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α粒子辐射诱导人肺鳞癌裸鼠转移模型的建立: 2004年; 目的　建立α粒子辐射诱导人肺鳞癌裸鼠转移模型。方法　α粒子辐射诱导人肺鳞癌细胞系BERP35T4原代接种裸鼠皮下 ,后采用组织块接种的方法 ,在鼠间连续传代 3次 ,计算原代成瘤率及传代成活率 ,并观察肿瘤的转移情况 ,病理切片和免疫组织化学鉴定肿瘤的性质和来源。结果 (1)α粒子辐射诱导人肺鳞癌细胞系BERP35T4原代接种成瘤率为 4 4 4 % (4 9) ;(2 )原代肿瘤的体表转移率与肺转移率均为 2 5 % (1 4 ) ;(3)病理切片鉴定为低分化鳞状上皮细胞癌 ;(4)免疫组织化学显示CK3和EMA表达阳性。结论　采用组织块接种的方法 ,在α粒子辐射诱导人肺鳞癌细胞系BERP35T4的基础上 ,经过裸鼠体内连续传代 3次 ,成功地建立了人类肺癌裸鼠转移模型。; 胡迎春项晓琼徐勤枝霍艳英李邦印段瑞峰李刚张开泰吴德昌; 关键词：Α粒子肺鳞癌免疫组织化学

甲硫腺苷磷酸化酶在非小细胞肺癌中转录表达被引量：1: 2004年; 目的　探讨甲硫腺苷磷酸化酶 (MTAP)及其连锁基因 p14 ,p15和p16在非小细胞肺癌中的转录表达变化情况。方法　采用RT PCR方法检测 15例新鲜肺癌标本及相应癌旁组织中MTAP及其边锁基因 p14、p15和p16mRNA的表达情况。结果　MTAP在 73 3%的肿瘤标本中不表达或转录水平降低 5倍以上 ,而MTAP在癌旁对照组织中的表达率却高达 93 3% ;此外 ,MTAP在肺腺癌和鳞癌中的低表达现象无显著性差异 ,但在中 /低分化肺癌中低表在显著高于高于分化癌。对 7例标本分析表明 ,1例P15基因在正常组织及癌瘤中都高水平表达 ,1例均不表达 ,5例在癌标本中基本不表达 ,而在正常组织中表达 ;而 p14和p16正常组织中转录表达水平很低 ,而在配对的 7例肺癌组织中却分别有 3项高表达。结论　MTPA基因低表达或丢失可能与肺癌的恶性程度密切相关 ,MTAP的缺失可能独立于 p16之外 ,提示MTAP的低表达或缺失在肿瘤生物学中有其功基础的基础。; 戴为民李邦印于长海初向阳张开泰; 关键词：非小细胞肺癌基因表达 RT-PCR

亚细胞定位及信号转导检测技术在hrnt-1基因功能研究中的应用: 2002年; 目的 :hrnt_1是本实验室克隆的全长基因 ,GenBankNr库中编号为AF2 2 3393。实验证实该基因与支气管上皮细胞恶性转化相关 ,但具体的生物学功能尚不清楚。本研究旨在建立一种功能研究的方法 ,为探索hrnt_1在细胞恶性转化过程中的生物学功能提供线索。方法 :构建hrnt_1与pEGFP荧光素表达载体 ,通过融合蛋白的表达 ,观察hrnt_1基因产物在细胞中的位置分布 ;利用信号通路检测技术 ,观测hrnt_1对细胞内信号转导通路的影响。结果 :hrnt_1产物主要分布在细胞核中 ,对Myc Max,GR ,NFκB ,EIK_1 STAT等核转录因子活性有上调作用。结论 :细胞定位与信号通路检测技术相结合的方法简便、快速 ,适用于新的疾病基因功能研究。; 谢玲张开泰项晓琼胡迎春范保星霍艳英李邦印段瑞峰吴德昌; 关键词：亚细胞定位信号转导基因表达

