刘秋平
- 作品数：15 被引量：8H指数：1
- 供职机构：第四军医大学唐都医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- CD81介导丙型肝炎病毒入胞作用的研究
- 2006年
- 丙型肝炎病毒（HCV）感染呈全球分布，全世界约有1．7亿HCV感染者，占世界人口的3％，是人类免疫缺陷病毒-1感染者的5倍。约70％HCV感染者转化为慢性，并与肝硬化、肝衰竭和肝癌的发生密切相关。迄今为止，对于HCV的嗜肝性尚无合理解释，参与HCV识别、黏附及入胞的肝细胞表面分子还不完全清楚。CD81属于四次跨膜超家族成员，能够与HCV包膜糖蛋白E2结合，有学者认为其可能是HCV的特异性受体。为验证CD81介导HCV包膜蛋白及HCV颗粒入胞能力，我们构建含人CD81基因及HCV包膜蛋白E2661与人IgG1-hcγ1融合蛋白的真核表达载体并进行真核表达。将HCV包膜蛋白或HCV阳性血清与稳定表达CD81的细胞株共同孵育，检测细胞内HCV包膜蛋白及HCV的mRNA，观察了CD81介导HCV包膜蛋白及HCV颗粒入胞能力。
- 贾战生杜德伟刘秋平王春雨秦鸿雁魏欣赵甫涛李光玉韩骅
- 关键词：包膜糖蛋白
- 人中性粒细胞多肽1,3真核表达载体的构建与鉴定被引量：3
- 2004年
- 目的 :扩增人中性粒细胞多肽 1,3(HNP1,3)基因片段 ,构建真核表达载体pcDNA3.1/V5 His TOPO/HNP1,3。 方法 :从健康人中性粒细胞中提取总RNA ,用RT PCR方法扩增出HNP1,3基因完整的cDNA片段 ,应用TA克隆插入pMD18 T载体 ,经酶切鉴定及序列分析确证后 ,将其亚克隆至真核表达载体 pcDNA3.1/V5 His TOPO中。 结果 :从人中性粒细胞中克隆出人HNP1,3基因 ,经测序分析与GenBank公布的人HNP1,3核苷酸序列同源性为 10 0 % ,成功地构建了真核表达载体pcDNA3.1/V5 His TOPO/HNP1,3。 结论 :真核表达载体pcDNA3.1/V5 His TOPO/HNP1,3的成功构建 ,为后续重组基因的真核 /表达及其对HIV
- 刘娟孙永涛杜德伟李光玉刘秋平翟嵩
- 关键词：基因克隆
- 融合His标签的HCV包膜糖蛋白E2的真核表达及意义被引量：1
- 2004年
- 目的 构建HCV包膜糖蛋白E2与His标签融合的真核表达载体并在CHO细胞中表达 ,为研究HCV包膜糖蛋白的功能奠定基础。方法 利用PCR技术从HCV基因组序列中扩增出编码HCV包膜糖蛋白E2的基因 ,将其插入原核表达载体pET2 8(a)载体中 ,构建pET2 8(a) HCVE2 ,从pET2 8(a) HCVE2上获得His HCVE2融合基因 ,插入pcDNA3 1,构建表达HCV包膜糖蛋白E2与His标签融合蛋白的真核表达载体pcDNA3 1 His E2。用脂质体介导法将pcDNA3 1 His E2转染CHO细胞 ,通过间接免疫荧光、Westernblot检测融合蛋白在CHO细胞内的表达。结果 转染HCVE2与His融合基因的真核表达载体的CHO细胞内有融合蛋白的表达。结论 与His标签融合的HCV包膜糖蛋白E2能够在CHO细胞内表达。
- 杜德伟贾战生秦鸿雁孙强刘秋平聂青和周永兴韩骅
- 关键词：融合基因真核表达
- 胎儿骨髓间充质干细胞的培养及其向肝细胞样细胞的诱导分化
- 目的建立稳定的胎儿间充质干细胞（FMSCs）体外培养扩增体系,探索其在体外诱导为肝细胞样细胞的分化潜能。方法通过密度梯度离心、贴壁筛选法分离培养人FMSCs,应用流式细胞术检测其特异表面标志物的表达。加HGF、FGF-4...
- 魏欣贾战生王春雨刘秋平李光玉李羽白雪帆
- 关键词：间充质干细胞细胞培养诱导分化
- 胎儿骨髓间充质干细胞的培养及其向肝细胞样细胞的诱导分化
- 目的建立稳定的胎儿间充质干细胞(FMSCs)体外培养扩增体系,探索其在体外诱导为肝细胞样细胞的分化潜能。方法通过密度梯度离心、贴壁筛选法分离培养人FMSCs,应用流式细胞术检测其特异表面标志物的表达。加HGF、FGF-4...
- 贾战生魏欣王春雨刘秋平李光玉李羽白雪帆
- 文献传递
- HCV包膜糖蛋白E2基因的克隆、蛋白表达及纯化被引量：1
- 2004年
- 目的:获得大量重组HCVE2蛋白,为研究E2蛋白的功能及制备其抗体奠定基础.方法:利用PCR方法从HCV基因组序列中扩增出831bp(384-661aa)的E2基因片段并按读框克隆到原核表达载体pET32a(+)上,得到重组质粒pET32a-HCVE2,转化大肠杆菌BL-21(DE3)菌株,IFFG诱导HCVE2蛋白表达,SDS-PAGE和Westernblot检测蛋白表达,Ni-NTA偶联的琼脂糖黏附柱纯化融合蛋白.结果:经IPTG诱导后,可见分子量约55000的融合蛋白表达;表达的蛋白主要以包涵体形式存在;经Ni-NTA偶联的琼脂糖黏附柱纯化的融合蛋白与抗His抗体及HCV阳性血清具有良好的反应原性.结论:HCVE2基因的克隆、表达及其融合蛋白的纯化为进一步开展HCVE2蛋白功能和HCV受体的研究奠定了基础.
