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痘苗病毒天坛株P7.5k启动子的克隆及其结构与功能的研究被引量：1: 1991年; 本文利用DNA多聚酶链锁反应(PCR)技术克隆了天坛株痘苗病毒P7.5k启动子,核苷酸序列分析结果表明:天坛株7.5k启动子与WR株7.5k启动子比较,在其155bp中除存在3处点变异外,尚有一段7bp的自然缺失突变,其中4个碱基位于晚期转录起始位点,变异率高达6.45％。然而功能研究结果显示:天坛株和WR株P7.5k均为早晚期启动子,在哺乳动物细胞中两者的启动强度及功能时相均无明显差异。这表明:痘苗病毒基因存在多个转录起始位点是维持其遗传稳定性的一种自身保护机制。; 王双平阮力金奇曹旭朱既明; 关键词：痘苗病毒启动子克隆 PCR

建立以 TK 基因为标记将外源基因导入臭曲霉(Aspergillus foetidus)的选择系统及外源基因的表达被引量：1: 1990年; 本文报道建立以胸腺嘧啶核苷激酶(TK)为标记,利用痘苗病毒 TK 基因为旁侧序列的外源基因载体,通过体内同源重组的原理将外源基因导入臭曲霉菌,并用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BUdR)进行转化株选择的新系统,对黑曲霉菌 TK^+株的挑选、转化及选择条件等进行了研究。用这一系统,成功地将臭曲霉菌自身分离到的启动基因 H8驱动下的乙肝表面抗原(HBsAg)基因导入臭曲霉菌。Southern blot 和多次孢子传代证实,HBsAg 基因已与宿主的 DNA 稳定整合;在发酵上清液中,ELIAS 检测 HBsAg 为阳性(P/N 值在20左右),Western blot 有特异的带存在,免疫电镜观察发现,在发酵液中存在有与人血清中 HBsAg 颗粒大小、形态相似的 22nm 的颗粒。这些结果表明,HB(?)Ag 基因在臭曲霉菌中已获表达。本文建立的基因导入和选择系统可广泛应用于各种外源基因在臭曲霉菌中表达的研究。; 刘宏迪曹旭吴晓军阮力梁平彦; 关键词：外源基因 TK基因

臭曲霉(Aspergillus foetidus)启动子H8片段克隆及其序列被引量：3: 1990年; 使用原核及真核菌通用的挑选启动子克隆载体 pJGI,从臭曲霉菌体总 DNA 中分离到具有较好活性的启动子 H8片段。根据 Southern blot 证明该启动子来自臭曲霉菌;H8全片段 DNA 序列分析结果表明其含有750bp,内含典型真核启动子功能序列(TA TA box)及增强子 GTGG TTT AAA G 的相似序列,分析证实是一个新的臭曲霉启动子。初步实验表明该启动子不但在臭曲霉菌内有启动功能,并第一次证明来自臭曲霉菌的启动子在原核细胞中也具有启动子活性,能够表达完整的 Lac Z 基因。; 刘宏迪曹旭吴晓军金奇阮力梁平彦; 关键词：启动子克隆

呼吸道合胞病毒糖蛋白F和G在同一个重组痘苗病毒中的表达被引量：15: 1992年; 在使用痘苗病毒启动子P11k、P25k和P7.5k研究呼吸道合胞病毒(RSV)糖蛋白F和G表达效率的基础上,构建成功同时表达BSV F和G糖蛋白的重组痘苗病毒(VMS11G75F)。结果表明,11k和7.5k启动子可以象单独表达RSV F或G一样有效地同时表达RSVF和G。荧光检测显示,RSV F和G主要分布于细胞膜表面,部分RSVF分布于胞浆近核膜处。这种荧光分布特征在RSV F和G单独表达和同时表达的重组痘苗病毒中无明显差别。Westernblot表明,痘苗病毒表达的RSV糖蛋白G具有一条分子量约为90kD的弥散带,与RSV感染细胞产生的RSV G相同;RSVF除具有与RSV感染细胞产生的F1(48kD)和F2(20kD)相同的两种形式外,尚有少量未被蛋白酶水解的F0(6skD)。RSVF和G同时表达的重组痘苗病毒VMS11G75F经传15代后,在表达水平和基因组水平上都具有良好的遗传稳定性。; 阮力郑浩强徐水婵王双平曹旭解燕乡朱既明; 关键词：呼吸道合胞病毒重组痘苗病毒

以β-半乳糖苷酶为标记选出高效表达乙型肝炎病毒表面抗原的天坛株重组痘苗病毒: 1989年; 我们从天坛株痘苗病毒的基因组中,分离编码11K及25K蛋白的双向转录启动子,以胸苦激酶(TK)基因为旁侧序列,插入到质粒pAT153中,构建成可以同时表达两个外源基因的载体质粒,并将乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)基因及大肠杆菌的β-半乳糖苦酶(LacZ)基因,插入该载体质粒,使它们分别在11K及25K启动子钠控制下,构建成共表达质粒。用钙沉淀法将此质粒DNA同天坛株痘苗病毒在细胞内进行同源重组,在含X-gal的培养基挑蓝色蚀斑,简便、准确地选出重组痘苗病毒。所选到的重组痘苗病毒高效表达了HBsAg。我们还把上述重组痘苗病毒接种动物,观察了它们的毒力及免疫原性。; 刘庚起曹旭朱既明任贵方李红梅解燕乡彭薇; 关键词：半乳糖苷酶乙型肝炎病毒表面抗原痘苗

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曹旭