郭长福
- 作品数：12 被引量：23H指数：3
- 供职机构：武汉生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项“重大新药创制”科技重大专项国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 肠道病毒71型灭活疫苗TritonX-100残留检测方法的建立与验证被引量：1
- 2015年
- 目的建立适合于肠道病毒71型（Vero细胞）灭活疫苗原液TritonX-100残留检测方法并加以验证。方法使用分光光度法对TritonX-100残留进行检测,并按照《中华人民共和国药典》（2010年版）二部中的相关规定对检测方法进行验证及初步应用。结果本方法在5~50μg/ml浓度范围能定量检测TritonX-100残留量,取不同浓度TritonX-100检测其回收率在85.97%~107.31%,RSD≤4.05%;重复性检测的RSD≤0.25%,中间精密度试验RSD≤3.18%;对检测中影响结果的参数：检测持续时间、检测温度、检测波长和检测试剂苯酚浓度在一定范围内适度变化后,检测理论浓度的TritonX-100,其平均回收率在86.42%~107.80%,RSD≤3.54%;340nm波长扫描PBS、5%苯酚、PBS＋苯酚的A值均〈0.01,TritonX-100及5%苯酚反应物的A值明显高于此值。结论本方法的准确度、精密度、专属性以及耐用性均符合规定,方法准确稳定,可用于对肠道病毒71型（Vero细胞）灭活疫苗原液中TritonX-100残留量的检测。
- 陈晓琦王继麟郭长福明平刚张柳涂晶杨邦玲段凯黄佐林
- 关键词：肠道病毒71型灭活疫苗
- 人血清中抗鼠抗体间接ELISA检测方法的建立及临床应用被引量：2
- 2009年
- 目的建立检测人血清中抗鼠抗体(HAMA)的间接ELISA法,并进行临床标本检测。方法采用间接ELISA法,选择最佳实验条件,确定阴阳性血清判定的界值,并进行方法学验证;用该方法检测WuTacⅠ期临床观察的健康志愿者血清抗鼠抗体。结果间接ELISA的最佳试验条件为:抗原包被浓度0.313μg/ml,血清稀释度1∶160,酶标抗体稀释度1∶80 000;阴阳性血清界值为0.210;该方法检测HAMA阳性标本的试验内和试验间变异系数分别为7.46%和5.48%,检测HAMA阴性标本的试验内和试验间变异系数分别为8.03%和14.7%;与马、山羊、兔、猴等动物血清无交叉反应;健康志愿者HAMA约在用药后10～14 d产生。结论已成功建立了检测人血清中抗鼠抗体的间接ELISA法,符合我国生物药品临床试验检测的要求。
- 郭长福张囡李茜黎维勇孙可芳胡豫张爱华
- 关键词：人抗鼠抗体间接ELISA
- 高效价抗肠道病毒71型兔血清的制备及鉴定被引量：4
- 2014年
- 目的制备高效价的抗肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）兔血清。方法分别用RD细胞和Vero细胞培养EV71,纯化后,将经甲醛灭活和未灭活的EV71抗原分别加入佐剂或不加佐剂,经不同途径（肌肉、皮下、腹腔）免疫家兔,每周采血,分离血清,分别采用ELISA、免疫双扩散、免疫荧光和中和抗体试验检测兔血清抗体效价,并分析不同方法检测兔血清抗体结果的相关性。结果未灭活和灭活的纯化EV71抗原加弗氏佐剂后,经皮下或肌肉途径免疫家兔均可获得高效价的抗EV71兔血清,其中加弗氏佐剂的灭活疫苗经皮下途径免疫获得了最高滴度的中和抗体;当抗血清ELISA效价达到或接近1∶10^8,免疫双扩散效价达到或接近1∶512,抗血清1∶2 000稀释后荧光强度〉荻时,可进行免疫家兔的全血采集;不同方法免疫家兔全血采集的血清中和抗体效价为29 406～1 280 652 U/0.2 ml;免疫双扩散检测与中和抗体和免疫荧光检测结果的相关性较高。结论获得了高效价的抗EV71兔血清,为EV71疫苗抗原的相关检定创造了条件。
- 王继麟陈晓琦吴杰明平刚宰家敏郭长福杨京生段凯
- 关键词：肠道病毒71抗血清酶联免疫吸附测定
- 定性检测人血清中抗鼠抗体间接ELISA法的建立及临床应用
- 研究背景注射用鼠抗人T淋巴细胞CD25抗原单克隆抗体是武汉生物制品研究所研制的用于预防和治疗器官移植急性排斥反应的鼠源性单抗,其作用靶点是T淋巴细胞膜上的IL-2Rα链,通过封闭IL-2R阻止IL-2与IL-2R结合,进...
