秦培兰
- 作品数：19 被引量：15H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：上海市科技兴农重点攻关项目中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 小附红细胞体mpg1基因的克隆及序列分析
- 根据猪附红细胞体(Mycoplasma suis)3：磷酸甘油醛脱氢酶样蛋白1基因(msgl)序列设计引物，对上海地区分离的小附红细胞体(M.Parvum)阳性猪全血DNA进行PCR扩增，获得小附红细胞体3：磷酸甘油醛脱...
- 曹薇陈兆国周鹏米荣升黄燕秦培兰杨晓娇王向佩王晓娟石凯
- 关键词：克隆
- 小附红细胞体mpg1基因的克隆及序列分析
- 2014年
- 根据猪附红细胞体3-磷酸甘油醛脱氢酶样蛋白1基因（msgl）序列设计引物，对上海地区分离的小附红细胞体阳性猪全血DNA进行PCR扩增，获得小附红细胞体3-磷酸甘油醛脱氢酶样蛋白1基因（mpgl）并进行测序和分析，研究其遗传变异特点。结果显示，共获得了11条小附红细胞体mpgl基因序列，序列长度均为1011bp。同源性分析显示，所获得的1l条小附红细胞体mpgl基因序列之间的相似性为96．8％～99．9％，预测氨基酸序列的相似性在97．9％～100％之间；与GenBank中公布的猪附红细胞体msgl基因核苷酸序列相似性在96．6％～98．2％之间，氨基酸序列的相似性为98．2％～99．1％。系统进化分析表明，msgl基因与mpgl基因共同构成每个聚簇。
- 曹薇周鹏米荣升黄燕秦培兰杨晓娇王向佩王晓娟石凯陈兆国
- 关键词：克隆
- 隐孢子虫鼠基因型CP15基因真核表达质粒的构建及在Hela细胞中的表达被引量：2
- 2011年
- 为了构建隐孢子虫鼠基因型CP15基因的重组真核表达质粒,检测其重组质粒在Hela细胞中的表达。采用PCR方法,从pMD18-T-CP15菌液中扩增了CP15及含寡聚脱氧核苷酸(CpG-ODN)的CP15基因,酶切测序鉴定;将该基因亚克隆至pVAX1载体中,用脂质体介导的方法转染Hela细胞,RT-PCR法、间接免疫荧光法和Western-blot法检测表达蛋白的生物学活性。结果显示,扩增了约360 bp和380 bp的隐孢子虫鼠基因型CP15和含CpG-ODN的CP15基因,酶切测序鉴定成功构建了pVAX1-CP15和含有CpG-ODN的重组真核表达质粒pVAX1-C-CP15。转染Hela细胞后,用RT-PCR法检测到外源基因有效的转录,用间接免疫荧光、SDS-PAGE和Western-blot法检测到外源基因的有效表达。结果表明,构建的重组真核表达质粒能够在Hela细胞中成功转录和表达,并且表达产物具有良好的免疫活性。这为下一步深入研制具有高保护性的隐孢子虫核酸疫苗奠定了基础。
- 苏庆美何生虎米荣升张国恩黄燕周鹏秦培兰呼高伟陈兆国
- 关键词：真核表达质粒HELA细胞
- 微小隐孢子虫CP15-P23-CP15/60基因的融合表达及抗血清的制备
- 2012年
- 以微小隐孢子虫基因组DNA为模板,PCR扩增获得子孢子表面抗原CP15、P23和CP15/60基因。利用重叠延伸PCR(SOE PCR)将该3段基因片段串联在一起,各基因片段之间引入柔性氨基酸接头(GGGGS)编码基因。将串联基因克隆到原核表达载体pET-28a(+)上,构建重组表达载体,转化到大肠埃希菌BL21(DE3)中进行诱导表达,将纯化的重组蛋白免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体。结果表明,获得了CP15-P23-CP15/60融合基因,并在大肠埃希菌中高效表达,Western blot显示重组蛋白能被牛抗微小隐孢子虫阳性血清识别,制备的多克隆抗体能被重组蛋白特异性识别,表明获得的重组蛋白具有较好的抗原性。
- 秦培兰米荣升黄燕周鹏张国恩苏庆美呼高伟曹薇陈兆国
- 关键词：微小隐孢子虫原核表达重叠延伸PCR
- 隐孢子虫P23基因的原核表达及间接ELISA检测方法的建立
- 将隐孢子虫鼠基因型（Cryptosporidium mouse genotype）P23基因亚克隆到pGEX-4T-1载体中，并用大肠杆菌BL21（DE3）为宿主菌诱导表达。以纯化的rP23为诊断抗原，建立隐孢子虫间接E...
