- 中国近交系版纳微型猪α1，3-半乳糖基转移酶基因的克隆及其真核表达载体的构建被引量：3
- 2009年
- 克隆中国近交系版纳微型猪(Banna minipig inbred-line,BMI)α1,3-半乳糖基转移酶基因(α1,3-galacto-syltransferaseα1,3-GT)并构建其真核表达载体。从版纳微型猪肝脏中提取总RNA,RT-PCR扩增出α1,3-GT cD-NA全长序列,克隆到pMD18-T载体,测序后再克隆到质粒pEGFP-N1中,构建α1,3-GT真核表达载体pEGFP-N1-GT。用脂质体法瞬时转染人肺腺癌细胞A549,RT-PCR检测转染细胞中α1,3-GT mRNA的表达;利用荧光素标记的植物凝集素(FITC-BS-IB4lectin),直接免疫荧光法检测转染细胞中α1,3-GT合成α-Gal表位的能力。结果显示版纳微型猪α1,3-GTcDNA全长1116bp,其序列与GenBank中小鼠和牛α1,3-GTcDNA具有高度同源性,与猪α1,3-GTcDNA全长序列完全一致。酶切和PCR证实重组真核表达载体pEGFP-N1-GT构建成功。转染pEG-FP-N1-GT的A549细胞有α1,3-GTmRNA表达,在其细胞膜检测到α-Gal表位的表达。中国近交系版纳微型猪α1,3-GTcDNA的克隆及其真核表达载体的构建为该基因在异种器官移植和肿瘤免疫治疗中的进一步研究和应用奠定了基础。
- 朱圣明王艳萍郑鸿程惊秋陆燕蓉曾养志王宇王竹
- 关键词：Α1,3-半乳糖基转移酶异种移植
- SP100的表达在喉癌中的生物学意义及其靶向治疗的研究被引量：2
- 2017年
- 目的:通过对相关数据库数据分析,探究喉癌组织中SP100基因表达情况和生物学意义,以及对患者生存和预后的影响和可能存在的靶向治疗的意义。方法:对NCBI中GEO数据库中的数据集数据进行表达量分析、生存分析和相关性分析。结果:研究分析表明,与正常癌旁组织相比,SP100基因在喉癌组织中存在明显的低表达(P=0.003 9),而在各癌症进程分组间其表达差异没有统计学意义;SP100基因的表达与PLAU和MMP1基因的表达均存在明显的负相关(PLAU,P=0.019 6,r=-0.516 8;MMP1,P=0.004 4,r=-0.608 8);SP100的低表达会导致喉癌患者的无复发生存率明显降低(GSE27020,P=0.002 4;GSE25727,P=0.017 9)。结论:通过分析表明,SP100基因在喉癌组织中表达下调,提示该基因在恶性肿瘤的发生发展中起到了一定作用,可能是喉癌一个新的肿瘤抑制基因,并且对于喉癌治疗的特异性用药靶点的选用和预后检测都具有重要意义。
- 吴峰胡承浩王丹陈宇朱圣明段奇文骆志国
- 关键词：SP100喉癌靶向治疗
- 女阴Fordyce病1例
- 2014年
- 患者女，23岁，无业，已婚。因“外阴部出现小丘疹1年余”来诊。1年前无意中发现外阴起针尖至粟粒大小丘疹．无明显瘙痒，未行治疗。自觉丘疹逐渐增多。遂来我院就诊。既往健康，家族中无类似疾病。体检：系统检查无明显异常。皮肤科情况：阴毛略稀疏，双侧大阴唇中外侧缘黏膜散在白色及黄白色针尖至粟粒大丘疹，边界尚清，形状不规则，将黏膜拉紧时，皮疹更为明显。辅助检查：血、尿常规均正常。
- 谢玲朱圣明赵伦华段徳鉴
- 关键词：既往健康外阴部丘疹皮肤科大阴唇尿常规
- 罕见淋巴结窦组织细胞增生伴嗜血综合征1例
- 2015年
- 患者男，16岁，因“发现左腹股沟包块九月余，间断发热7个月”入院。入院查体：一般情况差，重度贫血貌，皮肤黏膜无出血点，左腹股沟区可见巨大肿块，大小约20 cm x24 cm，上界至脐水平，下界至左大腿上段水平，外侧至髂前上棘，内侧达脐中线，质硬，有压痛。右侧腹股沟可触及多个肿大淋巴结，边界尚清，活动尚可，无压痛，余浅表淋巴结未扪及肿大。心肺肝脾检查无明显异常。左下肢活动受限，左脚踝部凹陷性水肿。入院检查：血液分析：WBC 4．8 g／L， RBC 0．83 T／L，HGB 26 g／L，PLT 201 g／L。肝肾功、电解质无明显异常，胆红素代谢及凝血功能轻度异常。血球蛋白41．8 g／L，ESR 115 mm／h均显著增高。病毒标志物HIV（－）， EBV （－），单纯疱疹、风疹、巨细胞病毒检查均为阴性。骨髓穿刺结果提示：增生性贫血。腹部B超：肝脾轻度增大，双侧腹股沟多发淋巴结肿大；盆腔CT：左侧盆腔梭形不规则肿块延续至腹股沟，边界欠清，密度不均。盆腔MRI：盆腔左侧巨大不规则肿块影，边缘有包膜，病变向周围侵犯。肿块内信号明显不均，考虑恶性肿瘤可能性大。病理诊断：窦组织细胞增生伴嗜血综合征。见图1、2。