- 郭长福张囡李茜黎维勇孙可芳张爱华
- 文献传递
- 注射用鼠抗人T淋巴细胞CD25单克隆抗体(WuTac)药效学检测方法学的研究
- 目的：摸索与建立鼠抗人T淋巴细胞CD25单克隆抗体(WuTac)与白细胞介素2受体(IL2R)结合的饱和程度的检测方法，评价注射用WuTac单克隆抗体临床应用的有效性。
方法：采用体外与体内的实验方法，对健康志...
- 孙可芳杜雯张囡郭长福张爱华
- 关键词：单克隆抗体白细胞介素2免疫抑制剂间接免疫荧光法
- 文献传递
- WuTac与CD25抗原结合的饱和度及其对健康人外周血淋巴细胞亚群的影响
- 2009年
- 目的动态监测鼠抗人T淋巴细胞CD25抗原单克隆抗体(WuTac)在健康人中与CD25抗原结合的饱和度及其对外周血淋巴细胞亚群的影响,评价WuTac临床应用的安全性,并预测其有效性。方法静脉恒速滴注WuTac0.05、0.1、0.2mg/kg,在用药前和停药后的1、24和72h经肘静脉采血,通过流式细胞术动态监测T淋巴细胞亚群及与CD25抗原结合的饱和度。结果不同剂量组的T淋巴细胞亚群用药前后差异均无统计学意义;停药后1h开始,CD25+淋巴细胞的比例明显降低,且一直持续至停药后72h,CD25+淋巴细胞的比例均明显低于用药前。不同剂量组的CD25抗原的饱和度均达96%以上。结论WuTac单抗用药后,对健康人T淋巴细胞亚群均无影响,能迅速与CD25高效结合,持续时间72h以上,为其Ⅱ、Ⅲ期临床研究奠定了基础。
- 孙可芳杜雯张囡郭长福黎维勇赵亚杰胡豫张爱华
- 关键词：CD25抗原IL-2受体饱和度
- WuTac血药浓度双抗体夹心定量ELISA检测方法的建立及其临床应用被引量：2
- 2009年
- 目的建立WuTac血药浓度双抗体夹心定量ELISA检测方法,并进行初步临床应用。方法建立双抗体夹心ELISA法,定量检测血清中WuTac浓度,筛选最佳抗体包被浓度和酶标抗体稀释度,绘制标准曲线,并对该方法进行验证;应用该方法对36名健康志愿者单次注射不同剂量WuTac(0.05、0.1和0.2mg/kg)前后14个时间点的临床血清标本进行检测。结果最佳抗体包被浓度为0.2μg/ml,最佳酶标抗体稀释度为1∶15000,标准曲线的线性相关系数r≥0.99,线性范围为3.9～125ng/ml。高浓度WuTac标准品的变异系数小于15%;准确性为99.05%±5.00%(92.43%～110.02%);特异性良好。临床血清检测结果表明,WuTac在0.05～0.2mg/kg范围内呈线性药代动力学特征。结论已建立了WuTac血药浓度双抗体夹心定量ELISA检测方法,该方法的灵敏度、精密性和准确性均符合我国生物制品药代动力学研究的要求。
- 张囡李茜郭长福黎维勇孙可芳胡豫张爱华
- 关键词：抗CD25单克隆抗体药代动力学双抗体夹心ELISA
- 防龋DNA疫苗免疫效能评价中间接ELISA检测的建立和验证被引量：1
- 2011年
