杨晓娇
- 作品数：12 被引量：9H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目上海市科技兴农重点攻关项目国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 四种隐孢子虫半胱氨酸蛋白酶Cryptopain-1基因的克隆和序列分析被引量：1
- 2014年
- 为克隆不同种隐孢子虫(Cryptosporidium spp.)的半胱氨酸蛋白酶Cryptopain-1基因,分析其核苷酸与编码氨基酸序列的变异情况,根据GenBank上公布的微小隐孢子虫(C.parvum)Cryptopain-1基因序列设计合成引物,用PCR技术从不同种隐孢子虫基因组DNA中扩增Cryptopain-1基因,并将其克隆至pZeroBack/blunt载体,阳性克隆经PCR鉴定正确后测序,与微小隐孢子虫Cryptopain-1基因进行序列同源性比对,并进行系统进化分析。结果显示,本研究成功从泰泽隐孢子虫(C.tyzzeri)、火鸡隐孢子虫(C.meleagridis)、兔隐孢子虫(C.cuniculus)基因组DNA中扩增出Cryptopain-1基因。与微小隐孢子虫Cryptopain-1基因比较,泰泽隐孢子虫、火鸡隐孢子虫、兔隐孢子虫Cryptopain-1基因核苷酸序列相似性分别为98.67%、94.53%、98.34%,演绎的氨基酸序列相似性分别为99.00%、96.51%、99.00%。研究结果为利用Cryptopain-1基因进行隐孢子虫的代谢、致病机理等研究奠定了基础。
- 王晓娟米荣升周鹏黄燕王向佩杨晓娇石凯刘宇轩雷晓思陈兆国赵权
- 关键词：隐孢子虫克隆
- 猪附红细胞体MSG1基因的克隆及序列分析
- 为研究猪附红细胞体(M.suis) MSG1基因的遗传变异特点,从上海地区3个屠宰场采集自然感染附红细胞体的猪血液,提取基因组DNA,根据GenBank已经报道的猪附红细胞体MSG1基因序列(登录号AM407404.1)...
- 曹薇陈兆国周鹏米荣升黄燕秦培兰杨晓娇王向佩王晓娟石凯
- 微小隐孢子虫类钙调蛋白基因真核表达质粒的构建及在Hela细胞中的表达
- Ca作为一种重要的第二信使,可引起细胞内多种特异性的反应应答。在顶复门原虫中,钙离子浓度的变化影响着它的几种关键功能,比如入侵宿主细胞、在宿主体内移行和发育。Ca要将信号传递下去,其下游的感受器是极其重要的。与其他真核生...
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- 文献传递
- 小附红细胞体mpg1基因的克隆及序列分析
- 2014年
- 根据猪附红细胞体3-磷酸甘油醛脱氢酶样蛋白1基因（msgl）序列设计引物，对上海地区分离的小附红细胞体阳性猪全血DNA进行PCR扩增，获得小附红细胞体3-磷酸甘油醛脱氢酶样蛋白1基因（mpgl）并进行测序和分析，研究其遗传变异特点。结果显示，共获得了11条小附红细胞体mpgl基因序列，序列长度均为1011bp。同源性分析显示，所获得的1l条小附红细胞体mpgl基因序列之间的相似性为96．8％～99．9％，预测氨基酸序列的相似性在97．9％～100％之间；与GenBank中公布的猪附红细胞体msgl基因核苷酸序列相似性在96．6％～98．2％之间，氨基酸序列的相似性为98．2％～99．1％。系统进化分析表明，msgl基因与mpgl基因共同构成每个聚簇。
- 曹薇周鹏米荣升黄燕秦培兰杨晓娇王向佩王晓娟石凯陈兆国
- 关键词：克隆
- 微小隐孢子虫类钙调蛋白基因的克隆与原核表达
- 2015年
- 为了对微小隐孢子虫(C.parvum)类钙调蛋白(CML)基因进行原核表达,分析重组表达蛋白的反应原性。以C.parvum卵囊cDNA为模板,用PCR方法扩增得到C.parvum CML基因。将CML基因连接到克隆载体pMD18-T,获得重组质粒pMD-CML,经限制性内切酶BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后,连接到经相同内切酶酶切的表达载体pGEX-6p-1上,构建重组表达质粒,转化到大肠埃希菌BL21(DE3)中进行诱导表达。利用GST亲和树脂法纯化重组表达蛋白,对纯化的重组蛋白进行Western blot分析。结果表明,成功构建了重组原核表达质粒pGEX-CML,重组质粒转化菌经IPTG诱导后成功地表达出了分子质量约为51ku的重组蛋白rCML,纯化的蛋白rCML能与感染兔隐孢子虫(C.cuniculus)的兔血清发生特异性反应,具有很好的反应原性。
- 杨晓娇周鹏米荣升黄燕石凯王晓娟王向佩刘宇轩雷晓思陈兆国
- 关键词：微小隐孢子虫克隆原核表达
- 小附红细胞体mpg1基因的克隆及序列分析
- 根据猪附红细胞体(Mycoplasma suis)3：磷酸甘油醛脱氢酶样蛋白1基因(msgl)序列设计引物，对上海地区分离的小附红细胞体(M.Parvum)阳性猪全血DNA进行PCR扩增，获得小附红细胞体3：磷酸甘油醛脱...