- 杜德伟贾战生秦鸿雁刘秋平周永兴韩骅
- 关键词：E2基因克隆蛋白表达抗体肝硬化
- 人B型Ⅰ族清道夫受体(SR-BI)介导HCV入胞
- 目的原核及真核表达HCV包膜蛋白,制备多抗血清;观察SR-BI在HCV包膜糖蛋白及HCV颗粒进入细胞过程中的作用。方法利用PCR方法从HCV基因全序列的质粒(pBRTMHCV3010)中扩增出编码HCV包膜糖蛋白E1+E...
- 杜德伟贾战生秦鸿雁李巍孙强刘秋平周永兴韩骅
- 文献传递
- 人中性粒细胞多肽1真核表达载体的构建与表达
- 2004年
- 目的 构建人中性粒细胞多肽 1(HNP1)基因真核表达载体 ,为探讨HNP1基因工程生产的可能性奠定基础。方法 从健康人中性粒细胞中提取总RNA ,用RT PCR方法扩增出HNP1基因cDNA片段 ,将纯化PCR产物与pMD18 T载体连接 ,经酶切鉴定及测序确证 ,将其亚克隆入真核表达载体pcDNA3 1/V5 His TOPO中 .用脂质体转染COS 7细胞 ,用BA ELISA法检测转染细胞上清中HNP1的表达。结果 从人中性粒细胞中克隆出人HNP1基因 ,经测序分析与GenBank公布的人HNP1核苷酸序列完全一致 ,并在COS 7细胞中获高效瞬时表达。结论 成功构建了真核表达载体pcDNA3 1/V5 His TOPO/HNP1,为后续哺乳动物工程细胞株的建立奠定了实验基础。
- 刘娟孙永涛李光玉刘秋平翟嵩王福祥
- 关键词：人中中性粒细胞真核表达载体多肽PCDNA3T载体PCR产物
- pcDNA3.1-CD81载体在人肝癌细胞中的表达及意义被引量：1
- 2005年
- 目的 研究人白细胞分化抗原CD81真核表达载体pcDNA 3 .1 CD81在人肝癌细胞系HepG2 中的表达及意义。方法 由人Molt 4细胞提取细胞总RNA ,根据已公布的序列设计引物 ,运用RT PCR及PCR方法扩增出人CD81基因 ,应用TA克隆插入PMD 18T载体 ;定向克隆入真核表达载体pcDNA 3 .1(+ ) ;通过脂质体介导转染人肝癌细胞系HepG2 ,用免疫组织化学方法 (ABC法 )及流式细胞技术检测目的蛋白的表达。结果 由RT PCR及PCR方法扩增出人CD81编码基因与Genebank公布的序列完全一致。重组真核表达载体pcDNA 3 .1 CD81经酶切和PCR鉴定分析正确。免疫组织化学方法 (ABC法 )及流式细胞技术证明转染的HepG2 细胞表面能有效地表达CD81蛋白。结论 所构建的pcDNA3 .1 CD81真核表达载体在HepG2 细胞有良好的表达 ,该转染细胞可作为研究CD81在HCV感染中的作用提供细胞模型 ,为研究丙型肝炎病毒 (HCV)与CD81相互作用奠定基础。
- 刘秋平贾战生
- 关键词：CD81人肝癌细胞PCDNA3T载体MOLT-4定向克隆
- HCV E1/E2-Fc融合基因真核载体的构建及表达产物的鉴定
- 2004年
- 目的 构建表达HCV包膜糖蛋白 E1+E2661及E2661与人IgG Fc融合蛋白的真核表达载体并在COS-7中表达E1+E2661及E2661与人IgG Fc的融合蛋白,为研究HCV包膜糖蛋白的功能及其与细胞表面受体相互作用奠定基础。方法 利用PCR 方法从HCV基因组序列中扩增出编码HCV包膜糖蛋白El+E2661及E2661的基因,再将两段基因片段亚克隆到含有人IgG Fc基因的Pblue-scriptⅡSK-hc γ1载体中,获取El+E2661及E2661与hc γ1的融合基因并插入真核表达载体pEF BOSneo,构建表达HCV E1+E2661及E2661与 hc γ1的融合蛋白的真核表达载体;用脂质体介导转染COS-7细胞;RT-PCR检测COS-7细胞内融合基因,直接免疫荧光、ELISA、Western blot检测COS-7细胞培养上清及细胞内融合蛋白的表达。结果DNA测序结果证实插入片段即是HCV E1+E2661及E2661与HC γ1的融合基因;直接免疫荧光、ELISA、Western blot均检测到融合蛋白的表达。结论 pEF BOSHCV E1+E2661/Fc pEF—BOSHCV E2661/Fc真核表达载体构建成功,并能够在COS-7细胞中表达分泌性有活性的融合蛋白。
- 杜德伟贾战生秦鸿雁刘秋平周永兴韩骅
- 关键词：HCV
