许扬梅
- 作品数：19 被引量：29H指数：3
- 供职机构：福建省肿瘤医院更多>>
- 发文基金：福建省自然科学基金福建省医学创新课题福建省卫生厅青年科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 小RNA干扰STAT3基因表达对胃癌细胞增殖和侵袭的影响被引量：2
- 2011年
- 目的:构建针对STAT3基因的短发夹状小干扰RNA重组质粒,探讨应用RNAi技术沉默STAT3基因对胃癌细胞BGC-823增殖和侵袭的影响。方法:应用DNA重组技术,构建针对STAT3基因的干扰RNA重组质粒(pSilencer-STAT3),经脂质体转染BGC-823胃癌细胞,逆转录聚合酶链反应和Western blot免疫印迹法检测STAT3的表达水平;MTT法检测RNA干扰后细胞增殖情况;Transwell细胞侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化。结果:酶切鉴定和测序证实了重组质粒构建成功。与未转染和转染阴性对照质粒组相比,pSilencer-STAT 3转染组胃癌细胞BGC-823中STAT 3mRNA和STAT 3蛋白的表达水平均明显降低,F=39.424,P=0.000和F=31.911,P=0.001。pSilencer-STAT3转染组胃癌细胞BGC-823的生长受到明显抑制,抑制率达47.3%,与阴性对照质粒组的8.1%抑制率相比,差异具有统计学意义,F=40.835,P=0.000。侵袭实验显示,pSilencer-STAT3转染组胃癌细胞BGC-823穿膜细胞数,显著低于阴性对照质粒组和未转染组(75±10,111±10,104±9,F=11.311,P=0.009)。结论:构建的pSilenc-er-STAT3重组质粒能有效地抑制STAT3基因在人胃癌细胞BGC-823中的表达,抑制细胞的增殖和侵袭。
- 龚福生郑秋红汪相如许扬梅
- 关键词：细胞培养RNA干扰基因表达
- 液体活检和肿瘤精准医疗被引量：2
- 2016年
- 精准医疗新技术——液体活检,既有极高的科研价值,又具备助力推进精准医疗临床实践的巨大潜能。它可用于癌症早期筛查、诊断、监控、治疗方案指导和疗效评估等众多领域,液体活检的优势使其成为最具发展潜力的肿瘤诊疗手段。本文围绕液体活检在临床肿瘤精准医疗的应用前景,从概念、特点、研究方法和个体化肿瘤治疗、临床应用及研究现状等方面进行阐述,展示了液体活检巨大的临床应用价值和市场前景。
- 许扬梅郑秋红
- 关键词：循环肿瘤细胞
- γ-synuclein基因真核表达载体的构建及其对结肠癌细胞SW1116体外侵袭转移潜能的影响被引量：2
- 2014年
- 目的构建针对γ-synuclein基因的真核表达载体并观察其对结肠癌细胞sw1116体外侵袭及与人脐静脉内皮细胞（HUVEC）黏附能力的影响。方法从结肠癌细胞系HT29提取总RNA，经RT．PCR获得γ-synucleincDNA全长片段，经过酶切连接等反应定向克隆至真核绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1上，以脂质体转染的方法将重组质粒转染至结肠癌细胞系SW1116，经G418筛选出稳定转染的细胞株。采用Transwell小室法检测细胞体外侵袭能力。将细胞接种于铺有HUVEC的96孔板中，酶标仪读取荧光强度来表示黏附细胞的相对数。结果成功构建pEGFP-γ-synuclein真核表达载体，经过筛选后可在SW1116细胞中稳定表达，且能在体外翻译出GFP-γ-synuclein融合蛋白质。转染γ-synuclein后，穿过Matrigel胶及Transwell小室膜的细胞数明显增加（198．4±20．7比98．8±13．2，P〈0．05），与HUVEC黏附的细胞数（荧光强度）亦显著增加（3．08±0．36比1．22±0．21，P〈0．05）。结论γ-synuclein可显著增强结肠癌细胞SW1116体外侵袭转移潜能。
- 叶青黄峰郑秋红王晓盈许扬梅龚福生黄丽洁
- 关键词：结肠癌细胞人脐静脉内皮细胞
- 胃癌细胞系SGC-7901肿瘤干细胞的初步研究
- 目的：
胃癌是我国癌症中的头号杀手，是对人类健康危害极大的恶性肿瘤。目前的研究显示胃癌可能来源于干细胞。但胃癌干细胞的研究尚处于探索阶段。本实验包含两个方面的内容：
(1)证明胃癌细胞系SGC－790...
