张金彪
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 供职机构：贵州大学更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金贵州省优秀科技教育人才省长资金项目国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Bloom解旋酶突变体的克隆与表达
- 2013年
- blm基因的突变可导致Bloom综合症(BS),Bloom综合症是一种罕见隐性常染色体遗传疾病,患者遗传不稳定并易患多种类型癌症。临床发现BS患者细胞中的BLM的RecQ-Ct区域的1 036位半胱氨酸残基发生突变。运用生物信息学及分子生物学技术,通过两轮重组PCR,构建985位和1 036位氨基酸突变的BLM解旋酶多点突变基因,克隆到载体pET-28a中,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。分离纯化获得了高纯度(>95%)的双突变型BLM解旋酶,并对其进行了Western blotting鉴定。这些结果可为进一步研究BS的致病机制奠定基础。
- 张金彪许厚强骆衡许庆贺陈祥李坤
- 关键词：重组PCR基因克隆表达
- 溴化乙锭对布鲁姆综合症解旋酶生物学特性的影响被引量：1
- 2012年
- 目的研究溴化乙锭(EB)对BLM解旋酶的生物学特性的影响。方法应用荧光偏振技术研究EB对BLM解旋酶的DNA结合活性与解链活性的影响;应用自由磷检测技术研究EB对BLM解旋酶的ATPase活性的影响;应用紫外吸收光谱法研究EB对BLM解旋酶的构象的影响。结果EB可完全抑制BLM解旋酶的DNA结合活性,当双链DNA与单链DNA作为底物时,Ci值分别为(21.3±0.7)μmol.L-1和(3.3±0.3)μmol.L-1;可完全抑制BLM解旋酶的解链活性,Ci值为(9.0±0.3)μmol.L-1;对BLM解旋酶的ATPase活性有抑制作用,但差异无显著性;可改变BLM解旋酶的构象,最大吸收峰发生红移。结论 EB可以结合BLM解旋酶并改变其构象,抑制其与DNA的结合,从而抑制BLM解旋酶的生物学活性。
- 许庆贺许厚强骆衡陈祥张金彪李坤
- 关键词：溴化乙锭DNA结合活性ATPASE活性
