迟晓艳
- 作品数：56 被引量：74H指数：5
- 供职机构：鲁东大学更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金教育部留学回国人员科研启动基金烟台市科学技术发展计划项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生轻工技术与工程农业科学更多>>
- 脱氧萎镰菌醇通过下调GRP78提高双链转FVⅢ基因细胞分泌重链和生物活性
- 2011年
- 双链转凝血VⅢ因子(FVⅢ)基因是克服AAV载体容量限制的有效方法,但重链分泌的低效性带来链不均衡性。本文旨在用脱氧萎镰菌醇(deoxynivalenol,DON)降解内质网分子伴侣蛋白GRP78,通过减少重链与GRP78的结合提高重链分泌,改善双链转FVⅢ基因的功效。用DON处理双链共转基因细胞,观察了双链转FVⅢ基因293细胞分泌的重链和FVⅢ活性。结果显示,用500 ng.mL-1 DON处理细胞3 h后,GRP78蛋白水平明显降低,细胞的生长不受明显影响;单独转FVIII重链基因的DON处理细胞分泌的重链量[(59±11)ng.mL-1]明显高于对照细胞[(15±4)ng.mL-1],双链共转基因时重链的分泌量进一步增加,为(146±34)ng.mL-1,活性达到(0.66±0.15)U.mL-1,明显高于双链转基因对照细胞[分别为(76±17)ng.mL-1和(0.35±0.09)U.mL-1]。结果表明,DON可通过下调GRP78改善重链的分泌性,提高双链转FVⅢ基因的功效,为进一步动物体内双AAV载体转FVⅢ基因提供了实验依据。
- 朱甫祥杨树德刘泽隆缪静屈慧鸽迟晓艳
- A1区替换提高人BDD-FⅧ重链的分泌并缓解其与轻链共转基因细胞链分泌的不均衡性
- 2010年
- 双载体转凝血Ⅷ因子基因(FⅧ)可有效克服腺相关病毒(AAV)载体容量限制,但FⅧ重链分泌的低效性导致重、轻链分泌的不均衡。重链分泌的低效性源自其A1区存在与内质网蛋白质分子伴侣结合的位点。本文在我们最近运用蛋白质剪接的双载体共转B区缺失型FⅧ(BDD-FⅧ)重链和轻链基因研究的基础上,将重链的A1区替换为猪FⅧ的A1区,用融合蛋白内含子的重链和轻链转基因实验,定量分析了重链的分泌及其对共转重链和轻链基因细胞分泌剪接BDD-FⅧ蛋白和活性的影响。结果显示,变构体重链单独转基因时其分泌得到明显改善,达到89±12 ng/ml,明显高于人BDD-FⅧ重链的分泌(25±9 ng/ml);该变构体重链与轻链共转基因细胞分泌的剪接变构体BDD-FⅧ和活性分别为219±51 ng/ml和1.47±0.22 U/ml,明显高于剪接的人BDD-FⅧ的分泌量和活性(1 16±32 ng/ml和0.8±0.11 U/ml)。单独变构体重链和轻链转基因细胞合并培养后,其培养上清中检测到剪接的变构体BDD-FⅧ和活性,分别为38±7 ng/ml和0.22±0.05 U/ml,提示为不依赖细胞机制的蛋白质剪接所产生。结果表明,A1区替换后重链分泌的增强,可促进基于蛋白质剪接技术的双载体共转重链和轻链基因细胞分泌的剪接BDD-FⅧ水平和活性,并可缓解链分泌的不均衡性,为动物体内应用双AAV载体共转BDD-FⅧ重链和轻链基因研究奠定了实验基础。
- 朱甫祥刘泽隆缪静屈慧鸽迟晓艳
- 关键词：分泌蛋白内含子蛋白质剪接
- CRISPR/Cas9—靶向基因组编辑技术的研究进展
- 2017年
- CRISPR/Cas9系统是继锌指核酸酶(ZFNs)技术和转录激活因子样效应物核酸酶(TALENs)技术后新的基因编辑技术.与ZFNs和TALENs相比,CRISPR/Cas9系统具有操作简单,花费低的优点.CRISPR/Cas系统有三种类型,即I型、II型和III型,其中II型是最为简单的,人们将其改为基因组定点修饰技术,即CRISPR/Cas9系统.本文主要阐述了CRISPR/Cas9的发展历史、基本结构、作用机制及目前的应用,并对其发展前景进行了展望.
