黄风迎
- 作品数：54 被引量：33H指数：3
- 供职机构：海南医学院更多>>
- 发文基金：海南省自然科学基金国家自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 猪和小鼠endoglin原核表达载体的构建及重组蛋白的诱导表达和纯化
- 2006年
- 目的:体外扩增猪和小鼠endoglin胞外段基因序列,构建猪和小鼠endoglin重组原核表达质粒,在大肠杆菌中诱导表达,并对表达产物进行分离、纯化和鉴定。方法:设计猪和小鼠endoglin胞外段基因序列的引物,利用RT-PCR技术扩增克隆猪和小鼠endoglin胞外段基因序列,通过限制性核酸内切酶酶切,然后用T7酶连接,构建猪和小鼠endoglin胞外段的原核表达质粒pQE-pEDG和pQE-mEDG。筛选的重组质粒经酶切和DNA序列测定等证实正确后,再转染感受态大肠杆菌JM109,用IPTG诱导表达。表达产物经Ni-NTA亲合层析进行分离纯化,最后用SDS-PAGE和免疫印迹法进行鉴定。结果:琼脂糖凝胶电泳发现扩增克隆的猪和小鼠endoglin胞外段基因序列分子量大小和预期值相一致,酶切分析显示,pQE-pEDG和pQE-mEDG和预期值相符,DNA序列测定显示,目的基因片段和阅读框架正确无误。重组蛋白质在大肠杆菌中获得稳定表达,表达的重组蛋白分子量与预期值相一致,纯化的蛋白浓度达90%以上,抗小鼠endoglin抗体可特异性识别pEDG和mEDG。结论:成功构建了猪和小鼠endoglin的原核表达载体,并在大肠杆菌中诱导表达并纯化,为进一步了解重组endoglin蛋白质作为疫苗是否可以有效诱导产生抗自身endoglin的免疫反应奠定了基础。
- 谭光宏魏于全田聆黄风迎
- 关键词：ENDOGLIN重组蛋白质
- 猪endoglin胞外段重组蛋白疫苗抗肿瘤作用机制研究
- 2006年
- 目的:研究猪endoglin胞外段重组蛋白(pEDG)作为异种蛋白疫苗是否能够诱导小鼠产生抗自身endoglin的免疫反应,从而抑制endoglin相关的肿瘤血管生成,进而抑制肿瘤的生长。方法:观察免疫治疗的荷瘤小鼠肿瘤体积和生存情况,用免疫组化方法(抗CD31)观察肿瘤组织血管生长并计算肿瘤微血管密度,用免疫荧光方法了解肿瘤血管自身抗体沉积,用Westernblot和ELISA方法检测荷瘤小鼠免疫治疗后的血清是否含有抗自身endoglin的抗体和抗体亚型,用ELISPOT方法检测荷瘤小鼠脾脏中分泌抗endoglin抗体的B淋巴细胞。结果:与同种重组endoglin蛋白和非疫苗对照组二个对照组相比,重组pEDG蛋白疫苗主动免疫治疗可以明显抑制小鼠肿瘤的生长,小鼠生存时间明显延长,肿瘤组织中血管生成明显减少,肿瘤组织血管表面有自身抗体沉积,血清中含有抗自身endoglin的抗体,抗体亚型主要为IgG1和IgG2b。此外,免疫治疗组小鼠脾脏中还发现明显增多的分泌抗自身endoglin抗体的B淋巴细胞。结论:pEDG疫苗诱导抗自身endoglin抗体的产生,从而抑制肿瘤血管生成和肿瘤生长。这种主动免疫治疗的方法有望成为治疗肿瘤的新策略。
- 谭光宏魏于全田聆黄风迎
- 关键词：ENDOGLIN肿瘤血管生成主动免疫治疗
- 重组异种同源蛋白FGFR1抗肿瘤作用的实验研究
- 郑少江谭光宏郑少萍吴人亮焦嫦亮黄风迎林岷格
- 该成果利用基因工程技术构建鸡和小鼠FGFR1的原核表达质粒，并表达和纯化了相应的重组蛋白质。用鸡FGFR1重组蛋白作为疫苗在小鼠肿瘤模型中进行单独或联合化疗抗肿瘤效应研究。结果发现，鸡FGFR1重组蛋白能诱导模型小鼠产生...