- 目的:建立血清样本特异性抗体检测的间接ELISA方法,应用于龋齿DNA疫苗特异性抗体效力检测。方法:通过棋盘滴定确定样本检测条件建立血清特异性抗PAc抗体间接ELISA方法,并对所建立的方法进行特异性和精密度验证。结果:确定包被PAc蛋白浓度为10mg/L,酶标抗体工作浓度1∶5000,样本稀释倍数1∶200。方法的重复性检测表明,板间和板内误差小于15%;中间精密度高、中、低3个浓度的CV值小于15%。结论:该方法特异性强,具有良好的重复性和中间精密度,可用于防龋DNA疫苗免疫效能评价中血清样本特异性抗PAc抗体的检测。
- 李宇红吴小丽闭兰郭长福张爱华
- 关键词：防龋DNA疫苗间接ELISA免疫
- 流行性腮腺炎病毒疫苗株WM84全基因序列测定及分析被引量：4
- 2015年
- 目的分析流行性腮腺炎病毒疫苗WM84株(以下简称WM84株)全基因序列,并与Jeryl Lynn(JL)株和腮腺炎病毒各基因型进行比对。方法 WM84株原始毒株于原代鸡胚成纤维细胞(chicken embryo fibroblast,CEF)上连续传代至7代,观察每代病毒的培养特性,测定第7代病毒全基因序列,用MEGA 4.1软件分析其核苷酸及氨基酸序列与JL株的差异,用MEGA 4.1软件的相邻连接方法(neighbor-joining,NJ)构建各基因型腮腺炎病毒的系统进化树。结果 WM84株原始病毒在CEF上连续传7代的各代病毒的培养特性基本稳定。WM84株与JL2及JL5株比较,核苷酸序列同源性分别为99.90%和97.17%。WM84株与JL2株比较,核衣壳蛋白(N)、磷酸化蛋白(P)、基质蛋白(M)、融合蛋白(F)、小疏水蛋白(SH)、血凝素-神经氨酸酶蛋白(HN)、大蛋白(L)核苷酸序列同源性分别为为99.94%、99.92%、99.91%、99.81%、98.84%、99.94%、100%;氨基酸序列的同源性分别为100%、100%、99.73%、99.44%、98.23%、100%、100%。WM84株与JL5株比较,N、P、M、F、SH、HN、L蛋白核苷酸序列同源性分别为97.59%、96.84%、97.93%、97.02%、94.01%、97.02%、97.63%;氨基酸序列的同源性分别为98.72%、94.27%、98.39%、97.36%、90.82%、97.57%、99.42%。WM84株与JL2、JL5株SH蛋白的第29位和第48位氨基酸位点上无差异。WM84、JL2和JL5株均为A基因型,WM84株与JL2株的遗传距离低于与JL5株的遗传距离。结论 WM84株CEF 7代病毒与JL2株的同源性较高,其致病性、中和活性相关位点均未发生改变,表明WM84株具有稳定的免疫原性,其制备的疫苗安全有效。
- 陈晓琦魏树源肖健桂金柱祁春华姚新欣朱凌毅宰家敏郭长福张曦
- 关键词：流行性腮腺炎病毒全基因序列
- 流式分析WuTac与IL-2R的饱和度及其对健康人外周血淋巴细胞亚群的影响
- 研究背景人T淋巴细胞CD25抗原是人高亲和力IL-2受体(IL-2R)的α亚单位或称Tac亚单位,是被激活T淋巴细胞表面的主要标志性蛋白。利用单克隆抗体与IL-2R中的α
- 孙可芳杜雯张囡郭长福黎维勇赵亚杰张爱华
- 文献传递
