齐顺章
- 作品数：58 被引量：353H指数：11
- 供职机构：中国农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金河北省自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生化学工程更多>>
- 用动物乳房生产人的生长激素
- 本发明提供了一种可在动物乳腺组织中表达并且其产物与天然人生长激素相同的人生长激素基因,还提供了将所述基因置于特定启动子控制之下转移生产转基因动物的方法,所述动物可在其奶中产生人的生长激素,从而提供了利用动物乳房作为反应器...
- 陈永福郭志勤陈东杨国庆齐顺章戴蕴平
- 文献传递
- 腺病毒介导的含第一内含子pGH cDNA在CHO细胞中的表达被引量：3
- 2002年
- 通过同源重组的方法分别构建了在CMV启动子控制下的带有第一内含子和不带内含子的pGHcDNA基因的重组腺病毒。通过感染CHO细胞表明 ,构建的重组腺病毒能够介导pGH基因在CHO细胞中表达 ,加入第一内含子的pGHcDNA基因的表达效率比不加内含子的提高了 117% ,这说明pGH基因的第一内含子有促进该基因在真核细胞中表达的功能。
- 李秀锦仲飞王辛中齐顺章
- 关键词：猪生长激素基因第一内含子腺病毒载体CHO细胞
- 用dhfr非缺陷型细胞高效表达EPO基因的研究
- 1998年
- 用我们所克隆的促红细胞生成素 (EPO)基因组基因 ,构建了表达载体 pRSV/EPO .用脂质体法转染CHO K1 2细胞 ,在 40 0 μg/mL的G41 8浓度下筛选到了稳定表达EPO的细胞株 ,表达量约为每天每 1 0 6细胞 1 6 0IU .在此基础上又构建了带有潮霉素B抗性的二氢叶酸还原酶 (dhfr)基因表达载体 pHY/dhfr,再将这一表达载体用脂质体方法导入C1 0细胞中 ,经2 0 0 μg/mL的潮霉素B筛选 ,获得了部分潮霉素B抗性的细胞株 ,这些细胞株既能表达EPO又能表达外源的dhfr基因 ,经 1 μmol的氨甲喋呤 (MTX)加压筛选 ,获得了表达量为每天每1 0 6细胞 2 40 0IU的高表达细胞克隆 ,表达量提高了 1 0～ 1 5倍 .初步建立了用非dhfr缺陷型细胞高效表达外源基因的方法 ,这一方法在生产上有实际意义 ,在理论上值得进一步研究 .用TF 1细胞对EPO进行了生物活性检测 。
- 崔振中刘朋朋齐顺章沈恒
- 关键词：促红细胞生成素DHFR基因表达
- 定点突变的人胰岛素基因在CHO细胞表达的研究被引量：2
- 1999年
- 目的 研究在哺乳动物细胞中表达人胰岛素。方法 采用寡核苷酸介导的定点突变方法，改造人胰岛素基因组基因，将哺乳动物细胞内蛋白质前体加工酶Ｆｕｒｉｎ 的识别和切割位点Ａｒｇ－Ｘ－Ｌｙｓ－Ａｒｇ－样序列，引入人胰岛素原Ｃ肽两端，在普通ＣＨＯ细胞表达了该改造后的基因。结果 首先应用突变引物Ⅰ：ＣＴＧＣＡＧＧＴＣＣＴＣＧＣＧＣＴＴＣＣＧＧＣＧＧＧＴＣ，引物Ⅱ：ＣＡＣＧＣＴＴＣＴＧＣＣＧＧＧＡＴＣＣＣＴＣ，按照Ｋｕｎｋｅｌ的方法，成功地进行了人胰岛素基因上两个位点的同时突变改造。利用表达载体ＰＲＣ／ＣＭＶ和突变后的胰岛素基因，构建成表达载体ＣＭＶ／ＭＩＮＳ，并在ＣＨＯ细胞中获得了表达。结论 用ＲＩＡ法检测在暂态表达的ＣＨＯ细胞培养液中人胰岛素的表达量为５．５～７０．０μＩＵ／５×１０６ 细胞·ｄ－ １。同时，还利用Ｇ４１８进行了胰岛素表达细胞株的筛选，筛选出的ＣＨＯ细胞株的表达量为：６．５～２５．５μＩＵ／５×１０６细胞·ｄ－ １。
- 寿思明朱宝利崔振中齐顺章
- 关键词：人胰岛素定点突变基因表达CHO细胞糖尿病
- 含第一内含子猪生长激素cDNA基因在COS7细胞中的表达被引量：5
- 2003年
- 以CMV真核生物启动子构建了含第一内含子猪生长激素(pGH)cDNA基因(pGHcDNA in)的表达载体,经DEAE 葡聚糖介导在COS7细胞进行了瞬时表达,通过PP95生物学测定法测定,证明含第一内含子pGHcDNA基因能够在真核细胞中进行分泌性表达,表达出的pGH具有生物学活性。这说明通过该基因转录出的前体mR NA能够在COS7细胞中进行正确剪接,从而翻译出具有生物活性的pGH。加入第一内含子在一定程度上可提高pGHcDNA基因的表达效率。
- 李秀锦仲飞齐顺章
- 关键词：第一内含子生长激素CDNA基因COS7细胞
- 水貂生长激素释放激素cDNA及其应用
- 本发明公开了水貂生长激素释放激素cDNA基因的全长核苷酸序列和成熟肽的核苷酸序列以及其分别编码的蛋白质的氨基酸序列。水貂的生长激素释放激素的cDNA序列是一个完整的开放阅读框，共321个核苷酸序列，共编码106个氨基酸；...
