李红卫
- 作品数：34 被引量：325H指数：11
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- 发文基金：国家自然科学基金“九五”国家科技攻关计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生化学工程更多>>
- 猪瘟病毒保护性抗原E2基因的克隆、序列分析及在大肠杆菌中的表达
- 1997年
- 本研究首次用RT-PCR技术分两段扩增了我国猪瘟病毒(HCV)标准强毒石门株的主要保护性抗原E2基因,并将其进行了克隆和序列分析。将这两个片段连接成完全的E2基因,并将其克隆到原核表达载体pBV220和pET-28a(+)中,重组表达载体转化、诱导的受体菌经Western印迹和直接ELISA检测能够表达E2抗原。 用RT-PCR技术对从我国多个地区收集的猪瘟病料进行检测,结果从吉林、长春、南京、重庆、昆明、佛山病料中扩增出了HCV
- 李红卫涂长春金扩世王新平吕宗吉余兴龙殷震
- 关键词：猪瘟病毒肠杆菌E2基因氨基酸序列野毒株
- 牛病毒性腹泻病毒P125基因重要区的比较与分析
- 1997年
- 牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)为黄病毒科瘟病毒属中的成员。根据在细胞培养物中是否产生病变,可将BVDV分为致细胞病变(CP)
- 王新平涂长春李红卫宣华朱维正费恩阁殷震
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒基因重排基因缺失BVDV细胞培养物
- 猪瘟病毒cDNA片段的合成及克隆
- 1995年
- 以猪瘟病毒石门系毒株常规感染 PK15细胞48小时后,去上清,直接用异硫氰酸胍一步法提取细胞总 RNA。根据猪瘟病毒Alfort 株的基因组序列化学合成了8条引物,用3′端引物及提取的总 RNA 进行反转录合成第一链 cDNA,再以此单链 cDNA 为模板,用 PCR 法扩增猪瘟病毒 cDNA 片段,2%琼脂糖凝胶电泳鉴定,结果证明所扩增片段的长度与根据 Alfort 株基因组序列推测的长度相符,依次为693bp,629bp,346bp,285bp,120bp。用限制性内切酶分析进一步证明了所扩增片段的正确性。
- 李红卫涂长春章金钢金扩世扈荣良刘士英殷震
- 关键词：猪瘟病毒扩增片段电泳鉴定克隆琼脂糖凝胶
- 鸡减蛋综合征病毒DNA的基因文库构建和酶切位点分析
- 1997年
- 腺病毒载体已经成为基因工程疫苗及癌症、遗传病基因治疗的重要工具。腺病毒可分为哺乳动物腺病毒和禽腺病毒,禽腺病毒包括20多个血清型,分别归属于三个群:Ⅰ群为传统的禽腺病毒(FAV),Ⅱ群包括火鸡出血性肠炎病毒(HEV)等,Ⅲ群禽腺病毒为减蛋综合征病毒(EDSV)。这些病毒广泛地存在于多种禽类的呼吸道、消化道,大多呈显性或不显性感染。以禽类腺病毒为载体表达禽类重要病原的保护性抗原基因,构建多价(联)活载体基因工程疫苗。
- 章金钢胡敬东李红卫涂长春向华殷震
- 关键词：鸡减蛋综合征酶切位点病毒DNA基因工程疫苗减蛋综合征病毒
- 减蛋综合征病毒基因组Hind Ⅲ酶切片段的克隆及酶谱分析被引量：10
