/S+Al)低于细胞因子佐剂组,且差异有统计学意义(P<0.05),其中S2/S+CK1组淋巴细胞增殖水平较高。结论不同佐剂的preS2/S乙型肝炎疫苗均能诱导较高水平的抗-HBs和抗-preS2抗体,细胞因子佐剂组淋巴细胞增殖水平显著高于铝佐剂组,为新型乙型肝炎疫苗和治疗性乙型肝炎疫苗的研究提供了实验依据。
- 徐艳玲徐晓霞王宇谷丽娟杨明隋红高湛翱刘令九赵小琳
- 关键词：S抗原乙型肝炎疫苗佐剂
- 一种甲型肝炎灭活疫苗灭活验证试验方法的建立被引量：2
- 2015年
- 目的探讨细胞培养/链特异性RT-PCR方法可否作为甲型肝炎(甲肝)灭活疫苗(L-A-1减毒株)的病毒灭活验证试验方法。方法根据甲肝病毒(HAV)L-A-1株基因组序列,设计5条基因特异性引物,提取HAV基因组RNA,应用设计的正向引物进行反转录,再进行两轮PCR扩增,通过检测HAV复制过程中的负链中间体,对甲肝灭活疫苗灭活验证试验方法进行探讨,并与《中华人民共和国药典》甲肝灭活疫苗HAV灭活验证试验方法进行比较。结果细胞培养/链特异性RT-PCR方法对HAV负链RNA特异、敏感。通过方法学验证试验表明,该方法的特异性、敏感性和重复性均良好。利用此方法对5批甲肝灭活疫苗(L-A-1减毒株)进行检测,结果全为阴性,与《中华人民共和国药典》甲肝灭活疫苗HAV灭活验证试验测定结果相同。结论细胞培养/链特异性RT-PCR方法快速、灵敏可靠,可作为检测甲肝灭活疫苗(L-A-1减毒株)HAV灭活验证试验的方法。
- 刘令九徐晓霞王桂荣李娜孔雪段雪峰邵燕尚瑞琴于海龙夏青娟
- 关键词：甲型肝炎灭活疫苗