甲硫腺苷磷酸化酶在人支气管上皮细胞辐射致癌模型中的表达变化研究: 2007年; 目的研究甲硫腺苷磷酸化酶(Methylthioadenosine Phosphoylase,MTAP)在人支气管上皮细胞(BEP2D)辐射致癌恶性转化前后的表达水平变化。方法培养永生化细胞BEP2D和恶性转化细胞BERP35T-2;制备细胞总蛋白质,进行双相电泳和质谱分析;选择有表达差异的蛋白质点MTAP,在细胞模型中进行Northern Blot和Western blot分析。结果双相电泳发现MTAP在恶性转化细胞BERP35T-2中基本没有表达;Northern Blot和Western Blot分析表明MTAP基因在BEP2D永生化细胞中转录和翻译表达水平均很高,而在BERP35T-2恶转细胞中表达极低;发现MTAP基因在两种细胞中的表达差别在10倍以上。结论MTAP的低表达与辐射致肺癌的发生有密切关系,是BEP2D受到α粒子辐射后基因表达谱的主要改变之一。; 李邦印张开泰霍艳英胡迎春徐勤枝应万涛吴德昌; 关键词：甲硫腺苷磷酸化酶 BEP2D Α粒子

在BEP2D细胞恶性转化过程中TGF-β1对Smad7表达的调节被引量：20: 2002年; 背景与目的:细胞逃避转化生长因子-β(TGF-β)诱导的对细胞生长、增殖的抑制是许多肿瘤发生的一个重要机制。Smad7是TGF-β信号转导通路的抑制型Smads,它可阻断TGF-β信号在胞浆内的传导,其紊乱是TGF-β信号转导通路紊乱的机制之一。本研究旨在分析在细胞恶性转化过程中,Smad7基因表达是否发生紊乱,TGF-β1对Smad7基因的调控功能有无发生变化,以探索细胞发生恶性转化的原因。方法:培养BEP2D细胞及BERP35T-2细胞,于收获前60min和90min加入不同剂量的TGF-β1,提取细胞总RNA,分别以未加TGF-β1的细胞组作为对照,用Northernblot杂交比较两组细胞Smad7mRNA表达的差异以及细胞对TGF-β1细胞因子刺激的反应性。同时提取BEP2D及BERP35T-2细胞蛋白,用Westernblot方法比较两组细胞内源性TGF-β1表达的差异。结果:Smad7mRNA表达水平恶性转化细胞高于永生化细胞;加了TGF-β1细胞因子后,BEP2D细胞Smad7mRNA表达增高,BERP35T-2细胞表达水平改变不明显。而内源性TGF-β1的表达水平,BERP35T-2细胞稍高于BEP2D细胞。结论:Smad7在辐射致肺癌细胞系中的过表达及对TGF-β1应答的降低可能是辐射诱发肺癌发生的机制之一。; 霍艳英张开泰李邦印段瑞峰范保星项晓琼胡迎春谢玲吴德昌; 关键词：BEP2D细胞恶性转化 TGF-Β1 SMAD7

支气管上皮细胞辐射致癌模型中MTAP表达的调控方式研究: 2007年; 目的从基因组水平探讨BEP2D辐射致癌模型中MTAP基因表达降低的原因。方法培养和传代BEP2D和BERP35T-2细胞,提取基因组DNA;设计针对MTAP基因8个外显子的引物,PCR扩增方式观察MTAP有无纯合性缺失,并对PCR产物进行SSCP分析;选择9p21.3区的三个STS位点,PCR扩增分析该区域杂合性缺失的状况;设计针对MTAP基因CpG岛的MSP(Methylation-specified PCR甲基化特异性)引物,对基因组DNA进行硫化处理和纯化,PCR扩增以研究MTAP基因区域的杂合性缺失现象。结果在细胞中MTAP基因没有发生纯合性缺失和点突变,启动子区域亦没有甲基化调节现象;BERP35T-2细胞有杂合型缺失(Loss of Heterodeletion,LOH)现象,发生位置在RH99034。结论在致癌模型中MTAP基因的表达降低或丧失是因为MTAP所在的基因组区域发生了杂合性缺失,提示9p21.3区域的杂合性缺失可能是肺癌中发生的高频率事件。; 李邦印张开泰霍艳英胡迎春徐勤枝周平坤吴德昌; 关键词：BEP2D 杂合性缺失 MTAP

