范燕茹
- 作品数：12 被引量：35H指数：4
- 供职机构：内蒙古农业大学兽医学院农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金内蒙古自治区自然科学基金内蒙古自治区人才开发基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 酿酒酵母菌对绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素-1(SBD-1)基因表达的影响被引量：11
- 2015年
- 【目的】探索益生性酿酒酵母菌对绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素-1(sheep beta-defensin-1,SBD-1)表达的调节作用,为在分子水平上揭示益生菌对防御素的调控机理提供一定的理论基础及依据。【方法】首先将新鲜的绵羊瘤胃组织用PBS和抗生素处理后进行瘤胃上皮细胞原代培养,当原代细胞数量长到细胞培养瓶的85%以上时,将细胞传于12孔板用于细胞刺激试验。同时将活化并纯化后的酿酒酵母菌25℃、180 r/min有氧培养48 h后,进行5次平行平板计数试验,根据平板计数的数据处理方法,得到浓度为5.2×108CFU·m L-1的酿酒酵母菌液,再通过倍比稀释把所得菌液依次稀释成浓度为5.2×107、5.2×106、5.2×105、5.2×104CFU·m L-1的菌液,用以上不同浓度(5.2×104—5.2×108CFU·m L-1)的酿酒酵母菌对体外培养的绵羊瘤胃上皮细胞分别进行不同时间(2、4、8、12、24 h)的刺激,并设置对照组用DMEM/F12培养基代替酿酒酵母菌。然后提取总RNA,逆转录为c DNA后,利用实时荧光定量PCR技术和酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测瘤胃上皮细胞中SBD-1表达差异。最后用SAS 9.2软件对数据进行相关差异性分析。【结果】荧光定量PCR结果表明,在各时间组内SBD-1 m RNA的表达量随着菌液浓度的增加均呈先升高后降低的趋势,当菌液浓度为5.2×107CFU·m L-1时表达量达到最大,并与对照组和其他浓度组相比差异极显著(P<0.01)。当菌液浓度一定时,SBD-1 m RNA的表达量先是随着刺激时间的延长而呈上升趋势,刺激时间为12 h时SBD-1 m RNA表达量达到峰值,之后呈下降趋势。因此,当浓度为5.2×107CFU·m L-1的菌液刺激瘤胃上皮细胞12 h后,SBD-1基因的表达量达到最高,且与此浓度下其他时间组的表达量相比差异极显著(P<0.01)。ELISA检测结果显示,SBD-1蛋白表达趋势与SBD-1 m RNA检测结果基本一致。不同浓度的菌液分别刺激绵羊瘤胃上皮细胞2、4、8、12、24 h后均
- 金鑫张曼范燕茹王佩杨银凤
- 关键词：酿酒酵母菌实时荧光定量PCR酶联免疫吸附测定绵羊
- 乳酸杆菌诱导绵羊瘤胃上皮细胞内SBD-1的表达被引量：4
- 2016年
- 为了解不同乳酸杆菌的刺激对绵羊瘤胃上皮细胞中绵羊β-防御素-1(sheep beta-defensin-1,SBD-1)的可能调节作用,本研究选用了2株具有益生作用的乳酸杆菌,即干酪乳杆菌Zhang(L.casei Zhang)和植物乳杆菌P-8(L.plantarum P-8),首先,运用实时荧光定量PCR技术(RT-q PCR)检测与乳酸杆菌共培养后的绵羊瘤胃上皮细胞中SBD-1mRNA的相对表达量;其次,探讨了2株乳酸杆菌诱导SBD-1 mRNA表达的差异性,选取优势菌株;最后,运用RTq PCR技术和酶联免疫吸附测定(ELISA)的方法,检测优势菌株活菌、灭活菌及其培养上清液对SBD-1基因及蛋白水平表达的影响。结果表明:2株乳酸杆菌均能促进SBD-1 mRNA的相对表达量,乳酸杆菌的浓度为107CFU/m L、刺激细胞8 h时能极显著促进SBD-1 mRNA的相对表达量(P<0.01),而L.plantarum P-8强于L.casei Zhang;进一步的研究表明L.plantarum P-8的灭活菌亦可显著诱导SBD-1的基因及蛋白表达(P<0.05),但弱于活菌。本研究结果表明L.plantarum P-8和L.casei Zhang均可诱导绵羊瘤胃上皮细胞内SBD-1的差异性表达。
- 范燕茹王佩金鑫杨银凤
- 关键词：乳酸杆菌酶联免疫吸附测定
- Ghrelin在梅花鹿体内的免疫组化定位研究
- 2016年