- 关键词：
- 关键词：重组蛋白抗肿瘤作用
- 毒毛旋花子阿洛糖苷诱导胃腺癌细胞SGC-7901凋亡作用及机制研究被引量：1
- 2015年
- 目的探讨毒毛旋花子阿洛糖苷诱导胃腺癌细胞SGC-7901凋亡作用及其机制。方法将人胃腺癌细胞SGC-7901分为对照组、0.125μg/ml组、0.250μg/ml组、0.500μg/ml组、1.000μg/ml组,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测毒毛旋花子阿洛糖苷对胃腺癌细胞SGC-7901的生长抑制作用,Hoechst染色和Annexin V-FITC/碘化丙啶(PI)流式细胞术检测细胞凋亡情况,JC-1法检测线粒体膜电位变化,Western blotting法检测线粒体途径相关蛋白细胞色素C、Caspase-3和Caspase-9的表达。结果 MTT结果显示,24 h和48 h时不同组胃腺癌细胞SGC-7901吸光度(A)、生长抑制率比较,差异均有统计学意义(P<0.05);组间两两比较胃腺癌细胞SGC-7901 A值依次降低、生长抑制率依次升高(P<0.05)。荧光显微镜下观察发现,对照组细胞核显示为蓝荧光且较均匀,0.500μg/ml组处理12 h后细胞核呈紧密较亮荧光体,颜色较白。不同组胃腺癌细胞SGC-7901总相对死亡率比较,差异有统计学意义(P<0.05);组间两两比较胃腺癌细胞SGC-7901总相对死亡率依次升高(P<0.05)。JC-1染色结果显示,毒毛旋花子阿洛糖苷处理胃腺癌细胞SGC-7901 12 h后,0.125μg/ml组、0.250μg/ml组、0.500μg/ml组显示绿色荧光,随毒毛旋花子阿洛糖苷浓度的增加绿色荧光增强。Western blotting法显示,随着细胞凋亡的发生,细胞色素C从线粒体中释放到细胞质中,同时,Caspase-3和Caspase-9也被激活并发生剪切活化,活化片段表达增加。结论毒毛旋花子阿洛糖苷通过线粒体凋亡途径诱导体外培养的人胃腺癌细胞SGC-7901凋亡。
- 张雪娇梅文莉蔡彩虹董文化姜北黄风迎戴好富
- 关键词：胃肿瘤线粒体
- 猪endoglin重组蛋白疫苗和低剂量顺铂联合治疗肿瘤研究被引量：5
- 2006年
- 目的:观察重组猪endoglin胞外段蛋白疫苗和化疗药物顺铂联合治疗是否具有更好的抗肿瘤作用。方法:在LL/2肺癌和CT26结肠腺癌二个肿瘤模型中观察重组猪endoglin蛋白疫苗和小剂量顺铂联合治疗(Cis-pEDG)、顺铂(Cis)和疫苗(pEDG)单独治疗及非治疗(生理盐水,NS)组荷瘤小鼠不同时间段的肿瘤体积和生存时间,抽血检测肝、肾功能,用免疫组化方法(抗CD31)观察肿瘤组织血管生长并计算肿瘤微血管密度,Westernblot方法检测各组荷瘤小鼠血清中是否含有抗自身endoglin的抗体,ELISPOT方法检测荷瘤小鼠脾脏中分泌抗自身endoglin抗体的B淋巴细胞,TUNEL检测肿瘤细胞凋亡。结果:和Cis、pEDG和NS相比,Cis-pEDG联合治疗组荷瘤小鼠的肿瘤体积明显减少,生存时间明显延长,肿瘤微血管密度明显减少,肿瘤细胞凋亡明显增加,3个指标计算的协同指数均大于1。