冯玮
- 作品数：76 被引量：214H指数：9
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 噬菌体展示TM-TNF-α模拟肽体内杀瘤效应的研究被引量：1
- 2005年
- 目的 研究噬菌体展示TM -TNF- α模拟肽的体内杀瘤效应及机制。方法 大量制备所需的噬菌体展示肽,比较不同展示肽对小鼠的肝癌细胞H2 2的体外杀瘤效应,挑取杀瘤效应最好的展示肽并选择其合适的滴度进行体内实验。小鼠接种H2 2细胞3d后,于肿瘤接种部位皮下注射噬菌体展示肽,观察肿瘤的生长情况。结果 噬菌体展示TM- TNF -α模拟肽在体内能明显抑制肿瘤的生长(P <0 .0 1)。且抑瘤率与展示肽之间呈剂量依赖关系。HE染色发现展示肽治疗组肿瘤组织中有大量淋巴细胞浸润,而sTNF- α治疗组除淋巴细胞浸润还可见中性粒细胞、浆细胞浸润。结论 直接注射噬菌体展示TM -TNF -α模拟肽可在体内有效杀瘤,其杀瘤机制可能不同于分泌型TNF -α。
- 熊霞辉喻明霞石文芳李清芬林莉冯玮徐勇李卓娅
- 关键词：TM-TNF-Α噬菌体展示杀瘤效应模拟肽分泌型TNF-Α肝癌细胞H22
- 比较跨膜型与分泌型TNF-α在体内的杀瘤效应被引量：9
- 1999年
- 目的:比较分泌型和跨膜型TNF-α在体内抗瘤作用的异同.方法:在肿瘤局部直接注射3种TNF-α(野生型TNF-α重组体、跨膜型及分泌型TNF-α突变体)基因,观察其抗瘤效应 结果:3种TNF-α均能有效表达。并具明显抑瘤效应,跨膜型TNF-α突变体对早期肿瘤的仰制效应明显高于其它2种TNF-α(P<0.01),而野生型TNF-α对中肿瘤的抗瘤效应则最佳.此外,注射3种TNF-α裸DNA均未观察到明显副作用,结论:分泌型和跨膜型TNF-α抑瘤机制可能下同,裸DNA直接用于细胞因子基因治疗较安全。
- 李清芬冯玮李卓娅龚非力姜晓丹徐勇熊平
- 关键词：跨膜型TNF-Α分泌型抗瘤效应
- 非何杰金氏淋巴瘤来源的NK92细胞杀伤异种细胞的细胞模型建立
- 2005年
- 目的 建立非何杰金氏淋巴瘤来源的NK92细胞杀伤异种细胞的细胞模型。方法常规培养NK92细胞和猪内皮细胞(PEC)，利用MTT法检测NK92细胞对PEC细胞的杀伤效应，通过β-hexosaminidase释放实验显示杀伤过程中，NK92细胞的胞吐量。结果效靶比为10：1时作用时间6h，NK92细胞的胞吐量最大，对PEC的杀伤率为100％。结论NK92细胞杀伤异种细胞的细胞模型建立成功。
- 姜小丹吴群熊平冯玮郑芳龚非力
- 关键词：非何杰金氏淋巴瘤细胞杀伤MTT法检测杀伤效应EC细胞胞吐
- 87位氨基酸在TM-TNF-α诱导靶细胞凋亡中的作用被引量：1
- 2004年
- 目的 研究TM TNF α分子结构与功能的关系 ,阐明其诱导靶细胞凋亡的分子机制。方法 构建定点突变的 87/PheTM TNF pcDNA3.0 ,并瞬时转染Cos 7细胞 ,利用MTT法 ,annexinⅤ ,Westernblot检测TM TNF α突变体的胞毒效应 ,对靶细胞死亡方式及对核转录因子NF κB转位的影响。结果 87位氨基酸置换后 ,TM TNF α对靶细胞的杀伤率无明显改变 ,但TM TNF α突变体通过促进NF κB核转位 ,诱导靶细胞死亡的方式由凋亡转为坏死。结论 87位氨基酸是TM TNF α诱导靶细胞凋亡的关键氨基酸残基 。
- 郑芳姜小丹冯玮龚非力李卓娅
- 关键词：靶细胞凋亡坏死MTT法定点突变
- TNF-SP-EGFP融合蛋白的构建表达及亚细胞定位被引量：2
- 2007年
- 目的探讨肿瘤坏死因子信号肽(TNF-SP)在哺乳动物细胞的表达和亚细胞定位。方法采用聚合酶链反应(PCR)技术,以TNF-SP-pcDNA3.0质粒为模板扩增TNF-SP基因,采用PCR产物的粘端克隆法,将TNF-SP定向克隆入pEGFP-N1的多克隆位点,构建TNF-SP-EGFP重组质粒,酶切,PCR检测,序列分析鉴定,采用脂质体转染法,将TNF-SP-EGFP融合基因转染COS-7细胞进行表达,经碘化丙啶(PI)染色后以激光共聚焦显微镜分析融合蛋白的表达及其亚细胞定位。结果PCR检测,酶切鉴定及测序证实目的基因TNF-SP正确连接到pEGFP-N1的多克隆位点。TNF-SP-EGFP重组体转染COS-7后,激光共聚焦显微镜显示TNF-SP-EGFP在细胞质表达。结论成功地构建了TNF-SP-EGFP融合蛋白真核表达质粒,在COS-7细胞中获得表达,并证实其定位于细胞质。
- 朱建华王晶梁慧芳秦娜琳庞燕程熠杨薇吴乙璇冯玮姜晓丹李卓娅
- 关键词：绿色荧光蛋白融合蛋白
- 重组肿瘤坏死因子-α抗血清对大鼠实验性结肠炎的影响被引量：2
- 2005年