- 为了阐明胃饥饿素(Ghrelin)在梅花鹿体内的表达规律,采用免疫组织化学方法检测Ghrelin在梅花鹿食管、瘤胃、网胃、瓣胃、皱胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、肝、胰、甲状腺、垂体前叶、卵巢、肺、肾和脾等组织中的分布规律。结果显示:Ghrelin免疫阳性细胞在食管和皱胃内主要分布于黏膜层、黏膜下层和肌层;在网胃、瓣胃和瘤胃的黏膜层及黏膜下层中均可见Ghrelin免疫阳性细胞,但肌层中未见表达;在肠道主要定位于黏膜层、黏膜下层和肌层,尤其在肠绒毛和黏膜下层分布较多;在肝、胰、甲状腺、垂体前叶、卵巢、肺、肾、脾等实质器官中同样发现有Ghrelin免疫阳性信号的表达。结果提示,Ghrelin在梅花鹿体内广泛表达且在食管和胃肠道内分布范围最广。
- 刘骄张曼金鑫范燕茹田巧珍杨银凤
- 关键词：GHRELIN梅花鹿免疫组织化学
- 不同信号通路抑制剂对酿酒酵母菌诱导绵羊瘤胃上皮细胞SBD-1表达的影响
- 2016年
- 为了探索核因子-kB(nuclear factor-k-gene binding,NF-kB)和丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)通路是否介导益生性酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae,SC)诱导绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素-1(sheep beta-defensin-1,SBD-1)基因表达的调控机制。首先建立绵羊瘤胃上皮细胞培养体系作为体外试验模型,将传代细胞分为4个试验组(SC+PDTC、SC+PD98059、SC+SB202190、SC+SP600125)、4个阴性对照组(PDTC、PD98059、SB202190、SP600125)、1个阳性对照组(SC)和1个空白对照组。向试验组和阴性对照组内分别加入NFkB通路特异性抑制剂PDTC(50μmol/L)、MAPKs通路ERK 1/2特异性抑制剂PD98059(20μmol/L)、p38特异性抑制剂SB202190(20μmol/L)和JNK特异性抑制剂SP600125(20μmol/L)4种抑制剂,作用1h后,用PBS将各组细胞清洗3次,然后向试验组和阳性对照组中分别添加浓度为5.2×107 CFU/mL的酿酒酵母菌液100μL,并向阴性对照组和空白对照组中分别添加等量的DMEM/F12培养液。将以上10组细胞置于37℃、5%CO2培养箱中培养12h后提取各组细胞总RNA,利用实时荧光定量PCR技术检测各组SBD-1 mRNA表达水平的变化。结果显示:与阳性对照组相比,4种抑制剂对酿酒酵母菌促进瘤胃上皮细胞SBD-1的诱导表达都具有抑制作用,且存在极显著性差异(P<0.01),而各阴性对照组与空白对照组相比差异均不显著(P>0.05);4种抑制剂的抑制效果依次表现为SB202190>PDTC>SP600125>PD98059,且SB202190抑制效果极显著高于PDTC(P<0.01),而PDTC抑制效果与SP600125、PD98059相比差异均不显著(P>0.05)。结果表明,NF-kB和MAPKs通路可能均介导酿酒酵母菌诱导绵羊瘤胃上皮细胞SBD-1的表达,但可能以MAPKs途径为主要信号通路。
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- 关键词：酿酒酵母菌抑制剂信号通路实时荧光定量PCR
- 中国驯鹿瘤胃上皮细胞的体外分离培养被引量：9
- 2014年
- 为了建立驯鹿瘤胃上皮细胞的体外分离及培养方法，试验将驯鹿瘤胃组织进行钝性分离得到上皮层，用0．25％Trypsin-0．02％EDTA消化液37℃连续振荡消化上皮组织3～4h，每30min更换新的消化液，从消化第4次起过滤消化液，离心收集细胞，采用含有15％FBS的M199培养液培养和传代，在显微镜下观察其细胞形态进行形态学鉴定以及采取免疫细胞化学的方法检测细胞内的角蛋白CKl9进行化学鉴定。结果表明：用上述试验方法可以获得能够用于培养的细胞，并能将这些细胞成功地进行了原代和传一代的体外培养。通过细胞形态学观察和免疫细胞化学检测，证实所培养的细胞为上皮细胞。说明试验基本建立了驯鹿瘤胃上皮细胞在体外分离培养的方法。
- 范燕茹王佩金鑫王冠玉邱凯王秀芳苏日古格余兴邦杨银凤
- 关键词：瘤胃上皮细胞原代培养体外培养
- 梅花鹿体内生长素-Ghrelin的表达检测及细胞定位研究
- 检测生长素(Ghrelin)在梅花鹿体内的表达及细胞定位,为在分子与细胞水平上揭示Ghrelin对梅花鹿机体的调控机理提供理论基础及依据,同时在为提高梅花鹿的饲养与管理水平上提供一定的试验依据。采用反转录一聚合酶链式反应...