- 1998年
- 以ｐＵＣ１９质粒为载体，采用鸟枪法克隆减蛋综合征病毒（ＥＤＳＶ）基因组的ＨｉｎｄⅢ酶切片段，用Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ－ｄＵＴＰ标记的ＥＤＳＶＨｉｎｄⅢ片段探针打点杂交，证实１３个克隆插入了ＥＤＳＶＤＮＡ的ＨｉｎｄⅢ片段。酶切分析结果表明，克隆到了Ａ、Ｂ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｊ７个不同大小的片段，选取含有上述插入片段的、具有代表性的７个相应质粒ｐＵＨＡ、ｐＵＨＢ、ｐＵＨＦ、ｐＵＨＧ、ｐＵＨＨ、ｐＵＨＩ、ｐＵＨＪ，在分别以ＢａｍＨＩ、ＢｇｌⅡ、ＣｌａⅠ、ＥｃｏＲＩ、ＥｃｏＲＶ、ＰｓｔⅠ、ＳｍａⅠ、ＸｂａⅠ、ＸｈｏⅠ单酶切的基础上，经适当组合的双酶切，得出各片段存在的单一酶切位点为Ａ：ＢｇｌⅡ、ＥｃｏＲＶ、ＳｍａⅠ、ＸｈｏⅠ位点；Ｂ：ＢｇｌⅡ、ＳｍａⅠ位点；Ｆ：ＢｇｌⅡ、ＥｃｏＲＶ位点；Ｇ：ＰｓｔⅠ位点；Ｈ：０；Ｉ：ＰｓｔⅠ位点；Ｊ：ＥｃｏＲＶ、ＸｈｏⅠ位点。为进一步筛选病毒复制非必需区，构建腺病毒表达载体，以及研究禽类腺病毒的分子生物学特性打下了基础。
- 胡敬东章金钢李红卫金扩世涂长春殷震
- 关键词：减蛋综合征病毒克隆
- 减蛋综合征病毒33K蛋白基因克隆及结构分析被引量：6
- 1999年
- 纯化的减蛋综合征病毒（ＥＤＳＶ）ＤＮＡ经ＨｉｎｄⅢ水解、０．８％琼脂糖电泳后，回收各ＤＮＡ条带并克隆至ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＫＳ载体，建立了ＥＤＳＶ基因文库，对３３Ｋ蛋白基因进行了分析。本研究证实，ＥＤＳＶ３３Ｋ蛋白基因含有２个外显子，与羊腺病毒（ＯＡＶ）３３Ｋ蛋白比较，Ｎ端编码产物的同源性为３０．８％，Ｃ端的为６０％。用ＲＴ－ＰＣＲ扩增３３ＫｍＲＮＡ和ｃＤＮＡ克隆及序列分析证实，ＥＤＳＶ３３Ｋ蛋白含有８２碱基（ｎｔ）的内含子，去掉内含子３３Ｋ蛋白基因能形成完整的ＯＲＦ，其编码产物由１７７氨基酸（ａａ）组成，推测分子质量为２．０６×１０４，与人５型腺病毒和ＯＡＶ的同源性分别为２８．１％和４４．７％。
- 李茂祥李红卫金奇章金刚金奇章金刚侯云德余兴龙
- 关键词：减蛋综合征病毒禽腺病毒克隆内含子
- 鹿狂犬病病毒G基因主要功能区的序列分析被引量：4
- 1997年
- 通过反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增出了中国鹿狂犬病野毒株（８２０２株）糖蛋白（Ｇ）基因膜外主要功能区的２个片段，共约８００个ｂｐ（３７０～１１７９），含有可以诱导中和抗体的２个抗原决定簇的基因片段和决定毒力及与神经细胞受体结合部位的基因片段。通过平端连接将２个片段克隆到ｐＵＣ１８的ＳｍａⅠ位点，采用Ｓａｎｇｅｒ双脱氧终止法测定ｃＤＮＡ片段的核苷酸序列，并推导出其氨基酸序列。将这一序列与国内外已发表的１１株狂犬病病毒的相应序列输入计算机进行比较分析，结果表明８２０２株主要功能区与上述１１个毒株核苷酸序列的同源性在７３．０％～９６．４％之间，氨基酸序列的同源性在８６．４％～９４．４％之间，８２０２株与中国疫苗株无论是核苷酸序列还是氨基酸序列的同源性均最高，而与中国街毒（ＣＤＸ－１）的核苷酸序列同源性最低，与ＣＶＳ株的氨基酸序列的同源性最低。
