李坤
- 作品数:8 被引量:4H指数:2
- 供职机构:贵州大学更多>>
- 发文基金:国家教育部博士点基金国家重点基础研究发展计划贵州省国际科技合作计划更多>>
- 相关领域:医药卫生理学自动化与计算机技术更多>>
- Mg^(2+)对Bloom综合症解旋酶与G4DNA结合的影响研究
- 2012年
- 利用荧光偏振技术检测了Mg2+对G4DNA、BLM-G4DNA复合物和BLM642-1290解旋酶与G4DNA结合的影响.结果表明,G4DNA荧光偏振值随着Mg2+浓度的增加而增加(P<0.01);BLM-G4DNA复合物的荧光偏振值随着Mg2+浓度的增加出现下降—升高—下降的变化趋势(P<0.01);G4DNA与BLM642-1290解旋酶结合的荧光偏振值随着Mg2+浓度的增加而逐渐下降(P<0.01);分析不同Mg2+浓度下两种分子结合的Kd值,发现Mg2+浓度为3.0mmol/L时,BLM642-1290解旋酶与G4DNA最容易结合,表明适量Mg2+浓度会促进BLM642-1290与G4DNA的结合,但会引起两种分子结合的形状、流动性和电荷等性质的改变.这些结果可为进一步研究BLM解旋酶对G4DNA的作用机理提供相关资料.
- 骆衡蔡明娟陈祥丁玫李坤许厚强
- 溴化乙锭对布鲁姆综合症解旋酶生物学特性的影响被引量:1
- 2012年
- 目的研究溴化乙锭(EB)对BLM解旋酶的生物学特性的影响。方法应用荧光偏振技术研究EB对BLM解旋酶的DNA结合活性与解链活性的影响;应用自由磷检测技术研究EB对BLM解旋酶的ATPase活性的影响;应用紫外吸收光谱法研究EB对BLM解旋酶的构象的影响。结果EB可完全抑制BLM解旋酶的DNA结合活性,当双链DNA与单链DNA作为底物时,Ci值分别为(21.3±0.7)μmol.L-1和(3.3±0.3)μmol.L-1;可完全抑制BLM解旋酶的解链活性,Ci值为(9.0±0.3)μmol.L-1;对BLM解旋酶的ATPase活性有抑制作用,但差异无显著性;可改变BLM解旋酶的构象,最大吸收峰发生红移。结论 EB可以结合BLM解旋酶并改变其构象,抑制其与DNA的结合,从而抑制BLM解旋酶的生物学活性。
- 许庆贺许厚强骆衡陈祥张金彪李坤
- 关键词:溴化乙锭DNA结合活性ATPASE活性
- 基于注意力机制的轻量型高分辨率人体姿态估计网络的研究
- 人体姿态估计网络实现对目标中人体关键点的检测与定位,是计算机视觉的研究重点和热点。近年来,受益于深度学习相关硬件和算法的迅速更新发展,人体姿态估计网络在行人检测、人机交互和行人重识别等方向实现了广泛应用。但随着人体姿态估...
- 李坤
- 关键词:卷积神经网络
- 甲磺酸培氟沙星抑制大肠杆菌RecQ解旋酶的体外DNA结合、解链和ATPase活性被引量:2
- 2012年
- RecQ家族解旋酶是DNA解旋酶中高度保守的一个重要家族,参与DNA复制、修复、重组、转录及维持端粒稳定等细胞代谢过程,在维持染色体稳定性与完整性中起着重要作用.甲磺酸培氟沙星(pefloxacin mesylate,PFM)是一种新型氟喹诺酮类抗菌药物,对一些革兰氏阴性菌具有明显的杀菌效果,临床上已广泛使用.本研究利用荧光偏振、自由磷检测技术研究PFM对大肠杆菌RecQ解旋酶的DNA结合活性、解链活性、ATPase活性的影响.结果表明,低浓度PFM可促进大肠杆菌RecQ解旋酶与ssDNA、dsDNA结合,达到一定量后PFM则抑制酶与DNA底物的结合,这种影响与DNA底物有关;PFM对RecQ解旋酶的DNA解链活性和ATP酶活性都具有抑制作用,但其抑制的效果有极显著差异(P<0.01):比较PFM对两种活性抑制的Ci值(对解链活性抑制的Ci值为(1.5±0.2)μmol/L,对ATP酶活性抑制的Ci值为(0.010±0.005)μmol/L)可知,PFM对大肠杆菌RecQ解旋酶ATPase活性的抑制强于其解链活性.这些结果可为研究以DNA解旋酶为药物靶标的分子机理奠定相关理论基础.