- 刘骄张曼金鑫范燕茹田巧珍杨银凤
- 关键词：梅花鹿GHRELIN免疫组织化学
- 梅花鹿体内脑肠肽的表达及细胞定位分析被引量：1
- 2017年
- 为了明确脑肠肽Ghrelin(又名胃饥饿素)在梅花鹿体内的表达及定位,采用反转录-聚合酶链式反应(RTPCR)、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和免疫组织化学技术检测了梅花鹿食管、瘤胃、网胃、瓣胃、皱胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、肝、胰、甲状腺、垂体前叶、肺、肾、脾及卵巢等器官中Ghrelin mRNA的相对表达量和Ghrelin蛋白的定位分布情况。RT-qPCR结果显示:Ghrelin mRNA在上述器官中均有表达,其中皱胃内的表达量显著高于其他器官(P<0.05);免疫组织化学染色结果表明Ghrelin蛋白在这些器官中均有表达,在消化管内的分布最为广泛。梅花鹿体内Ghrelin mRNA和Ghrelin蛋白的特定表达模式,揭示这一新型分子在梅花鹿的生长发育过程中可能存有广泛的生物学作用,尤其在胃肠道功能方面可能作为一种重要的调节方式而存在。
- 刘骄张曼金鑫范燕茹田巧珍杨银凤
- 关键词：梅花鹿GHRELINRT-QPCRRT-PCR免疫组织化学
- 枯草芽孢杆菌对绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素-1表达的影响被引量：17
- 2015年
- 选用益生枯草芽孢杆菌研究其对体外培养的绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素表达的调节作用。首先,在体外成功培养绵羊瘤胃上皮细胞,然后用枯草芽孢杆菌对体外培养的绵羊瘤胃上皮细胞进行不同浓度、不同时间的刺激,利用荧光定量PCR技术(Real-time fluorescence quantitative PCR,RT-PCR)从mRNA水平检测刺激后上皮细胞中绵羊β-防御素-1(Sheep beta-defensin-1,SBD-1)基因表达水平的差异。结果表明:当菌液浓度为1010 cfu·mL-1刺激上皮细胞8h后,SBD-1的表达量达到最高;不同的菌液浓度诱导下SBD-1的表达量均有显著增加,109、1010、1011 cfu·mL-1菌液浓度刺激下,SBD-1的表达量与空白相比差异极显著(P<0.01)。结果表明,枯草芽孢杆菌能够诱导绵羊瘤胃上皮细胞内SBD-1基因的表达。
- 王佩范燕茹金鑫杨银凤
- 关键词：枯草芽孢杆菌荧光定量PCR
- β-防御素在感染和炎症过程中的作用被引量：1
- 2015年
- 防御素(defensins)在整个进化过程中构成了动物体内最大的一组宿主防御肽,这些富含半胱氨酸的阳离子肽具有广谱的抗微生物活性,能有效杀灭细菌、酵母和病毒等微生物。因此,防御素是生物体内先天性免疫的一个主要组成部分。防御素在免疫调节中的功能已被广泛研究,文章综述了β-防御素的免疫调节活性及β-防御素在感染和炎症过程中作用的最新进展。
- 金鑫张曼范燕茹王佩杨银凤
- 关键词：Β-防御素先天性免疫免疫调节活性炎症
- 植物乳杆菌诱导绵羊瘤胃上皮细胞SBD-1表达的信号通路途径初探被引量：2
- 2016年
- 本试验旨在探索乳酸杆菌诱导绵羊瘤胃上皮细胞SBD-1表达的可能途径。采用实时荧光定量PCR(RTqPCR)的方法,对已建立的诱导SBD-1表达模型中Toll样受体2(Toll like receptor 2,TLR2)及其相关因子的基因表达变化进行检测;然后选用3种信号通路抑制剂,即NF-κB信号通路抑制剂PDTC、ERK 1/2信号通路抑制剂PD98059和JNK信号通路抑制剂SP600125,将细胞分为8组:细胞组:不作处理;阳性对照组:只添加植物乳杆菌P-8(L.plantarum P-8)诱导;PDTC组:只添加PDTC预处理细胞(PDTC);PDTC+L.plantarum P-8组:PDTC+L.plantarum P-8诱导;PD98059组:PD98059;SP600125组:SP600125;PD98059+L.plantarum P-8组:PD98059+L.plantarum P-8;SP600125+L.plantarum P-8组:SP600125+L.plantarum P-8。采用RT-qPCR的方法检测各组SBD-1mRNA表达水平。结果表明,绵羊瘤胃上皮细胞被L.plantarum P-8诱导后,TLR2及其转接蛋白MyD88、NF-κB和ERK1/2、JNK各基因的mRNA水平都较空白组细胞内的表达极显著增加(P<0.01);添加抑制剂后再诱导,发现抑制剂PD98059和SP600125均能极显著(P<0.01)抑制细胞内SBD-1 mRNA的表达,而PDTC仅能显著抑制(P<0.05)SBD-1的表达。结果表明,L.plantarum P-8可促进绵羊瘤胃上皮细胞TLR2、MyD88、NF-κB、JNK和ERK1/2基因的mRNA表达;添加NF-κB信号通路抑制剂PDTC、ERK 1/2信号通路抑制剂PD98059和JNK信号通路抑制剂SP600125,可抑制L.plantarum P-8对SBD-1mRNA的诱导作用。综上表明,L.plantarum P-8有可能通过激活绵羊瘤胃上皮细胞内NF-κB、JNK、ERK1/2等信号通路促进SBD-1的表达。
- 范燕茹金鑫田巧珍张曼刘骄杨银凤
- 关键词：乳酸杆菌TOLL样受体2实时荧光定量PCR