- 谢玲朱圣明
- 关键词：窦组织细胞增生
- 肿瘤坏死因子-α对人喉鳞癌细胞放疗增敏作用的实验研究被引量：6
- 2010年
- 目的探讨人肿瘤坏死因子α(TNF-α)对放射抗拒性人喉鳞癌细胞增殖、凋亡的影响及对其放射抗拒性的逆转作用。方法(1)利用MTT法检测TNF-α对人喉鳞癌放射抗拒性细胞系Hep-2R增殖的影响;(2)TUNEL法和流式细胞仪检测TNF-α对Hep-2R细胞凋亡的影响;(3)RT-PCR法测定TNF-α处理、TNF-α联合放疗处理Hep-2R后,细胞凋亡相关基因BaxαmRNA的表达水平;(4)克隆形成实验检测TNF-α对Hep-2R细胞放射敏感性的逆转作用;(5)移植瘤实验检测TNF-α对Hep-2R细胞放射敏感性的逆转。结果(1)TNF-α对人喉鳞癌放射抗拒性细胞系Hep-2R的生长增殖具有明显的抑制作用,且具有浓度依赖性,其中400u/mL为理想药物浓度。(2)TUNEL结果显示:TNF-α处理后,Hep-2R细胞凋亡率明显增加;流式细胞分析显示:对照组、TNF-α处理组和TNF-α联合放疗处理组Hep-2R细胞的凋亡率分别为10%,30%和55%,差异具有统计学意义(P<0.05)。(3)RT-PCR检测结果表明,TNF-α处理组和TNF-α联合放疗处理组Hep-2R细胞的Baxα基因表达均较对照组细胞明显上调。(4)克隆形成实验结果显示:对照组、TNF-α处理组、放疗组和TNF-α联合放疗处理组细胞的克隆形成率分别为100%,(80±3)%,(58±2)%和(39±2)%,差异有统计学意义(P<0.05)。(5)裸鼠移植瘤实验结果显示:TNF-α处理组,放疗组和TNF-α联合放疗处理组细胞抑瘤率分别为(15.2±1.9)%,(35.4±2.1)%和(55.1±2.9)%,三者比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论TNF-α可能通过抑制人喉癌细胞增殖,促进细胞凋亡,从而起到有效的放疗增敏作用。
- 朱圣明宋仕茂吴峰骆志国丁珺吴俊波
- 关键词：肿瘤坏死因子-Α喉癌凋亡放疗增敏
- 褪黑素的抗肿瘤血管生成效应
- 宋仕茂骆志国余明华段奇文杨贤子崔培林朱圣明修瑞娟等
- (1)成功的分离培养原代HUVECS，免疫磁珠筛选后能继续贴壁生长并传代，倒置显微镜下HUVECs呈鹅卵石状，Vlll因子内皮细胞细胞免疫化学着棕色，电镜下可见内皮细胞特征性的Weibel-Palade小体。(2)极低浓...
- 关键词：
- 关键词：褪黑素抗肿瘤作用血管生成
- siRNA沉默Chk1基因对乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响及其作用机制的探讨被引量：3
- 2012年
- 目的探讨siRNA沉默检测点激酶1(Chk1)基因对乳腺癌细胞MCF-7增殖和周期的影响及其作用机制。方法采用RNAi技术将乳腺癌细胞MCF-7中Chk1基因沉默,用Western blotting检测转染前后MCF-7细胞中Chk1蛋白表达情况;采用MTT比色法和流式细胞术分析Chk1基因沉默对乳腺癌细胞MCF-7增殖和周期的影响。结果 Chk1 siRNA转染后,MCF-7细胞中Chk1蛋白表达下降约82%,明显低于未转染组和脂质体转染组(P<0.05)。Chk1 siRNA转染组转染48h的MCF-7细胞增殖活性下降,其增殖抑制率为44.7%,明显高于脂质体转染组的5.26%(P<0.05)。流式细胞仪检测显示,Chk1 siRNA转染组G2/M期比例为(11.3±0.7)%,明显低于未转染组(44.2±1.9)%和脂质体转染组(45.3±2.1)%,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 siRNA沉默Chk1基因可明显抑制人乳腺癌细胞MCF-7增殖,并且其抑制增殖作用与减弱G2/M期阻滞有关。
- 刘志祥朱圣明李瑞明王晓勋
- 关键词：MCF-7细胞株
- 人端粒酶催化亚单位启动子驱动的EGFP真核表达载体的构建及在肺癌细胞的表达被引量：11