- 许扬梅
- 关键词：胃癌细胞恶性肿瘤
- 文献传递
- Identification of perioperative circulating tumor cells and potential biomarkers of circulating tumor stem cells in colorectal cancer patients by flow cytometry
- <正>To identify perioperative circulating tumor cells(CTCs)and markers of circulating tumor stem cells(CTSCs)in...
- 郑秋红许扬梅
- 文献传递
- 应用CRISPR/Cas9系统敲除PD-1基因对人T淋巴细胞增殖及分泌IFN-γ的影响被引量：2
- 2019年
- 目的:探讨应用CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除PD-1基因对人T细胞增殖及分泌IFN-γ的影响。方法:设计靶向PD-1基因的sgRNA序列,应用T7 RNA聚合酶体外分别合成PD-1-sgRNA和Cas9mRNA。利用核转染技术将PD-1-sgRNA和Cas9 mRNA混合物转入激活的人T淋巴细胞,测序确认基因敲除的效率。应用流式细胞术分析基因敲除后T淋巴细胞表型和PD-1的表达情况,锥虫蓝活细胞计数法检测T细胞增殖活力,ELISA检测T细胞分泌IFN-γ情况。结果:体外成功合成PD-1-sgRNA和Cas9 mRNA。将PD-1-sgRNA和Cas9 m RNA核转染T淋巴细胞,测序证实PD-1基因序列编辑效率为58.3%。CRISPR/Cas9系统成功下调T淋巴细胞表面PD-1分子的表达水平[(9.6±1.85)%vs(16.2±2.05)%,P<0.05],PD-1基因敲除不影响T细胞的增殖活力和细胞表型(P>0.05);但PD-1-sgRNA组的效应T细胞分泌IFN-γ水平显著升高(P<0.01)。结论:CRISPR/Cas9基因编辑系统成功敲除人T淋巴细胞PD-1基因,降低PD-1分子表达可阻断PD-1/PD-L1负性调控从而增强T细胞的免疫活性,且促进效应T细胞分泌IFN-γ。
- 龚福生许扬梅刘施佳黄丽洁郑秋红
- 关键词：T淋巴细胞PD-1基因敲除IFN-Γ
- 循环肿瘤干细胞(CTSC)表面标记物的筛选以及CTSC检测在临床诊断和治疗中的作用研究
- 从实体瘤脱落进入循环系统的肿瘤细胞,即循环肿瘤细胞(circulating tumor cell,CTC).目前认为外周血中呈现CD45-/EpCAM+/CK+的细胞即CTC,其数目的多少,与患者肿瘤的分期、大小、转移、...
- 刘沁颖魏晟宏高炜刘巧珍许扬梅龚福生谢云青应敏刚郑秋红
- 关键词：循环肿瘤细胞肿瘤转移
- RNA干扰抑制γ突触核蛋白的表达对人结肠癌细胞株增殖和侵袭能力的影响被引量：2
- 2016年
- 目的探讨抑制γ突触核蛋白（SNCG）基因表达对结肠癌细胞株生长及侵袭能力的影响。方法针对SNCG基因的mRNA序列（GENBANK：No．NM003087．2），设计合成干扰SNCG基因表达的RNA（siRNA）有效靶序列及其DNA，与慢病毒骨架质粒GV115（hU6-MCS-CMV—EGFP）连接并包装．获得实验组慢病毒LV-SNCG-RNAi-EGFP，并用相同步骤构建阴性对照组慢病毒LV-SNCG-NCIEGFP。用两种重组慢病毒分别感染人结肠癌SW1116细胞（实验组：RNAi组，阴性对照组：NC组），荧光显微镜下观察感染后shRNA荧光标签（EGFP）的表达情况；利用实时定量聚合酶链反应（Real．timePCR）检测RNAi组与NC组细胞中SNCG基因表达mRNA的干扰效果；以野生型SW1116细胞为空白对照（野生型组），用Westernblot方法检测RNAi组、NC组和野生型组细胞中SNCG基因表达蛋白的干扰效果；CCK．8细胞增殖实验、软琼脂克隆形成实验和Transwell侵袭实验．用于评价RNA干扰SNCG基因表达对RNAi组与NC组细胞的体外生长及侵袭能力的抑制作用。