- 张国恩米荣升苏庆美黄燕周鹏胡义彬秦培兰呼高伟陈兆国
- 关键词：隐孢子虫原核表达间接ELISA检测试剂盒
- 微小隐孢子虫CP15-P23-CP15/60基因的融合表达及其抗血清的制备
- 以微小隐孢子虫（Cryptosporidium parvum）基因组DNA为模板,PCR扩增获得子孢子表面抗原CP15、P23和CP15/60基因。利用重叠延伸PCR（SOE PCR）将该三段基因片段串联在一起,各基因片...
- 秦培兰米荣升黄燕周鹏张国恩苏庆美呼高伟曹薇陈兆国
- 关键词：微小隐孢子虫原核表达重叠延伸PCR
- 文献传递
- 猪附红细胞体MSG1基因的克隆及序列分析
- 为研究猪附红细胞体(M.suis) MSG1基因的遗传变异特点,从上海地区3个屠宰场采集自然感染附红细胞体的猪血液,提取基因组DNA,根据GenBank已经报道的猪附红细胞体MSG1基因序列(登录号AM407404.1)...
- 曹薇陈兆国周鹏米荣升黄燕秦培兰杨晓娇王向佩王晓娟石凯
- 微小隐孢子虫miR-2980真核表达载体的构建及初步鉴定(英文)
- 2012年
- [目的]构建微小隐孢子虫miR-2980真核表达载体,并进行鉴定。[方法]从微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)基因组DNA扩增cp-miR-2980前体,克隆到pMD18-T载体上,经测序鉴定正确后亚克隆到pVAX1载体上,转染HCT-8细胞,提取细胞总RNA,RT-PCR检测cp-miR-2980的表达。[结果]成功地构建了cp-miR-2980真核表达载体pVAX-miR2980,RT-PCR检测证实其能在真核细胞HCT-8中表达。[结论]构建的真核表达载体pVAX-miR2980能在HCT-8细胞中成功表达cp-miR-2980,为后续研究cp-miR-2980的功能打下了基础。
- 呼高伟程天印米荣升秦培兰黄燕周鹏曹薇陈兆国
- 关键词：前体真核表达载体
- 不同DNA提取方法对隐孢子虫卵囊PCR检测的影响被引量：5
- 2011年
- 为了提高隐孢子虫PCR检测的敏感性和效率,采用10种基因组DNA提取方法,对隐孢子虫卵囊DNA进行提取,对提取的DNA进行nested PCR扩增。经过3次重复试验,结果显示,Chelex 100法、FTA试纸法和Wizard DNAClean-Up System试剂盒法敏感性最高,能够稳定地扩增出1×102个卵囊提取的DNA,适合隐孢子虫病分子流行病学调查时大量样品DNA的提取。
- 陈兆国米荣升周鹏黄燕张国恩苏庆美秦培兰呼高伟林矫矫
- 关键词：隐孢子虫DNA
- 微小隐孢子虫感染HCT-8细胞模型的建立及不同阶段虫体形态观察
- 为建立微小隐孢子虫体外感染模型，并对其在细胞内的不同发育阶段虫体形态进行观察，利用人回盲肠癌(HCT-8)细胞作为感染细胞，采用不同的接种细胞浓度和培养血清浓度进行培养，观察细胞的生长状况；在培养细胞中加入1×...
- 张国恩米荣升周鹏黄燕秦培兰呼高伟曹薇陈兆国
