迟俊
- 作品数：5 被引量：6H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院放射与辐射医学研究所更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- PON2单克隆抗体的制备与初步鉴定被引量：2
- 2009年
- 目的:制备PON2(paraxonase2)单克隆抗体(mAb),并进行初步鉴定。方法:利用生物信息学方法分析人类PON2蛋白序列,选取与小鼠同源性低,而免疫原性与亲水性均较强的片段,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-PON2和PET-32a-PON2,GST-PON2和HIS-PON2融合蛋白在大肠杆菌中进行表达,以HIS-PON2作为免疫原制备鼠mAb,以GST-PON2作为筛选抗原。采用Western blot、间接免疫荧光鉴定mAb的特异性。结果:GST-PON2和HIS-PON2融合蛋白均在大肠杆菌中获得高效表达,经常规的细胞融合和筛选获得2株可稳定分泌抗PON2的杂交瘤细胞株,这2株抗体可以识别HepG2细胞中的靶蛋白。结论:成功制备出2株抗PON2的mAb,并通过免疫荧光技术检测了该蛋白在HepG2细胞中的分布,为进一步进行PON2蛋白的的研究提供了有效的工具。
- 于占红杨金菊刘静迟俊陈苗柳晓兰刘莹高建恩孙启鸿
- 关键词：原核表达单克隆抗体
- 应用单克隆抗体鉴定人类肝脏线粒体蛋白质组中的抗原优势蛋白
- 2010年
- 对线粒体蛋白质组的鉴定和分析有助于理解线粒体的功能和相关疾病的发病机制,包括能量代谢、凋亡、自由基产生、产热作用、钙离子信号通路等.本实验旨在鉴定人类肝脏线粒体蛋白质组中的抗原优势蛋白.用线粒体蛋白质作为免疫原,经过细胞融合、筛选和克隆,制备了240多个单克隆抗体杂交瘤细胞系.单克隆抗体识别的线粒体蛋白抗原通过人类肝脏cDNA表达文库筛选方法鉴定,相应的线粒体蛋白质的亚细胞定位通过免疫组化证实.发现了肝脏线粒体中6个抗原优势蛋白,分别被至少两种特异性的单克隆抗体所识别.这6个蛋白分别是乙酰辅酶A酰基转移酶(线粒体3-酮酯酰辅酶A硫解酶)2、醛脱氢酶1家族A1、氨甲酰磷酸合成酶1、二氢硫辛酰胺S乙酰转移酶(丙酮酸脱氢酶复合物的E2组分)、烯酰辅酶A水合酶1和羟基类固醇(11β)脱氢酶1.这些单克隆抗体有望应用于人类肝脏蛋白质组计划的相关研究,如去除优势蛋白、蛋白与蛋白之间相互作用的研究和验证等.
- 鞠艳芳杨金菊刘蓉柳晓兰杜雪梅刘莉陈志成迟俊刘淑娥高媛高建恩贺福初孙启鸿
- 关键词：线粒体单克隆抗体肝脏
- 抗尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶2单克隆抗体的制备与鉴定被引量：2
- 2007年
- 本研究制备抗人尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶2(UDP-glucose pyrophosphorylase2)的单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定。将正常成人肝组织匀浆离心并分离肝脏胞浆总蛋白,用肝脏胞浆总蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,通过间接ELISA法、Western blot及免疫组织化学的方法对单克隆抗体进行特性鉴定,通过Uni-ZAP XR肝脏cDNA表达文库筛选鉴定抗体特异性。结果表明:通过间接ELISA筛选获得1株可稳定分泌抗人UGP2mAb的杂交瘤细胞系BAD062,其分泌的单克隆抗体的Ig亚类(型)为IgG2b(κ),Western blot结果显示该抗体可以特异地识别分子量为56kD的蛋白;应用单克隆抗体BAD062对人肝脏cDNA表达文库(Uni-ZAPXR)进行筛选,阳性噬菌斑测序结果显示2个阳性克隆插入序列均为UGP2。结论:单克隆抗体BAD062特异地识别抗原UGP2,该抗体可用于ELISA检测、Western blot、免疫组织化学实验,为UGP2的研究提供了有力的工具。
- 王婉高媛杨金菊柳晓兰鞠艳芳刘莉陈志成刘蓉迟俊邢维贤高建恩安立国孙启鸿
- 关键词：单克隆抗体CDNA表达文库
- Clusterin抗原的表达、抗体制备及其初步鉴定被引量：1
- 2008年
- 目的:制备Clusterin(CLU)多克隆和单克隆抗体(mAb),并进行特性鉴定。方法:以成人肝cDNA表达文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-CLU和PET-32a-CLU。GST-CLU融合蛋白在大肠杆菌中表达,被作为免疫原制备兔多抗和鼠mAb。采用ELISA法和Western blot鉴定抗CLU抗血清在重组蛋白和天然蛋白中的特异性。采用West-ern blot,间接免疫荧光,免疫组化鉴定mAb的特异性。结果:GST-CLU融合蛋白在相对分子质量(Mr)约54 000处呈现明显表达条带。Western blot鉴定表明,制备的抗CLU兔多克隆抗体可特异地识别成人肝总蛋白中Mr约52 000和58 000的CLU蛋白。获得9株可稳定分泌抗CLU的杂交瘤细胞株可识别重组人CLU蛋白,其中有2株可特异性结合HepG2细胞质中的蛋白,4株可特异性结合成人肝脏组织肝细胞质中的蛋白。结论:成功地制备出兔抗人CLU抗血清和9株抗CLU的mAb,为进一步研究CLU在肿瘤中的功能奠定了实验基础。
- 张迎春刘莹杨金菊柳晓兰迟俊高建恩唐晓波朱大岭孙启鸿
- 关键词：CLUSTERIN原核表达多克隆抗体单克隆抗体
- FHR4抗体的制备与初步鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的制备Complemen tfactorH4(FHR4/CFHL4)多克隆和单克隆抗体(mAb),并进行特性鉴定。方法以成人肝cDNA表达文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-FHR4和PET-32a-FHR4。GST-FHR4融合蛋白在大肠杆菌中高效表达,作为免疫原制备兔多抗和鼠单抗。采用ELISA法和Westernblot鉴定抗FHR4兔抗血清在重组蛋白和天然蛋白中的特异性。采用蛋白印迹,间接免疫荧光,免疫组化鉴定mAb的特异性。结果 GST-FHR4融合蛋白在相对分子质量约58000处呈现明显表达条带。Westernblot鉴定表明,制备的抗FHR4兔多克隆抗体可特异地识别成人肝总蛋白中相对分子质量约37000和45000的FHR4蛋白。获得2株可稳定分泌抗FHR4的杂交瘤细胞株可识别重组人FHR4蛋白,同时可特异性结合HepG2细胞浆中的蛋白和成人肝脏组织肝细胞浆中的蛋白。结论成功制备出兔抗人FHR4抗血清和2株抗FHR4的mAbs,为进一步研究FHR4的功能奠定了基础。
- 张迎春刘莹杨金菊柳晓兰迟俊刘静高建恩唐晓波朱大岭孙启鸿
- 关键词：COMPLEMENT原核表达多克隆抗体单克隆抗体
