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SYBR GreenⅠ实时PCR检测甲型H1N1与季节性流感病毒方法的建立被引量：2: 2013年; 目的建立一种检测甲型H1N1、季节性H1N1、H3N2与乙型流感病毒的SYBR GreenⅠ实时荧光PCR方法。方法设计针对甲型H1N1、季节性H1N1、H3N2与乙型流感病毒HA基因的引物,分别进行SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR反应,同时进行熔解曲线和Tm值分析,并作灵敏度和重复性试验。结果该方法与H5、H7、H9亚型流感病毒及副流感病毒1、2、3型均无交叉反应。构建的荧光定量标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,扩增效率为:95.588%,检测灵敏度为101copies/反应体系,结果重现性好。成功地验证性检验了32份盲样标本。结论本研究建立的SYBR GreenⅠ实时荧光PCR方法敏感、不需荧光标记探针、成本低及高通量,能用于人类流感病毒的分型检测。; 李文悌孙菲王晓春; 关键词：甲型H1N1 SYBR

AT1R基因多态性与湖南汉族人群原发性高血压的关系被引量：3: 2011年; 目的探讨湖南地区汉族人群血管紧张素Ⅱ-1型受体(AT1R)基因A1166C多态性与原发性高血压(EH)的相关性。方法利用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)对湖南地区汉族EH患者和健康对照者各100例的AT1R/A1166C等位基因进行检测,统计分析两组间基因型和等位基因的频率分布。结果 EH组AT1R基因型频率分布为AA 66%(66/100)、AC 31%(31/100)、CC 3%(3/100),其中EH组AC基因型频率和C1166等位基因频率高于正常对照组(0.31 vs 0.14,0.19 vs 0.08,P<0.05),EH组AA基因型频率低于正常对照组(0.66 vs 0.88,P<0.05)。结论 AT1R基因A1166点突变等位基因C与湖南地区汉族人群患EH具有一定的关系,可能增加EH的遗传易感性。; 李文悌罗洁王晓春宋明胜; 关键词：受体多态性高血压

SYBR Green实时PCR检测甲型H1N1与季节性流感病毒方法的建立: 目的:建立一种检测甲型H1N1、季节性H1N1、H3N2和乙型流感病毒的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR法与多重PCR法，并将建立的方法进行初步临床应用。　　方法:1.设计针对甲型H1N1、季节性H1N1、H...; 李文悌; 关键词：实时PCR检测; 文献传递

医学检验本科分子诊断学实验教学方法改革的体会被引量：3: 2011年; 实验教学是医学教学体系中相当重要的组成部分,在培养学生创新与动手能力等方面有不可替代的作用。分子诊断学基本理论的建立依赖于实验观察,它是一门以实验为主的学科。实验教学在检验专业分子诊断学课程的教学中占有重要地位。高水平的实验教学要把培养学生的创新能力放在首位,给学生尽可能大的实验自由度,使其领会实验设计的思想,分析思考实验条件的改变对结果的影响,使学生的实验综合能力达到新的台阶。; 李文悌王晓春; 关键词：分子诊断学教学

SCNN1A基因多态性与土家族、苗族及汉族人群原发性高血压相关性的研究被引量：4: 2011年; 目的:探讨上皮细胞钠通道α亚基(SCNN1A)基因单核苷酸多态性位点rs2228576与湘西土家族、苗族和汉族人群原发性高血压(EH)的相关性。方法:用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术分析土家族(120例)、苗族(117例)和汉族(125例)人群EH患者(EH组)与正常人群[正常对照组(土家族119例、苗族125例、汉族122例)]SCNN1A等位基因频率分布状况。结果:土家族、苗族和汉族均存在3种AA、AG及GG基因型;土家族、苗族和汉族正常对照组基因型频率分别为(0.109,0.538,0.353;0.152,0.472,0.376;0.164,0.541,0.295);各族EH组与正常对照组基因型频率差异均无统计学意义(χ2=5.662,P>0.843);等位基因频率差异均无统计学意义(χ2=3.538,P>0.618)。结论:3个民族均存在SCNN1A基因rs2228576多态性位点,但该多态性位点与3个民族EH无明显相关性。; 向波王晓春周明欢张业军钟飞陈正英周卫华彭湘萍符自清李文悌; 关键词：原发性高血压单核苷酸多态性