结果成功构建并获得了稳定表达重组慢病毒的SW1116细胞株，表达慢病毒LV-SNCG-RNAi-EGFP及LV-SNCG-NC-EGFP滴度均为8×10^8Tu／ml。RNAi组SNCG基因相对表达水平（2-△△△）为0．114±0．030，低于于对照NC组的SNCG基因相对表达水平（2-△△Q：1．009±0．161），差异有统计学意义（P=0．009）；RNAi组SNCG基因干扰效率达到76．8％。RNAi组的SNCG蛋白相对表达量为12．001±2．884，低于NC组（蛋白相对表达量：32．445±4，731）和野生型组（蛋白相对表达量：34．308±6．920），差异有统计学意义（P=0．018，P=0．020）。CCK-8细胞增殖实验显示，干扰SNCG基因表达后，RNAi组细胞的体外增殖能力从48h开始受到明显抑制，并持续到120h，与NC组及野生型组差异具有统计学意义（P=0．036）。RNAi组克隆明显偏小，RNAi组平均直径（0．582±0．103）mm，低�
- 黄峰许少华叶青郑秋红许扬梅刘沁颖
- 关键词：结肠肿瘤慢病毒载体RNA干扰基因转染
- 直肠癌循环肿瘤细胞与原发肿瘤组织基因表达谱的差异分析被引量：5
- 2017年
- 目的:通过直肠癌循环肿瘤细胞(circulating tumor cell,CTC)与原发肿瘤组织基因表达谱的差异分析,筛选直肠癌CTC的特异性基因。方法:选取2015年9月至2015年12月福建省肿瘤医院收治的直肠癌患者4例,取肿瘤组织和相应的癌旁组织并采集外周血20 ml。应用流式细胞术检测血液CTC,抽提癌组织和CTC的总RNA,采用人全转录组表达谱芯片检测CTC及相应肿瘤组织mRNA表达谱,经聚类分析筛选CTC特异性基因,并采用生物分子注释系统MAS软件对其进行基因功能及其相关的信号通路分析。结果:4例直肠癌患者检测到CTC数目分别是67、78、53和120个。筛选出肿瘤与癌旁组织差异基因共7 755个、CTC与白细胞差异基因共567个,肿瘤组织及CTC差异基因交集后共同上调或下调的特异性基因共36个,其中上调16个、下调20个(P<0.05或P<0.01)。CTC特异性基因与肿瘤转移和干细胞功能有关,涉及与细胞转移、干细胞功能和免疫功能相关的22条信号通路。结论:CTC与原发肿瘤基因相比,具有独特的表达谱,是肿瘤复发和转移的重要基础。
- 许扬梅龚福生陈路川应敏刚郑秋红
- 关键词：直肠癌循环肿瘤细胞基因表达谱
- 流式细胞术检测结直肠癌根治术前后循环肿瘤细胞和循环肿瘤干细胞及其临床预测价值被引量：4
- 2017年
- 目的:探讨流式细胞仪检测结直肠癌根治术前后循环肿瘤细胞(circulating tumor cell,CTC)和循环肿瘤干细胞(circulating tumor stem cell,CTSC)作为患者临床预测指标的可行性和临床价值。方法:入组首诊初治50例结直肠癌患者,手术前后各抽取15 ml外周血。分离单个核细胞后分成两份,一份标记CTC标志物(CD45、Ep CAM和CK),另一份标记CTSC标志物(CD45、Ep CAM、CD44和CD133),Moflo XDP流式细胞仪对其进行检测,CD45-Ep CAM^+CK^+细胞确定为CTC;CTSC确定为3群:CD44^+CTSC、CD133^+CTSC和CD44^+CD133^+CTSC。结果:结直肠癌根治术前患者CTC和CD44^+CTSC阳性率分别为34%和44%,CD133^+CTSC和CD44^+CD133^+CTSC是24%和0;术后患者CTC和CD44^+CTSC阳性率分别为38%和54%,CD133^+CTSC和CD44^+CD133^+CTSC分别为26%和0。根治术前后CTC阳性率都与肿瘤T分期有关联(P<0.05);术后CTC与肿瘤的浸润深度、淋巴结转移和远处转移有关联(P<0.05);术前CD44^+CTSC与肿瘤的浸润深度有关联。结论:根治术前后CTC及术前CD44^+CTSC阳性率都具有临床预测指标的可行性和价值,术后CTC阳性率可能是更好的预测指标。
- 许扬梅刘巧珍刘沁颖魏晟宏陈路川应敏刚郑秋红
- 关键词：结直肠癌CD133CD44流式细胞术