- 王凯周菊华李延敏迟晓艳
- 陈酿黄酒的澄清处理方法
- 本发明涉及酒精饮料加工领域，具体涉及一种陈酿黄酒的澄清处理方法。包括步骤：澄清剂处理，脱醇处理和高压处理。首先通过添加复合澄清剂，对黄酒中含有的不溶性物质进行脱除，其中添加的一种醚基甘蔗渣吸附材料分子中含有大量活泼的羟基...
- 迟晓艳陈丽娟王艳华张玉香
- 文献传递
- 铜绿假单胞菌全局调控因子RsmA的缺失影响2个吩嗪基因簇的表达被引量：2
- 2012年
- 【目的】为了研究铜绿假单胞菌全局调控因子RsmA对两个吩嗪(Phenazine)合成基因簇phz1和phz2的调控方式与机制。【方法】采用基因缺失和抗性基因(gentamycin resistance cassette,aacC1)插入相结合的策略构建了rsmA基因缺失突变株PA-RG;通过构建互补表达载体和过表达载体,进一步确认RsmA对绿脓菌素的调控作用;采用电转化方法将构建的翻译融合表达载体pMEZ1(phz1'-'lacZ)和pMEZ2(phz2'-'lacZ)分别导入铜绿假单胞菌突变株PA-RG和野生株PAO1,采用Miller法测定融合β-半乳糖苷酶活性。【结果】在GA培养基中,互补分析和过表达分析表明,RsmA抑制绿脓菌素的合成。此外,pMEZ1在突变株PA-RG中的表达增强,为野生株的2-3倍;而pMEZ2在突变株PA-RG中的表达降低,野生株是突变株的2倍。【结论】由此初步判定,铜绿假单胞菌全局调控因子RsmA对两个不同吩嗪合成基因簇的调控作用具有特异性,在一定程度上RsmA负调控phz1,正调控phz2。
- 崔钦娜李芳邢伟越迟晓艳冯志彬王艳华葛宜和刘林德
- 关键词：铜绿假单胞菌RSMA绿脓菌素
- AR-3可增强内含肽介导的全长凝血因子Ⅷ的基因表达
- 2010年
- 目的 观察具有促进凝血因子Ⅷ（fⅧ）重链分泌的酸性区3（AR-3）对蛋白质剪接作用连接的全长fⅧ分泌的影响.方法 以双载体转融合内含肽的全长fⅧ重链和轻链基因,并将AR-3融合于重链基因,瞬时共转培养的293细胞,用Western印迹观察转基因细胞内的蛋白质剪接;用酶联免疫吸附试验（ELISA）和Coatest法定量分析分泌至培养上清中的剪接的全长fⅧ蛋白和由其产生的生物活性.结果 共转基因细胞内可见明显的剪接fⅧ蛋白形成,培养上清中剪接的fⅧ蛋白量和活性分别为（1 12±18）ng/ml和（0.76±0.13）U/ml,明显高于共转未融合AR-3的重链与轻链基因细胞[（64±11）ng/ml和（0.37±0.05）U/ml],而且,混合培养的分别单独转AR-3融合重链和轻链基因细胞的上清中亦检测到剪接的fⅧ蛋白及活性[（27±7）ng/ml和（0.16±0.05）U/ml].结论 AR-3可通过改善内含肽剪接的全长fⅧ的分泌增强转fⅧ基因的效果.
- 朱甫祥刘泽隆缪静屈慧鸽迟晓艳
- 关键词：蛋白质剪接转基因
- 增强的蛋白质反式剪接作用提高肝脏靶向双载体凝血第八因子转基因小鼠的血浆凝血活性
- 2013年
- 基于蛋白质反式剪接的双载体转凝血第八因子(FⅧ)基因受到剪接效率低的不利影响,本研究旨在增强蛋白质剪接元件蛋白内含子(intein)之间的相互作用,通过改善蛋白质反式剪接效率提高小鼠体内双载体转FⅧ基因后血浆剪接FⅧ蛋白的分泌量和凝血活性.近期培养细胞水平证明,FⅧ重链和轻链分别进行Cys点突变(Met226Cys和Asp1828Cys)后,可形成链间二硫键,并提高蛋白质剪接效率产生更多的FⅧ蛋白.在此基础上,将蛋白内含子融合到含Cys点突变的人FⅧ重链和轻链基因,构建一对表达载体,门静脉注射C57BL/6小鼠进行肝脏靶向转基因.48h后分别检测小鼠血浆中分泌的人FⅧ蛋白量和由其所产生的凝血活性,结果显示FⅧ重链抗原分泌量为(442±151)ng/mL,凝血活性为(1.46±0.37)IU/mL,接近于单载体转FⅧ基因产生的血浆凝血活性((1.79±0.59)IU/mL),明显高于双载体转FⅧ基因对照小鼠血浆的重链分泌量((305±103)ng/mL)和血浆凝血活性((0.85±0.23)IU/mL).结果表明,链间二硫键交联可通过改善蛋白质反式剪接效率提高双载体转FⅧ基因的功效.