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- 关键词：克隆
- 猪附红细胞体MSG1基因的克隆及序列分析
- 为研究猪附红细胞体(M.Suis)MSGl基因的遗传变异特点,从上海地区3个屠宰场采集自然感染附红细胞体的猪血液,提取基因组DNA,根据GenBank已经报道的猪附红细胞体MSG1基因序列(登录号A-M407404.1)...
- 曹薇陈兆国周鹏米荣升黄燕秦培兰杨晓娇王向佩王晓娟石凯
- 关键词：猪附红细胞体克隆
- 猪附红细胞体a1基因的克隆及序列分析被引量：1
- 2014年
- 为研究猪附红细胞体DnaK样蛋白HspA1编码基因a1的遗传变异规律,根据GenBank上登录的猪附红细胞体a1基因核苷酸序列(登录号AM265536)设计合成1对引物,从上海市3个屠宰场采集自然感染猪附红细胞体的猪血液,提取基因组DNA作为模板,进行a1基因部分序列的PCR扩增、克隆、序列测定及生物信息学分析。结果显示,共获得了41条猪附红细胞体a1基因片段序列,序列长度均为1 657bp;同源性分析显示,它们与GenBank中登录的猪附红细胞体a1基因核苷酸序列的相似性在97.7%~99.9%之间,氨基酸序列的相似性在99.1%~99.8%之间。系统进化分析表明,多数上海市猪附红细胞体分离株的a1基因与GenBank中登录的德国54/96分离株a1基因序列在同一个聚簇上。
- 王向佩周鹏沈莉萍曹薇米荣升黄燕王晓娟杨晓娇石凯刘宇轩雷晓思陈兆国赵权
- 关键词：猪附红细胞体A1基因克隆
- 微小隐孢子虫P23基因在毕赤酵母中的表达及初步应用
- 2012年
- 为将微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)P23基因在巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)系统中进行表达,利用表达蛋白初步建立隐孢子虫病间接ELISA诊断技术,设计引物从微小隐孢子虫基因组DNA中扩增P23基因序列,构建pPIC9K-P23重组质粒,在毕赤酵母中进行表达,用阴离子交换层析柱进行纯化。以重组P23纯化蛋白为抗原建立间接ELISA检测方法,对现场采集的猪血清样品进行检测。SDS-PAGE显示所表达的蛋白大小约为23 kDa。Western blot检测表明该蛋白能与兔抗P23蛋白血清特异性结合。用建立的间接ELISA技术对186份猪血清样品进行检测,阳性率为83.3%。本研究获得了真核表达的P23重组蛋白,初步建立了微小隐孢子虫病间接ELISA诊断技术,为隐孢子虫病的诊断和流行病学调查打下了基础。
- 黄燕米荣升周鹏曹薇杨晓娇王向佩王晓娟石凯陈兆国
- 关键词：微小隐孢子虫巴斯德毕赤酵母真核表达
- 猪附红细胞体MSG1基因的克隆及序列分析被引量：2
- 2013年
- 为研究猪附红细胞体MSG1基因的遗传变异特点,从上海地区3个屠宰场采集自然感染附红细胞体的猪血液,提取基因组DNA,根据GenBank已经发表的猪附红细胞体MSG1基因序列(登录号AM407404.1),设计引物进行PCR扩增,将扩增产物连接到pMD18-T载体上,进行序列测定和分析。结果共获得了82条猪附红细胞体MSG1基因序列,序列长度为1 011bp,共编码336个氨基酸。同源性分析显示与GenBank中已经发表的猪附红细胞体MSG1基因核苷酸序列相似性为96.5%～98.3%,氨基酸的相似性为97.9%～99.1%。MSG1基因核苷酸序列的系统进化分析表明,上海地区猪附红细胞体分离株与GenBank登录的德国54/96分离株序列的亲缘关系较远。
- 曹薇周鹏米荣升黄燕秦培兰杨晓娇王向佩王晓娟石凯陈兆国
- 关键词：猪附红细胞体克隆