- 王吉贵刘维全刘芃芃齐顺章
- 猪生长激素cDNA的分子克隆被引量：2
- 1989年
- 用改进的氯化锂沉淀沉法和寡聚(dT)一纤维素亲和层析法由猪垂体制得总mRNA。以此总mRNA为模板,合成cDNA。钝端连接重组到质粒pUC19的SmaI位点,转化E.coli JM107,筛选出阳性克隆。用限制性内切酶酶切签定及5’端部分核苷酸序列分析证明:克隆了全长猪生长激素cDNA,其长度约为896bp。
- 贾锋夏立王辛中齐顺章
- 关键词：生长激素CDNA分子克隆
- 牛BLG基因5'调控成分的克隆和制备乳腺生物反应器研究被引量：37
- 1996年
- 用PCR法克隆了牛β-乳球蛋白(BLG)基因的 1个片段,它包括 650 bp的 5’侧翼序列,第一二外显子和第一内含子.以该片段中的 650 bP的侧翼序列及转录起始位点下游 11 bP的非编码区(共 661 bP)作为调控序列,与人生长激素(hGH)基因构建成了表达载体,在培养的原代山羊乳腺上皮细胞中进行暂时表达,结果在激素诱导下, hGH基因能够表达,并且表达产物的绝大部分分泌到培养基中.将上述表达载体中的BLG/hGH融合基因部分经显微注射法制得5只转基因阳性小鼠,其中1只小鼠乳清中hGH的含量为420 μg/mL而血清中仅为0.051μg/mL,说明本实验克隆的牛BLG基因5’调控序列可以控制目的基因在转基因动物中表达,基本上具有乳腺特异性,而且产物能分泌至乳汁中.
- 杨国庆戴蕴平朱宝利陈永福齐顺章
- 关键词：乳腺生物反应器生物制品
- 用低G/C%含量引物通过PCR扩增家蝇细胞色素P-450 cDNA被引量：12
- 1998年
- 根据昆虫细胞色素Ｐ－４５０基因的多型性和遗传多态性，以苯巴比妥钠诱导、室内饲养的杀虫剂敏感种群雌性家蝇ＭｕｓｃａｄｏｍｅｓｔｉｃａｖｉｃｉｎａＭａｃｑｕａｒｔ为材料，提取总ＲＮＡ，以Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）－纤维素亲和层析分离出总ｍＲＮＡ；以此为模板反转录合成总ｃＤＮＡ。再以总ｃＤＮＡ为模板，以Ｐ－４５０ＣＹＰ６Ａ１ｃＤＮＡ序列为参考设计一对低Ｇ／Ｃ％含量引物，进行ＰＣＲ扩增，获得１．５ｋｂ左右的预期目的片段。
- 康巧华陈年春周顺伍齐顺章
- 关键词：家蝇细胞色素P-450CDNAPCR遗传多态性
- 人促红细胞生成素基因组基因的克隆及全序列分析被引量：2
- 1998年
- 为了克隆到全长的人促红细胞生成素基因，从而在真核系统中及转基因动物乳腺中进行表达，从一个中国人的血细胞中提取基因组ＤＮＡ，构建了不完全基因组噬菌体文库，文库效价为５×１０４．这种文库的构建方法是用ＢａｍＨⅠ对基因组ＤＮＡ进行完全酶切，回收１０．５ｋｂ左右的酶切片段，插入到λ－噬菌体ＥＭＢＬ３载体中．筛选文库所使用的探针是用ＰＣＲ方法从基因组ＤＮＡ模板中扩增的５５６ｂｐ的ＥＰＯ基因片段．从该文库中筛选到了一个含有完整ＥＰＯ基因的插入片段长度为１２．５ｋｂ的阳性克隆．经全序列分析证实，所克隆的ＥＰＯ基因编码正确，但在５′－侧翼及第一内含子处与国外发表的序列相比较，发现两处核苷酸差异，这两个核苷酸的差异改变了５′－调控区的两个小的开放阅读框——ＯＲＦ１和ＯＲＦ３，其在基因表达调探方面的作用值得进一步探讨．
- 崔振中崔振中寿思明刘朋朋朱宝利
- 关键词：基因文库促红细胞生成素PCREPO