Cis-pEDG和pEDG治疗组小鼠血清中均含有抗小鼠endoglin的抗体,两组荷瘤小鼠的脾脏中含有的分泌抗小鼠endoglin的B淋巴细胞数量明显高于Cis和NS组,而Cis和NS组之间的B淋巴细胞数量无显著性差异;各组荷瘤小鼠外周血白细胞及肝、肾功能没有明显异常。结论:猪endoglin蛋白疫苗和小剂量顺铂联合治疗没有明显的不良反应,但具有协同抗肿瘤作用,小剂量顺铂治疗不导致免疫抑制,二者联合是一种行之有效的肿瘤治疗新策略。
- 谭光宏魏于全田聆黄风迎
- 关键词：ENDOGLIN重组蛋白顺铂疫苗肿瘤血管生成
- 一种硫化钌纳米点及其制备方法
- 本发明公开了一种硫化钌纳米点及其制备方法，属于无机纳米材料制备领域。其制备方法包括：1)制备二乙基二硫代氨基甲酸钌；2)将二乙基二硫代氨基甲酸钌用乙醇溶解制成1％-5％g/mL的溶液，加入其溶液体积1-3倍的油酸，搅拌混...
- 吕卓璇张立明黄风迎谭光宏周松林赵焕阁林映莹
- 文献传递
- 基于荧光染料与考马斯亮蓝共结合的亲和素纳米粒及其制备方法和在构建肿瘤疫苗中的应用
- 本发明公开了一种荧光染料与考马斯亮蓝共结合的亲和素纳米粒的制备方法，包括以下步骤：将荧光染料与亲和素按照一定质量比混合，搅拌反应过夜，再加入考马斯亮蓝搅拌反应，超滤或透析除去杂质，用缓冲溶液分散获得亲和素纳米粒子。该亲和...
- 张立明吕卓璇张艳伟谭光宏黄风迎曹榕
- 细菌表面抗原Ag43表达系统的构建方法
- 本发明提供一种可以和细菌表面抗原Ag43嵌合表达的原核表达系统的构建方法。来源于大肠杆菌JM109的Ag43基因敲除细菌Tan109和重组质粒pET-Ag43作为一个有效的原核基因表达系统，可以将外源基因嵌合于Ag43的...
- 谭光宏黄风迎赵焕阁黄用豪王华周松林
- 文献传递
- 小型化免疫偶联物Fab-ADM抗肿瘤机制的初步探讨
- 2012年
- 目的:探讨小型化的免疫偶联物Fab-ADM的抗肿瘤机制。方法:建立小鼠肝癌细胞H22及小鼠黑色素瘤细胞B16的皮下移植瘤模型,分别予以生理盐水及ADM、Fab-ADM治疗,治疗结束后取肿瘤组织制备石蜡切片进行HE染色,并通过CD34进行免疫组织化学染色以计数肿瘤微血管。结果:在2种动物模型中,Fab-ADM治疗组小鼠瘤体内可见肿瘤细胞的大片状坏死,微血管密度明显减少,与生理盐水对照组及ADM治疗组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Fab-ADM偶联物较游离ADM具有更强的肿瘤抑制作用,其可显著抑制肿瘤微血管密度的增加,继而引起肿瘤细胞的大面积坏死。
- 李灵黄风迎黄幼生郭峻莉黄用豪王华
- 关键词：微血管密度抗肿瘤机制
- 血管内皮生长因子和组织因子融合蛋白靶向诱导肿瘤新生血管栓塞的实验研究
- 谭光宏黄风迎王华黄用豪夏立平
- 该研究利用肿瘤新生血管特异表达血管内皮细胞生长因子(VEGF)受体(可以特异性地和VEGF结合)这一特性，用基因工程技术将VEGF和血液凝固级联反应关键启动因子-组织因子(TF)的基因通过软接头连接成一个融合基因，在埃希...
- 关键词：
- 关键词：细胞生长因子融合蛋白肿瘤治疗