隐血与蛋白对尿HIV-1抗体检测的影响: 2010年; 目的研究尿液中蛋白含量和隐血程度对尿液中HIV-1抗体检测结果的影响。方法平行采集受检者的血液与尿液标本,分别用血液和尿液酶联免疫吸附法检测HIV-1抗体,检测尿液HIV-1抗体结果为假阳性与真阴性的尿标本中免疫球蛋白、转铁蛋白、尿微量清蛋白与尿α1微球蛋白的含量,且检测其隐血情况。结果真阴性组与假阳性组尿液中各种相应的蛋白含量差异有显著性(P<0.001),假阳性组尿液中所含的蛋白均高于真阴性组相应的蛋白含量(P<0.001)。结论当尿液中蛋白含量高或存在隐血阳性时,用HIV-1型尿液抗体诊断试剂盒检测尿液HIV-1抗体易出现假阳性。; 李文悌王晓春; 关键词：HIV-1抗体酶联免疫吸附反应假阳性

分子技术在流感病毒诊断中的应用: 2011年; 流感病毒（influenza virus）属于正黏病毒科,根据病毒内部蛋白抗原性的不同分为甲（A）、乙（B）、丙（C）三型。根据病毒表面结构蛋白血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）抗原性的不同,又将A型流感分为不同的血清亚型,已发现有15种HA亚型（H1～H15）和9种NA亚型（N1-N9）。检测流感病毒的方法主要有：病毒分离培养、血清学诊断、抗原检测、核酸检测。病毒分离培养和血清学诊断耗时，敏感性差；抗原检测结果的特异性受抗体纯度影响较大，; 李勃孙菲李文悌王晓春; 关键词：流感病毒逆转录-聚合酶链反应

快速检测人新甲型H1N1、季节性和乙型流感病毒多重PCR方法的建立被引量：1: 2012年; 目的建立一种可以同时检测人类新甲型H1N1、季节性H1N1和H3N2亚型流感病毒及乙型流感病毒的多重PCR方法。方法根据以上4种流感病毒的特异性基因设计4对引物,建立可同时扩增出4个流感病毒特异性片段的多重PCR的方法。用人的GAPDH基因作为内参判断标本来源和实施质量控制的依据。并进行敏感性、特异性和盲样检测评价实验。结果该方法可同时扩增出流感病毒亚型的HA基因片段长度分别为106 bp(新甲型H1N1)、135 bp(季节性H1N1)、118 bp(季节性H3N2)、170 bp(乙型流感病毒)。该实验检测新甲型H1N1(A/colifornia/07/2009)的敏感性为102copies/反应。特异性实验结果显示每对引物只检测对应的病毒,32份盲样检测结果特异性好。结论该多重PCR方法可同时检测新甲型H1N1及季节性流感病毒,敏感性、特异性强,可用于人类流感病毒的鉴别分型检测。; 孙菲李文悌欧新华王晓春; 关键词：人流感多重PCR

荧光定量RT-PCR在检测流感病毒中的应用被引量：2: 2011年; 流感病毒（influenza virus）是一类具有高度传染性的呼吸道病毒,是线状单股负链RNA病毒,根据核蛋白和基质蛋白的抗原性,流感病毒可以分为甲（A）、乙（B）、丙（C）3种类型。甲型流感病毒基因经常发生突变,造成不同程度的季节性流感流行和流感大流行。在2009年首发于北美的新甲型H1N1病毒短时间内席卷全球,此病毒传染性极强,WHO在8月6日公布最新疫情,截至2010年8月1日,全球新甲型H1N1造成的死亡病例超过18449例。; 李文悌孙菲王晓春; 关键词：荧光定量RT-PCR 流感病毒甲型H1N1病毒病毒传染性甲型流感

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李文悌