- 李坤骆衡许厚强陈祥刘微孟惠惠
- 关键词:甲磺酸培氟沙星构象
- 一种超声波强化储层增透渗流装置
- 本实用新型公开了一种超声波强化储层增透渗流装置,属于煤层增透技术领域。该装置包括间隙填充组件、换能器、压力控制组件和超声波发生器,所述压力控制组件通过管道与间隙填充组件连接,所述换能器部分插入到间隙填充组件中,所述超声波...
- 左少杰李坤左宇军裴鹏文志杰孔德中张亮葛兆龙沈晓莹
- 荧光偏振技术研究Bloom解旋酶催化核心与双链DNA的相互作用被引量:2
- 2013年
- Bloom综合症(BLM)解旋酶是RecQ家族DNA解旋酶中的一个重要成员,参与了DNA复制、修复、转录、重组以及端粒的维持等细胞代谢过程,在维持染色体的稳定性中具有重要的作用.BLM解旋酶的突变可导致Bloom综合症,患者遗传不稳定易患多种类型癌症.本研究运用荧光偏振技术研究BLM解旋酶催化核心(BLM642~1290)与双链DNA(dsDNA)的相互作用,分析其相关特征参数,了解BLM642~1290解旋酶与dsDNA的结合和解链特性.结果表明:BLM642~1290解旋酶与dsDNA的结合和解链与dsDNA 3′端的单链DNA(ssDNA)长度有关;解旋酶优先结合于dsDNA底物的ssDNA末端,且每分子解旋酶可结合9.6 nt的ssDNA;dsDNA 3′端ssDNA的长度为9.6 nt时,解旋酶的解链效率达到最大且不再随其长度而变化.另外,BLM642~1290解旋酶也能够结合和解链钝末端dsDNA,但其结合亲和力和解链效率低于有3′端ssDNA的dsDNA.推测BLM642~1290解旋酶在与dsDNA底物结合和解链时是单体形式,可能以尺蠖的形式解开dsDNA.这些结果可为进一步研究BLM解旋酶的功能特征提供理论基础.
- 骆衡许厚强陈祥刘朝前许庆贺李坤
- 关键词:DNA结合
- Bloom解旋酶突变体的克隆与表达
- 2013年
- blm基因的突变可导致Bloom综合症(BS),Bloom综合症是一种罕见隐性常染色体遗传疾病,患者遗传不稳定并易患多种类型癌症。临床发现BS患者细胞中的BLM的RecQ-Ct区域的1 036位半胱氨酸残基发生突变。运用生物信息学及分子生物学技术,通过两轮重组PCR,构建985位和1 036位氨基酸突变的BLM解旋酶多点突变基因,克隆到载体pET-28a中,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。分离纯化获得了高纯度(>95%)的双突变型BLM解旋酶,并对其进行了Western blotting鉴定。这些结果可为进一步研究BS的致病机制奠定基础。
- 张金彪许厚强骆衡许庆贺陈祥李坤
- 关键词:重组PCR基因克隆表达
- 一种金边地鳖室内套袋饲养方法
- 本发明公开了一种金边地鳖室内套袋饲养方法,其特征在于:包含以下步骤:(1)制作成网袋:选择两种不同目数的网袋,分别制成网兜,将小目数的网兜套于大目数网兜中,形成大套小的饲养网兜;(2)饲养基质:饲养网兜中放进蕨类植物,充...
- 戴仁怀李永超李坤
- 文献传递