- 2007年
- 目的:构建人端粒酶催化亚单位(hTERT)启动子驱动的增强绿色荧光蛋白(EGFP)真核表达载体,研究其调控EGFP在肿瘤细胞中的靶向表达。方法:从含hTERT启动子序列的重组质粒pGL3-hTERTp上,酶切获取约1100bp的启动子片段,克隆至无启动子的EGFP质粒载体pEGFP-1的多克隆位点中,构建pEGFP-hTERTp真核表达载体。用含有巨细胞病毒(CMV)启动子的质粒pEGFP-N1作为阳性对照,pEGFP-1作为阴性对照,脂质体转染法分别转染人肺癌细胞95D,NCI-H446,A2,A549,LTEP-a-2,YTMLC和人正常细胞MRC-5,荧光显微镜下观察各细胞中EGFP转录表达情况。结果:双酶切和单酶切均显示载体pEGFP-hTERTp构建成功。细胞转染结果显示:在转染了pEGFP-hTERTp质粒的肺癌细胞中EGFP都有不同程度的表达,而在MRC-5中无EGFP表达;转染pEGFP-N1的肺癌细胞和正常细胞中均可清晰地观察到EGFP强荧光表达。结论:hTERT启动子能调控EGFP在肺癌细胞中靶向性转录表达。CMV启动子调控的EGFP在肺癌细胞和正常细胞中的表达不具有特异性。hTERT启动子有可能作为肿瘤靶向性基因治疗的调控元件。
- 朱圣明王艳萍陈晓禾唐小军肖文
- 关键词：人端粒酶催化亚单位启动子肺癌靶向表达绿色荧光蛋白
- 异种移植抗原α-gal介导人血清杀伤A549细胞的实验研究
- 2012年
- 背景与目的人体α-1,3半乳糖基转移酶(α-1,3Galactosy ltransferase,α-1,3GT)基因功能失活而不表达α-半乳糖基(α-galactosyl,α-gal)表位,但天然存在着大量抗α-gal抗体,异种器官移植研究结果提示,在人肿瘤细胞上重新表达异种移植抗原α-gal,可能诱发类似于宿主抗移植物超急性排斥反应的抗肿瘤效应。本研究通过基因导入手段,建立稳定表达异种移植抗原α-gal的转基因人肺癌细胞系,探讨α-gal介导的人血清抗肿瘤的可能性及其机制。方法将前期成功构建的α-1,3GT基因真核表达质粒pEGFP-N1-GT瞬时转染人肺腺癌细胞A549,筛选并建立稳定的转基因细胞系A549-GT。MTT增殖实验和显微镜观察转基因细胞生物学特性变化;RT-PCR检测A549-GT中α-1,3GT基因mRNA表达;荧光素标记的凝集素(FITC-BS-IB4lectin)染色检测α-1,3GT在肿瘤细胞表面合成α-gal的能力;A549-GT细胞及其培养基分别与正常人细胞共培养,检验α-1,3GT基因的稳定性和酶活性的稳定性;人血清结合实验检测A549-GT与IgM和补体C3结合情况。结果RT-PCR检测到转基因细胞系A549-GT中有α-1,3GTmRNA表达。荧光显微镜和流式细胞术检测结果显示:A549-GT能够长期稳定表达异种移植抗原α-gal表位;A549-GT与其亲本细胞在生长形态及增殖速度上无明显差异;A549-GT细胞及其培养基分别与正常人胚肺成纤维细胞MRC-5共培养均不能使MRC-5获得α-gal合成能力;经人血清处理后,荧光免疫实验观察到转基因细胞系A549-GT能与血清抗体IgM结合并诱导补体C3结合。结论异种移植抗原α-gal在肿瘤细胞上的重新表达,可能通过补体依赖的细胞毒机制,介导类似于异种器官移植排斥反应的抗肿瘤效应。
- 朱圣明谢玲郑鸿秦凤刘美骆志国王艳萍
- 关键词：异种抗原A549细胞
- CD44通过重编程SP侧群细胞影响鼻咽癌的进展被引量：1
- 2017年
- 目的探讨CD44通过重编程侧群细胞和影响鼻咽癌进展的分子机制。方法利用超高速细胞分选平台,鉴定、分选鼻咽癌细胞系SP侧群细胞。从蛋白质水平研究鼻咽癌细胞、SP侧群细胞生物学特性及其影响鼻咽癌进展的分子机制。结果 CD44分子作用网络中CXCR4、CD31、MMP-9在SP细胞中表达上调(P<0.05);CD44及其下游调控分子ZAP70蛋白在SP细胞中表达增高(P<0.05)。MTT细胞加入SP细胞中肿瘤微球的数目显著增加(P<0.05)。CD44分子作用网络中CXCR4、CD31、MMP-9、ZAP70蛋白在SP细胞中表达与肿瘤微球的数目呈正比(P<0.05)。结论 CD44通过重编程SP侧群细胞影响鼻咽癌的进展。
- 吴峰朱圣明王科曹传华
- 关键词：鼻咽癌肿瘤干细胞CD44侧群细胞
