周鹏
- 作品数：44 被引量：27H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目上海市科技兴农重点攻关项目国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学化学工程更多>>
- 微小隐孢子虫类钙调蛋白基因真核表达质粒的构建及在Hela细胞中的表达
- Ca2+作为一种重要的第二信使,可引起细胞内多种特异性的反应应答.在顶复门原虫中,钙离子浓度的变化影响着它的几种关键功能,比如入侵宿主细胞、在宿主体内移行和发育.Ca2+要将信号传递下去,其下游的感受器是极其重要的.与其...
- 杨晓娇周鹏米荣升黄燕石凯王晓娟王向佩刘宇轩雷晓思陈兆国
- 隐孢子虫鼠基因型CP15基因真核表达质粒的构建及在Hela细胞中的表达被引量：2
- 2011年
- 为了构建隐孢子虫鼠基因型CP15基因的重组真核表达质粒,检测其重组质粒在Hela细胞中的表达。采用PCR方法,从pMD18-T-CP15菌液中扩增了CP15及含寡聚脱氧核苷酸(CpG-ODN)的CP15基因,酶切测序鉴定;将该基因亚克隆至pVAX1载体中,用脂质体介导的方法转染Hela细胞,RT-PCR法、间接免疫荧光法和Western-blot法检测表达蛋白的生物学活性。结果显示,扩增了约360 bp和380 bp的隐孢子虫鼠基因型CP15和含CpG-ODN的CP15基因,酶切测序鉴定成功构建了pVAX1-CP15和含有CpG-ODN的重组真核表达质粒pVAX1-C-CP15。转染Hela细胞后,用RT-PCR法检测到外源基因有效的转录,用间接免疫荧光、SDS-PAGE和Western-blot法检测到外源基因的有效表达。结果表明,构建的重组真核表达质粒能够在Hela细胞中成功转录和表达,并且表达产物具有良好的免疫活性。这为下一步深入研制具有高保护性的隐孢子虫核酸疫苗奠定了基础。
- 苏庆美何生虎米荣升张国恩黄燕周鹏秦培兰呼高伟陈兆国
- 关键词：真核表达质粒HELA细胞
- 微小隐孢子虫CP15-P23-CP15/60基因的融合表达及抗血清的制备
- 2012年
- 以微小隐孢子虫基因组DNA为模板,PCR扩增获得子孢子表面抗原CP15、P23和CP15/60基因。利用重叠延伸PCR(SOE PCR)将该3段基因片段串联在一起,各基因片段之间引入柔性氨基酸接头(GGGGS)编码基因。将串联基因克隆到原核表达载体pET-28a(+)上,构建重组表达载体,转化到大肠埃希菌BL21(DE3)中进行诱导表达,将纯化的重组蛋白免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体。结果表明,获得了CP15-P23-CP15/60融合基因,并在大肠埃希菌中高效表达,Western blot显示重组蛋白能被牛抗微小隐孢子虫阳性血清识别,制备的多克隆抗体能被重组蛋白特异性识别,表明获得的重组蛋白具有较好的抗原性。
- 秦培兰米荣升黄燕周鹏张国恩苏庆美呼高伟曹薇陈兆国
- 关键词：微小隐孢子虫原核表达重叠延伸PCR
- 鉴别猪源附红细胞体种类的试剂盒、方法及其应用
- 本发明公开一种鉴别猪源附红细胞体种类的试剂盒，该试剂盒包含：用于扩增SEQ？ID？NO:1或SEQ？ID？NO:2所示猪源附红细胞体16S？rRNA基因序列的引物对，以及限制性内切酶Sca？Ⅰ或Ssp？Ⅰ。本发明基于16...
- 陈兆国王向佩周鹏米荣升黄燕
- 文献传递
- 猪附红细胞体a1基因的克隆及序列分析
- 猪附红细胞体(Mycoplasma suis)DnaK样蛋白热休克蛋白A1(heat shock proteins A1,HspA1)定位在猪附红细胞体胞浆及胞膜上,具有表面可接触性(surface accessibil...
- 王向佩周鹏沈莉萍曹薇米荣升黄燕王晓娟杨晓娇石凯刘宇轩雷晓思陈兆国赵权
- 猪源附红细胞体rnpB基因的克隆与序列比较
- RNA酶P RNA（RNase P RNA,rnpB）基因在微生物中是编码单一RNA的内切核糖核酸酶P,相比16S rRNA序列,rnpB基因具有较高的核苷酸变异率,更适合用于分类单元相近微生物之间的系统发育分析。为了解...
- 王向佩周鹏米荣升沈莉萍黄燕王晓娟杨晓娇石凯刘宇轩雷晓思陈兆国赵权
- 文献传递
- 小附红细胞体mpg1基因的克隆及序列分析
- 根据猪附红细胞体(Mycoplasma suis)3：磷酸甘油醛脱氢酶样蛋白1基因(msgl)序列设计引物，对上海地区分离的小附红细胞体(M.Parvum)阳性猪全血DNA进行PCR扩增，获得小附红细胞体3：磷酸甘油醛脱...
- 曹薇陈兆国周鹏米荣升黄燕秦培兰杨晓娇王向佩王晓娟石凯
- 关键词：克隆
- 猪源附红细胞体荧光定量PCR检测试剂盒及其应用
- 本发明公开一种猪源附红细胞体荧光定量PCR检测试剂盒，该试剂盒包括：针对SEQ ID NO:1所示猪附红细胞体a1基因序列设计的TaqMan探针；针对SEQ ID NO:1所示猪附红细胞体a1基因序列设计的引物对。本发明...
- 陈兆国王向佩周鹏米荣升黄燕
- 文献传递
- 猪附红细胞体MSG1基因的克隆及序列分析
- 为研究猪附红细胞体(M.suis) MSG1基因的遗传变异特点,从上海地区3个屠宰场采集自然感染附红细胞体的猪血液,提取基因组DNA,根据GenBank已经报道的猪附红细胞体MSG1基因序列(登录号AM407404.1)...
- 曹薇陈兆国周鹏米荣升黄燕秦培兰杨晓娇王向佩王晓娟石凯
- 微小隐孢子虫Th多表位基因和融合蛋白及其应用
- 本发明公开了一种微小隐孢子虫Th多表位融合蛋白，其包含：SEQIDNO.1～10所示Th表位序列以任意顺序相互串联形成的氨基酸序列。本发明还公开了微小隐孢子虫Th多表位基因，其包含编码上述融合蛋白的核苷酸序列。本发明微小...
- 陈兆国李艳米荣升黄燕周鹏
