李晶
- 作品数：2 被引量：5H指数：2
- 供职机构：浙江大学城市学院更多>>
- 发文基金：浙江省医药卫生科学研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 甲型副伤寒杆菌鞭毛蛋白H1a基因原核表达系统构建及其表达产物的免疫原性和保护作用被引量：4
- 2006年
- 目的构建甲型副伤寒杆菌(Salmonella paratyphi A)H1a基因原核表达系统,确定表达产物rH1a免疫原性和保护作用,检测甲型副伤寒杆菌临床菌株H1a基因携带和表达情况。方法采用高保真PCR从甲型副伤寒杆菌临床株JH01中扩增H1a基因,T-A克隆后测序,构建H1a基因原核表达系统pET32a-H1a-E．coli BL21DE3。采用SDS-PAGE和BioRad凝胶图象分析系统检查rH1a表达情况,Ni-NTA亲和层析法收集rH1a。采用Western blot鉴定其免疫反应性和免疫原性。建立PCR和ELISA检测98株甲型副伤寒杆菌临床菌株H1a基因携带和表达频率。观察rH1a对甲型副伤寒杆菌50001株感染小鼠的免疫保护作用。结果与报道的相关序列比较,所克隆的H1a基因核苷酸和氨基酸序列相似性均为99．59％。rH1a表达量为细菌总蛋白的60％左右。甲型副伤寒杆菌全菌抗血清能识别rH1a并与之结合。rH1a免疫家兔可产生抗体。100％(98／98)甲型副伤寒杆菌临床菌株均含有H1a基因并表达H1a。500μgrH1a灌喂或皮下注射免疫小鼠受甲型副伤寒杆菌50001株攻击后的存活率均为50．0％,若加入5μg rLTB,存活率分别上升至75．0％和66．7％。结论本研究成功地从甲型副伤寒杆菌临床菌株中构建了H1a基因高效原核表达系统。rH1a有良好的免疫原性和一定的免疫保护作用。甲型副伤寒杆菌临床菌株广泛存在H1a基因并高频率表达。
- 阮萍林晓骥李晶周晓辉严杰
- 关键词：甲型副伤寒杆菌原核表达免疫原性
- 甲型副伤寒杆菌侵袭蛋白(spaO)基因原核表达及免疫性和保护作用研究被引量：2
- 2006年
- 目的研究甲型副伤寒杆菌spaO基因重组表达产物rSpaO免疫性和保护作用,并了解甲型副伤寒杆菌临床菌株spaO基因携带和表达情况。方法扩增并克隆甲型副伤寒杆菌临床株 JH01 spaO基因,构建原核表达系统;采用SDS-PAGE分析rSpaO表达情况,Ni-NTA亲和层析法收集 rSpaO,采用Western blot鉴定其免疫反应性;采用PCR和ELISA检测98株甲型副伤寒杆菌临床菌株 spaO基因携带和表达频率;观察rSpaO对甲型副伤寒杆菌50001株感染小鼠的免疫保护作用。结果与报道的相关序列比较,克隆的spaO基因核苷酸和氨基酸序列同源性分别为99．45％-99．89％和 99．01％-100％;rSpaO表达量为细菌总蛋白的75％左右;甲型副伤寒杆菌全菌抗血清能识别rSpaO; rSpaO免疫家兔可产生抗体;94．9％(93／98)甲型副伤寒杆菌临床菌株含有spaO基因,91．4％(85／93) spaO+菌株表达SpaO。rSpaO灌喂或皮下注射免疫小鼠(500μg)受甲型副伤寒杆菌50001株攻击后的存活率分别为58．3％和50．0％;若加入5μg rLTB,存活率分别上升88．3％和75．0％。结论甲型副伤寒杆菌临床菌株有较高的spaO基因携带率和表达率;rSpaO有良好的免疫原性和一定的免疫保护作用,可作为甲型副伤寒杆菌基因工程疫苗的候选抗原。
- 毛亚飞林晓骥李晶阮萍周晓辉严杰
- 关键词：甲型副伤寒杆菌原核表达