甲硫腺苷磷酸化酶与肿瘤关系的研究进展: 2003年; 李邦印张开泰吴德昌; 关键词：甲硫腺苷磷酸化酶肿瘤遗传学生物学特性抑癌基因

Smad7基因在细胞恶性转化过程中的促增殖作用被引量：9: 2003年; 用基因转染的方法,建立稳定表达Smad7基因的永生化及恶性化人支气管上皮细胞系,用MTT法检测Smad7基因过表达对细胞生长、增殖的影响及对TGF β1介导的生长抑制效应的影响.结果表明在永生化和恶性化人支气管上皮细胞系BEP2D和BERP35T2中各筛选到2个稳定表达SMAD7蛋白的克隆,命名为BS7 1、BS7 2(来源于BEP2D),RS7 1、RS7 2(来源于BERP35T2).这些细胞系细胞的生长、增殖能力均强于转染空载体的对照细胞系,同时TGF β1对这些细胞系的生长抑制能力明显减弱.提示Smad7基因通过降低细胞对TGF β的应答来促进细胞的生长、增殖能力.; 霍艳英张开泰项晓琼李邦印徐勤枝段瑞峰胡迎春李刚吴德昌; 关键词：SMAD7基因细胞恶性转化促增殖作用真核表达

结核分枝杆菌19-kDa蛋白在大肠杆菌中的表达: 2006年; 目的通过基因工程技术获得重组结核分枝杆菌19-kDa蛋白。方法应用PCR技术扩增结核分枝杆菌H37 Rv19-kDa DNA序列；以质粒pET24b为表达载体，构建19-kDa重组质粒，然后转化大肠杆菌BL21（DE3）；在异丙基硫代-13-D-半乳糖苷（IPTG）诱导下，分别对不同诱导时间的表达产物进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE），凝胶经考马斯亮蓝染色检测蛋白。结果重组质粒pET24b-19-kDa测序表明与报道的序列相同。它在大肠杆菌BL21（DE3）细胞内以可溶性形式表达。不同IPTG诱导时间实验表明重组结核分枝杆菌19-kDa蛋白诱导3～4h重组蛋白在大肠杆菌中的表达量最高。结论 pET24b-19-kDa大肠杆菌工程株可高表达结核分枝杆菌重组19-kDa蛋白。; 韩慧新李邦印吴雪琼张灵霞; 关键词：结核分枝杆菌克隆基因表达

Smad7基因过表达的促增殖作用机制探讨被引量：8: 2004年; 目的　研究Smad7过表达使人支气管上皮细胞系增殖能力增强的机制。方法　用Smad7真核表达载体PCISmad7.neo同携带有报告基因碱性磷酸酶的c myc顺式增强子元件pMyc SEAP共转染 ,检测Smad7基因对增殖信号通路的影响。用RT PCR方法 ,检测稳定转染Smad7基因前后永生化及恶性化的人支气管上皮细胞系BEP2D和BERP35T2细胞内c myc、p15、p2 1表达水平的变化 ,调查Smad7基因对TGF β介导的抗增殖基因反应的调控。结果　报告基因检测结果表明 ,Smad7基因可使参与增殖信号通路的c myc顺式增强子元件活性增强。RT PCR结果表明 ,在稳定转染Smad7基因的细胞中 ,c myc表达上调 ,p15表达降低 ,对TGF β刺激的应答丧失 ,p2 1表达降低。结论Smad7基因可通过调控TGF β介导的抗增殖基因应答来影响细胞的生长。; 霍艳英张开泰李邦印徐勤枝段瑞峰胡迎春项晓琼李刚吴德昌; 关键词：SMAD7基因 P21表达人支气管上皮细胞系稳定转染

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