- 目的探讨灌胃给予肿瘤坏死因子α(TNFα)多克隆抗体对溃疡性结肠炎的作用。方法以50mg/kg三硝基苯磺酸(TNBS)经肛门注入大鼠肠腔,复制大鼠溃疡性结肠炎模型;用兔抗人TNFα多克隆抗体血清10mg/kg给大鼠灌胃,观察一氧化氮(NO)含量、髓过氧化物酶(MPO)活性及TNFα在大鼠溃疡性结肠炎组织中的表达。结果抗TNFα多克隆抗体治疗可明显减轻溃疡性结肠炎的病理改变,抑制局部结肠组织NO的产生、MPO活性以及TNFα表达。结论抗TNFα血清通过中和TNFα,可抑制溃疡性结肠炎结肠组织表达TNFα及炎性介质的释放,从而减轻溃疡性结肠炎的病理损伤。
- 姜小丹尹丙姣石文芳冯玮徐勇李卓娅
- 关键词：溃疡性结肠炎肿瘤坏死因子-Α
- 人跨膜型TNF-α(TM-TNF-α)特异性单克隆抗体的制备、鉴定及功能初探
- 2007年
- 目的:制备TM-TNF-α特异性单克隆抗体,并进行鉴定和初步功能分析。方法:用表位预测软件选定TM-TNF-α特异的20个氨基酸多肽,偶联载体蛋白,免疫BALB/c小鼠;用杂交瘤技术制备单克隆抗体。采用ELISA、流式细胞术和Western blot鉴定单抗的特异性,观察单抗对Jurkat细胞在AICD模型中凋亡率的影响。结果:成功制备了6株抗TM-TNF-α的单克隆抗体。ELISA结果显示6株单抗均特异性结合免疫原多肽,与S-TNF-α等细胞因子无交叉反应;流式细胞术显示6株单抗均能结合细胞膜表面TM-TNF-α分子,并可区分人源和鼠源TM-TNF-α;Western blot结果证实6株单抗只能识别26kD的人TM-TNF-α,而不识别17kD的S-TNF-α。在AICD模型中,单克隆抗体不影响Jurkat细胞凋亡率。结论:成功制备了6株TM-TNF-α特异性单克隆抗体,且单抗不干扰TNF-α与TNFR结合,为进一步研究TM-TNF-α在相关疾病中的作用提供又一研究手段。
- 柯杭君喻明霞王晶石文芳姜小丹冯玮李卓娅
- 关键词：跨膜型TNF-Α单克隆抗体杂交瘤技术
- 跨膜型肿瘤坏死因子-α胞内段基序稳定表达细胞株的建立及功能研究
- 2007年
- 目的建立高表达跨膜型肿瘤坏死因子-α胞内段(TNF-intracellular domain,TNF-ICD)基序的人乳腺癌MCF-7细胞株,为研究TM-TNF-α的反向信号提供工具。方法采用脂质体介入法将含人TNF-ICD的pIRES2-EGFP病毒载体导入MCF-7中,经鉴定、筛选获得能稳定表达TNF-ICD细胞株。采用MTT法检测转染细胞对TNF-α的敏感度,比色法检测NO含量,ELISA方法检测NF-κB的活性。结果TNF-ICD基因转染入MCF-7细胞后表达在细胞膜上,并能提高该细胞NF-κB活性,抵抗TNF-α的杀伤,增加其NO产生;应用NF-κB抑制剂PDTC处理后能恢复该细胞对TNF的敏感性。结论获得稳定表达TNF-ICD的MCF-7细胞株,TNF-ICD可能作为TM-TNF-α细胞内的一段活化基序参与TM-TNF-α的反向信号,并通过活化NF-κB,抵抗可溶性TNF-α介导的细胞毒作用,增加NO的产生。
- 秦娜琳尹丙姣王妮丹朱建华庞艳姜小丹冯玮李卓娅
- 关键词：反向信号MCF-7细胞
- TM-TNF-α结构与功能的关系
- 肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)具有多种生物学功能,其在体内以跨膜型(Transmembrane TNF-α,TM-TNF-α)和分泌型(secreted TNF-α,S-T...
- 郑芳姜晓丹徐勇熊平冯玮李卓娅
- 文献传递
- 跨膜型TNF-α细胞毒作用与其功能域的关系被引量：2
- 2003年
- 目的 :探讨跨膜型TNF α(TM TNFα)的细胞毒作用及其功能域的关系。方法 :采用重组PCR对TM TNFα基因进行定点突变 ,在微粒体膜的存在下体外转录、翻译突变体 ,并观察这些突变体的胞毒作用。结果 :通过重组PCR分别获得TM TNFα第 - 71、31、35、87、95、14 3与 14 7位氨基酸置换的突变体 ,这 7种突变体对L92 9细胞系的细胞毒作用 ,与野生型TM TNFα相比 :第 - 71、14 3位氨基酸单个置换使TM TNFα胞毒作用下降 4倍以上 ,35、95、14 7位单个置换使TM TNFα胞毒作用下降1 5～ 2 5倍 ;而第 31、87与 133位氨基酸突变则对TM TNFα杀伤作用无影响。结论 :除 - 71位氨基酸外 ,以上 6个位点的氨基酸均参与分泌型TNF α(S TNFα)的胞毒功能 ,提示TM TNFα和S TNFα发挥细胞毒功能的功能域可能不完全相同。
- 郑芳李卓娅龚非力姜晓丹熊平冯玮徐勇
- 关键词：跨膜型功能域