- 朱甫祥刘泽隆王笑蕾缪静屈慧鸽迟晓艳
- 关键词：蛋白质反式剪接
- 亮氨酸拉链促进蛋白质剪接介导的双载体转凝血Ⅷ因子基因被引量：2
- 2012年
- 作者最近基于蛋白内含子(intein)的双载体转B区缺失型凝血Ⅷ因子(BDD-FⅧ)基因研究证明,表达后的重、轻链可通过蛋白质反式剪接成为共价连接的完整BDD-FⅧ分子并发挥凝血生物活性,但存在不完全剪接的前体蛋白。本文试图通过将具有特异性强相互作用的亮氨酸拉链引入intein序列,提高反式剪接的效率,用双载体系统向培养的COS-7细胞共转融合intein的重链和轻链基因,通过瞬时表达观察了细胞内BDD-FⅧ的剪接和分泌至培养上清液的剪接BDD-FⅧ量和生物活性。结果显示,Western blotting检测到共转基因细胞内明显增强的BDD-FⅧ剪接,表现为前体蛋白的减少;分别用ELISA和Coatest法分析共转基因细胞培养上清液中分泌的剪接BDD-FⅧ蛋白量和生物活性为(106±12)ng.mL-1和(0.89±0.11)U.mL-1,明显高于无亮氨酸拉链的intein融合重链和轻链基因共转基因细胞[(72±10)ng.mL-1和(0.62±0.07)U.mL-1],而且不依赖细胞机制的蛋白质剪接反应明显增强,表现为混合培养的转重链和轻链基因细胞上清液中增加的剪接BDD-FⅧ蛋白量和生物活性[(36±11)ng.mL-1和(0.28±0.09)U.mL-1]。结果表明,亮氨酸拉链可通过增强融合于重链和轻链的intein间的相互作用提高蛋白质反式剪接的效率,改善基于蛋白质剪接的双载体转BDD-FⅧ基因的效果,为进一步的动物体内基于蛋白质剪接的双腺相关病毒(AAV)载体转FⅧ基因研究提供了实验依据。
- 朱甫祥杨树德刘泽隆缪静屈慧鸽迟晓艳
- 关键词：INTEIN蛋白质反式剪接亮氨酸拉链
- Cys突变体凝血Ⅷ因子的蛋白质反式剪接
- 2012年
- 为改善蛋白质反式剪接效率,将B-区缺失型FⅧ(BDD-FⅧ)重链的Tyr664和轻链的Thr1826突变为Cys,双载体共转COS-7细胞,观察了细胞内蛋白质剪接、二硫键形成和细胞培养上清液中分泌的剪接BDD-FVIII量和活性。Western blotting检测结果显示,Cys突变可在细胞内形成链间二硫键,剪接BDD-FVIII蛋白量明显增加;双夹心ELISA检测分泌的剪接BDD-FVIII为(128±24)ng.mL/1,明显高于对照(89±15)ng.mL/1;Coatest法检测结果显示,细胞分泌的凝血活性为(0.94±0.08)u.mL/1,也明显高于对照(0.62±0.15)u.mL/1。结果表明,链间二硫键形成可显著提高基于蛋白质剪接的双载体转BDD-Ⅷ基因作用,为进一步动物体内实验提供了依据。
- 朱甫祥刘泽隆缪静屈慧鸽迟晓艳
- 关键词：蛋白质反式剪接转基因
- 陈酿黄酒的澄清处理方法
- 本发明涉及酒精饮料加工领域，具体涉及一种陈酿黄酒的澄清处理方法。包括步骤：澄清剂处理，脱醇处理和高压处理。首先通过添加复合澄清剂，对黄酒中含有的不溶性物质进行脱除，其中添加的一种醚基甘蔗渣吸附材料分子中含有大量活泼的羟基...
- 迟晓艳陈丽娟王艳华张玉香
- 文献传递