- 钱爱东侯世宽张茂林李红卫涂长春侯安祖殷震
- 关键词：狂犬病病毒糖蛋白基因
- 不同转染介质对狂犬病病毒糖蛋白基因免疫的效应被引量：7
- 2000年
- 将狂犬病病毒糖蛋白 ( RGP) c DNA Bgl 片段 ( 1 .6 7kb)分别克隆进质粒 p GFP-Cl、p SV2 -dhfr和pc DNA3 ,构建了重组质粒 p GFP-C1 -RGP、p SV2 -RGP和 pc DNA3 -RGP,通过脂质体和聚乙烯亚胺 ( PEI)包裹后分别转染 BHK-2 1细胞和乳鼠脑内接种 ,3种重组质粒均能表达出 RGP。表达水平高低依次为 p GFP-C1 -RGP>pc DNA3 -RGP>p SV2 -RGP。 3种重组质粒分别以全裸质粒、质粒 -脂质体、质粒 -PEI形式 ,经骨骼肌免疫小鼠 ,间接 ELISA检测。结果显示 ,免疫鼠血清中特异性抗体水平明显高于对照组 ;80 %免疫小鼠能抵抗狂犬病病毒强毒的攻击。全裸质粒免疫诱生的抗体水平同其剂量相关 ;而以 PEI或脂质体作为转染介质、质粒接种量超过 2 0μg时 ,诱生抗体水平不再随质粒剂量增大而显著变化。质粒免疫后 1 50 d采用 PCR仍然能从注射部位检测到
- 张茂林扈荣良余兴龙涂长春钱爱东荣爱红李红卫殷震
- 关键词：狂犬病病毒糖蛋白基因免疫
- 猪瘟兔化弱毒囊膜糖蛋白EI基因的扩增与克隆
- 1997年
- 本试验直接从细胞培养液中提取猪瘟兔化弱毒（ＨＣＬＶ）ＲＮＡ，并根据猪瘟病毒（ＨＣＶ）Ａｌｆｏｒｔ株和Ｂｒｅｓｃｉａ株的核苷酸序列，将ＥＩ基因分两段，设计并合成了４条引物。采用反转录－多聚酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ），成功地扩增出了ＨＣＬＶ保护性囊膜糖蛋白ＥＩ基因。以ｐＧＥＭ－Ｔ和ｐＵＣ１９为载体，将ＥＩ基因的两个片段分别进行克隆并转化到大肠杆菌ＪＭ１０１。经过分析鉴定。
- 金扩世李红卫章金刚王新平涂长春殷震
- 关键词：猪瘟兔化弱毒疫苗
- 我国部分地区猪瘟病毒流行株的基因差异被引量：34
- 2000年
- 采用 RT-PCR方法 ,从我国 1 0个省、市、自治区收集的 2 3个猪瘟病毒 ( CSFV)流行毒株中 ,扩增了CSFV E2基因中主要抗原位点编码区。对各扩增片段进行了序列测定 ,通过计算机分析构建了系统发生树 ,并确定了它们间的遗传相关性。结果表明 ,2 3个流行毒株中的 1 8株属基因 群 ,占 78.2 6%;另外 5个流行株与传统石门强毒、兔化弱毒株属基因 群 ,占 2 1 .74 %。两群间测序区的核酸同源性只有 78.90 %。此外 ,根据序列差异程度 ,将基因 群流行株分为 3个亚群 ,各基因群 CSFV在地域分布上未发现有明显的特征性。本研究初步揭示了我国较大范围内流行的 CSFV毒株与传统的石门强毒和疫苗用兔化弱毒在抗原基因上存在较大的差异 。
- 吕宗吉李红卫涂长春余兴龙吴健敏李月红殷震
- 关键词：猪瘟病毒RT-PCR基因差异疫苗株流行株
